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World File Search System单子叶
一种高效、可重复的农杆菌介导的观赏单子叶植物虎眼万年青的遗传转化方法
悬浮培养物对光照作出反应并开始分化，我们确定了光照后接种农杆菌的最佳时间。为此，将 O. dubium 细胞培养物在接种农杆菌前 0、5、10、15 和 20 天转移到光照下（图 3b）。接种农杆菌后，培养物在选择培养基中再生长十周。值得注意的是，虽然暗生长培养物的转化产生了两个转化子，但接种前 5、10、15 和 20 天暴露在光照下的培养物分别产生了 15、6、19 和 14 个卡那霉素抗性芽，其中 4、6、6 和 5 个芽（共 21 个芽）从第 21 天开始显示出弱的 RFP 荧光（图 4a、b、c）。经过挑选，绿色健康
使用 PlantPegDesigner 和工程植物引物编辑器 (ePPE) 优化单子叶植物的引物编辑
引物编辑器 (PE) 可以在不造成供体 DNA 或双链断裂的情况下安装所需的碱基编辑，已用于植物，原则上可以加速作物改良和育种。然而，它们在植物中的编辑效率通常较低。通过基于熔化温度设计序列来优化引物编辑向导 RNA (pegRNA)、使用双 pegRNA 和工程 PE 均已被证明可以提高 PE 效率。此外，基于水稻引物编辑实验数据开发了一个自动化 pegRNA 设计平台 PlantPegDesigner。在本方案中，我们介绍了使用 PlantPegDesigner 设计和优化 pegRNA、构建具有增强编辑效率的工程植物 PE 载体进行引物编辑、使用报告系统评估引物编辑效率以及通过深度扩增子测序比较 PE 的有效性和副产物的详细方案。利用该方案，研究人员可以在4 – 7天内构建优化的用于引物编辑的pegRNA，并在3个月内获得引物编辑的水稻或小麦植物。