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高性能技术CRISPR/CAS9改善了急性髓样白血病的知识和管理
关于急性髓样白血病发病机理和治疗的知识最近进展了，但不足以提供理想的管理。改善急性髓样白血病患者的预后取决于分子生物学的进步，用于检测新的治疗靶标和产生有效药物。CRISPR/CAS9技术允许基因插入和缺失，这是研究其编码蛋白质功能的第一步。因此，已经开发了新的实验模型，并在理解蛋白质代谢，抗肿瘤活性，白血病细胞维持，分化，生长，凋亡和自我更新方面已经取得了进展，这是白细胞生成所涉及的综合致病机制。CRISPR/CAS9系统用于了解耐药性并找到解决方案来克服它。使用CRISPR/CAS9系统取得的治疗进展是显着的。fst基因去除抑制急性髓样白血病细胞的生长。赖氨酸乙酰转移酶基因缺失导致增殖率降低，凋亡增加并有利于分化带有MLL-X基因融合的急性骨髓性白血病细胞。从NK细胞中去除CD38基因，降低了NK杂化细胞，导致新的CD38 CAR-NK细胞靶向白血病爆炸的功效提高。Bcl2敲除与FLT3抑制剂具有协同作用。Exportin 1基因敲除与急性髓样白血病中的Midostorin治疗具有FLT3-ITD突变。使用CRISPR/CAS9库和技术应用程序的结果将使我们能够更接近实现未来几十年来治愈急性髓性白血病的目标。
CD44 缺失通过调控 PPARγ 和细胞周期相关通路促进脂肪生成
CD44 是一种细胞表面粘附受体和干细胞生物标志物，最近与慢性代谢疾病有关。CD44 的消融可改善肥胖中的脂肪组织炎症和胰岛素抵抗。在这里，我们研究了人类和小鼠脂肪组织中细胞类型特异性 CD44 的表达，并进一步研究了前脂肪细胞中的 CD44 如何调节脂肪细胞功能。使用 Crispr Cas9 介导的基因缺失和慢病毒介导的基因重新表达，我们发现 CD44 的缺失会促进脂肪细胞分化和脂肪生成，而 CD44 的重新表达会消除这种影响并降低 3T3-L1 细胞中的胰岛素反应和脂联素分泌。从机制上讲，CD44 通过抑制 Pparg 表达来实现这一点。通过定量蛋白质组学分析，我们进一步发现细胞周期调节通路大多因 CD44 的缺失而减少。事实上，CD44 的重新表达适度恢复了参与细胞周期所有阶段的蛋白质的表达。这些数据得到了 CD44 缺陷细胞中前脂肪细胞增殖率增加的进一步支持，而 CD44 的重新表达会削弱这种影响。我们的数据表明，CD44 在调节脂肪生成和脂肪细胞功能方面起着至关重要的作用，可能是通过调节 PPARγ 和细胞周期相关通路来实现的。这项研究首次提供了证据，表明在前脂肪细胞中表达的 CD44 在调节主要表达 CD44 的免疫细胞之外的脂肪细胞功能方面起着关键作用。因此，针对（前）脂肪细胞中的 CD44 可能为治疗肥胖相关的代谢并发症提供治疗潜力。
药物遗传学在瘢痕疙瘩治疗中的作用
药物遗传学是一门研究基因变异是否可以预测药物治疗反应的学科。1,2 该学科已应用于医学的各个方面，包括肿瘤学的靶向治疗。3 它还被用于预测那些有药物不良反应风险的人，例如硫嘌呤甲基转移酶 (TPMT) 缺乏症——继发于 TPMT 基因缺陷——易患硫嘌呤药物引起的粒细胞缺乏症。4 瘢痕疙瘩是纤维增生性病变，表现为毁容性、凸起的瘢痕，超出原始创伤的范围。5 典型部位包括耳垂、肩膀和胸骨。虽然人们认识到某些种族易患瘢痕疙瘩（更高的 Fitzpatrick 皮肤类型），但确切的病理生理学尚未完全阐明。全基因组关联研究 (GWAS) 已允许识别易患瘢痕疙瘩的不同种族家庭（例如非裔美国人）的多个基因位点。