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使用 CRISPR-Cas9 系统评估与耳念珠菌卡泊芬净耐药性相关的新型 FKS1 R1354H 突变
1 长崎大学生物医学科学研究生院呼吸医学系，日本长崎 852-8501； crystalblood2009@gmail.com (MK); tatsuro_h_20@nagasaki-u.ac.jp（泰国）； n-nakada@nagasaki-u.ac.jp (NN)； y-ito@nagasaki-u.ac.jp (YI)； n-ashizawa@nagasaki-u.ac.jp (NA)； k-takeda@nagasaki-u.ac.jp (KT)； niwanaga@nagasaki-u.ac.jp (NI)； takahiro-takazono@nagasaki-u.ac.jp (TT)； s-kohno@nagasaki-u.ac.jp（SK）； hmukae@nagasaki-u.ac.jp（HM） 2 宫崎大学医学院内科学系呼吸病学、风湿病学、感染性疾病和神经病学系，宫崎 889-1692，日本；makoto_sumiyoshi@med.miyazaki-u.ac.jp 3 千叶大学医学真菌学研究中心，千叶 260-8673，日本；m-sato_okamoto@chiba-u.jp（MO）；chibana@faculty.chiba-u.jp（HC） 4 长崎大学生物医学科学研究生院药物治疗学系，长崎 852-8501，日本 5 帝京大学医学真菌学研究所，东京 192-0395，日本； makimura@med.teikyo-u.ac.jp 6 长崎大学生物医学研究生院传染病系，长崎 852-8501，日本；koizumik@nagasaki-u.ac.jp 7 长崎大学医院实验室医学系，长崎 852-8501，日本；k-yanagi@nagasaki-u.ac.jp * 通信地址：taiga_miyazaki@med.miyazaki-u.ac.jp
用于耳念珠菌基因组编辑的无标记 CRISPR 介导系统揭示了 Cas5 在卡泊芬净反应中的保守作用
摘要 耳念珠菌是一种近期在世界范围内出现的耐多药人类真菌病原体。它可导致人类危及生命的播散性感染，死亡率高达 50%。其耐多药性和致病特性背后的分子机制尚不清楚。目前用于耳念珠菌基因组编辑的方法很少，所有这些方法都依赖于限制可进行的修改数量的选择标记。在这里，我们介绍了一种无标记的 CRISPR/Cas9 介导的耳念珠菌基因组编辑系统。利用该系统，我们成功删除了感兴趣的基因，然后在所有五个耳念珠菌进化枝的分离株中的天然位置重建它们。该系统还使我们能够引入精确的基因组编辑来创建翻译融合和单点突变。使用 Cas5 作为此系统的测试案例，我们发现 Cas5 在白色念珠菌和耳念珠菌之间的卡泊芬净反应中起着保守作用。总体而言，开发一种可在耳念珠菌中精确且简便地进行基因组编辑的系统，该系统可以以高通量的方式进行编辑，这是提高我们对这种重要的人类真菌病原体的了解的重要一步。