6 大量证据表明压力和张力等机械生物学因素与瘢痕疙瘩的发病机制和维持有关。这些因素在细胞内和细胞外水平上发生变化，信号通路参与瘢痕形成和纤维化。组织学分析也表明，在高张力部位（例如瘢痕疙瘩边缘），血管生成和炎症增加。7 瘢痕疙瘩患者采用多种疗法，但没有一种疗法能够普遍成功。非侵入性治疗倾向于抑制成纤维细胞增殖率以及细胞外基质和胶原蛋白的生成。5 它们还能诱导细胞凋亡、抑制炎症和上调基质金属蛋白酶以防止瘢痕疙瘩形成。 5 非侵入性疗法包括压力衣疗法、硅胶片、洋葱提取物和肝素凝胶、病灶内注射皮质类固醇和 5-氟尿嘧啶 (5-FU)，
牙纸浆干细胞衍生的外泌体在直接纸浆上限的有效性：体外研究
目的：这种体外调查的目标是确定牙髓干细胞（DPSC）外泌体如何调节内源性DPSC，并将其导航转向矿物质组织再生，无论是单独还是与矿物三明治聚集体（MTA）。材料和方法：对于此研究，使用大鼠门牙收集DPSC。要从DPSC中提取外泌体，使用了一种超速离心方法。流式细胞仪用于表征DPSC-外观，并使用透射电子显微镜测量其大小。DPSC在标准培养基中孵育，并分为三组。第一个用作阴性对照组，仅包含DPSC；在第二组中，DPSC用外泌体处理；在第三组中，DPSC用MTA和外泌体处理。然后，使用细胞活力测定法来帮助细胞增殖。成骨分化。使用单向方差测试分析，然后进行事后测试（P≤0.05），研究了组之间的总体意义。结果：纸浆干细胞外泌体触发DPSC的增殖。MTA与外泌体结合的存在会导致更高的增殖率（P <0.001）。此外，与其他组相比，当用艾丽莎白红染色时，外泌体/MTA组显示出更大的结节形成（p <0.001）。另外，骨钙素的表达是外泌体/MTA组中最大的。结论：DPSC释放的外泌体诱导分化和矿化潜力。此外，MTA和外泌体的组合有可能在临床环境中显着增强无细胞再生牙髓牙齿牙齿牙齿。
在 CHO 细胞中有效 CRISPR/Cas9 介导的 BAX 基因消融可损害细胞凋亡并增强重组蛋白的产生
背景：尽管最近利用 CHO 细胞生产重组生物治疗药物取得了进展，但其生产率仍低于工业需求，主要是由于细胞凋亡。目的：本研究旨在利用 CRISPR/Cas9 技术特异性破坏 BAX 基因，以减轻产生促红细胞生成素的重组中国仓鼠卵巢细胞的细胞凋亡。材料和方法：使用 STRING 数据库识别要通过 CRISPR/Cas9 技术修饰的关键促凋亡基因。设计针对已识别基因 (BAX) 的单向导 RNA (sgRNA)，然后用载体转染 CHO 细胞。随后，研究了操纵细胞中 Bax 基因表达的变化以及随之而来的促红细胞生成素产生率，即使在存在凋亡诱导剂橄榄苦苷的情况下也是如此。结果：BAX 破坏显著延长了细胞存活率，并增加了操纵克隆的增殖率（152%，P 值 = 0.0002）。该策略将操纵细胞中的 Bax 蛋白表达水平降低了 4.3 倍以上（P 值 <0.0001）。与对照组相比，Bax-8 操纵细胞对压力和结果凋亡表现出更高的阈值耐受性。此外，在橄榄苦苷存在的情况下，它们与对照组相比表现出更高的 IC50（5095 µM.ml -1 Vs. 2505 µM.ml -1 ）。我们发现，与对照细胞系相比，即使存在 1,000 µM 橄榄苦苷，操纵细胞中的重组蛋白生产水平也显著增加（p 值 = 0.0002）。结论：CRISPR/Cas9 辅助 BAX 基因消融有望通过工程化抗凋亡基因来改善 CHO 细胞中的促红细胞生成素产生。因此，有人提出利用 CRISPR/Cas9 等基因组编辑工具来开发宿主细胞，从而实现安全、可行、稳健的制造操作，且产量满足工业要求。
破伤风类毒素和增强型肿瘤细胞疫苗联合接种对小鼠宫颈癌的疗效
宫颈癌是女性第四大常见癌症，根据世界卫生组织 2018 年报告，2018 年估计新增病例 570,000 例，约占女性所有癌症的 6.6%。2015 年死于宫颈癌的 270,000 人中约 90% 发生在中低收入国家。在由人乳头瘤病毒 (HPV) 感染引起的宫颈癌中，HPV 16 E6 和 E7 蛋白的表达对于肿瘤细胞转化和恶性肿瘤的维持至关重要。针对人乳头瘤病毒引起的宫颈癌的预防性疫苗尚未被证明成功。虽然已经开发出具有预防作用的病毒样颗粒 (VLPs) 疫苗来预防大多数 HPV 感染，但 VLP 疫苗对已感染者的治疗效果尚未得到证实。最近的一项研究表明，用破伤风类毒素等强效抗原对小鼠进行预处理可显著改善淋巴结归巢和树突状细胞的功效。破伤风类毒素还与基于肿瘤抗原设计的 DNA 疫苗联合使用。在本研究中，我们用破伤风类毒素对小鼠进行预处理，然后接种过表达肿瘤细胞的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 疫苗 (GVAX)。我们观察到，用破伤风类毒素进行预处理，然后接种 GVAX，可抑制肿瘤生长并提高小鼠的总体存活率。用破伤风类毒素进行预处理可增强免疫反应，表现为脾脏增大、淋巴细胞增殖率提高、脾细胞分泌 IFN-γ、TNF-α 和 IL-4 抗原特异性物质水平提高。破伤风类毒素预处理增加了记忆性 T 细胞向肿瘤部位和脾脏的迁移。还发现在接种破伤风类毒素和 GVAX 组合疫苗的小鼠组中，抗原特异性细胞毒性 T 细胞裂解百分比较高。因此，在接种过表达 GM-CSF 的肿瘤细胞疫苗之前，用破伤风类毒素进行预处理可能是针对 E7 特异性 HPV 相关宫颈恶性肿瘤的有效策略。
利用 CRISPR/Cas9 介导的靶向整合生成 Y 染色体中含有 EGFP 基因的转基因克隆水牛胚胎
性别控制技术在家畜生产中具有重要意义，尤其对于快速繁殖的水牛（bubalus bubalis）具有重要意义，本研究以水牛为研究模型。我们已证实整合到小鼠Y染色体上的荧光蛋白可用于小鼠植入前胚胎的性别鉴定。首先，我们优化了增强型绿色荧光蛋白（eGFP）和mCherry外源基因在Neuro-2a细胞、小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎细胞（NIH3T3）、水牛胎儿成纤维细胞（BFF）中的靶向整合效率。结果表明，靶标两侧同源臂长度为800 bp比300 bp或300 bp/800 bp更有效。当细胞补充了 pifithrin-µ（一种抑制 p53 与线粒体结合的小分子）时，BFF 细胞中同源定向修复 (HDR) 介导的敲入也得到了显著改善。250 V 的三个脉冲在 BFF 细胞中产生最有效的电穿孔，并且发现 1.5 µ g/mL 嘌呤霉素是筛选的最佳浓度。此外，利用 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑结合体细胞核移植 (SCNT) 技术成功生成了 Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞和克隆水牛胚胎。在第 6-8 代时，Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞的生长率和细胞增殖率明显低于非转基因 BFF 细胞；甲基化相关基因 DNMT1 和 DNMT3a 的表达水平相似；然而，与非转基因细胞相比，Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞中乙酰化相关基因 HDAC1 、 HDAC2 和 HDAC3 的表达水平显著较高（p < 0.05）。Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 被用作 SCNT 的供体，结果表明 eGFP 报告基因适用于胚胎性别的可视化。克隆水牛胚胎的囊胚率相似；然而，与对照相比，转基因克隆胚胎的卵裂率明显较低。总之，我们优化了产生转基因 BFF 细胞的方案，并使用这些细胞作为供体成功产生了 Y-Chr-eGFP 转基因胚胎。
新闻稿
新闻稿 立即发布 新加坡国立大学医学研究发现新疗法治疗结直肠癌的潜力 通过阻断 DUSP6，可以实现结直肠癌的新疗法，DUSP6 是一种对细胞生长、存活和修复至关重要的蛋白质。 新加坡，2025 年 1 月 15 日——结直肠癌 (CRC) 是一种始于结肠（大肠）或直肠的癌症，结肠或直肠是消化系统的一部分。它通常始于结肠或直肠内壁形成的异常生长物（称为息肉）。随着时间的推移，如果不及时治疗，其中一些息肉可能会变成癌症。CRC 是新加坡最常见的癌症之一，平均每年约有 2,540 例，也是新加坡癌症死亡的主要原因之一。根据世界卫生组织 (WHO) 的报告，它是全球第三大常见癌症，约占所有癌症病例的 10%。癌症复发和产生耐药性等问题对 CRC 治疗构成了重大挑战，凸显了对新治疗方法的需求。新加坡国立大学杨潞龄医学院的研究人员取得了一项可能改变 CRC 治疗方式的发现。他们的研究表明，一种名为双特异性磷酸酶 6 (DUSP6) 的分子在帮助 CRC 生长方面起着重要作用。本研究中测试的 DUSP6 水平较高的 CRC 细胞增殖率比 DUSP6 水平较低的 CRC 细胞高出约 40%。与 DUSP6 水平较低的患者相比，CRC 患者 DUSP6 水平升高与预后较差和生存率降低相关（p 值 = 0.029）。DUSP6 是一种称为磷酸酶的蛋白质，其作用类似于细胞内特定信号通路的“关闭”机制。它的主要功能是控制 ERK1/2 MAPK 通路，这对细胞生长、存活和修复至关重要。在正常情况下，DUSP6 会使 ERK1/2 失活，从而阻止细胞过度生长或信号传导。在某些癌症（例如肺癌和皮肤癌）中，DUSP6 充当肿瘤抑制因子，有助于阻止癌症生长。然而，在其他癌症（例如结直肠癌）中，DUSP6 具有相反的作用并促进肿瘤生长。这项研究由新加坡国立大学医学院微生物学和免疫学系和免疫学转化研究计划 (TRP) 的张永良副教授领导。张副教授说：“在结直肠癌中，肿瘤中发现了更高水平的 DUSP6，它有助于癌细胞更快地生长、更容易扩散，并导致患者预后较差。这一意想不到的作用凸显了为什么 DUSP6 现在被视为新疗法的潜在目标。我们的研究不仅解释了为什么某些结肠癌如此具有侵袭性，而且为我们开发新疗法提供了明确的目标。”
与奥沙利铂相关的神经不良事件
Oxaliptin，可有效治疗消化系统肿瘤，例如结肠癌，胃癌和肝癌。基于奥沙利铂的疗法，包括FOLFOX（奥沙利铂与叶酸和5-氟尿嘧啶）和Capox（Oxaliptin和Capecitabine）广泛用于结肠癌（Mine等，2022）。奥沙利铂通过形成DNA-铂金合并的形成来干扰肿瘤细胞增殖，从而发挥其抗癌作用（Yang等，2021）。然而，奥沙利铂也可能与高增殖率的正常细胞相互作用，从而改变其生理特征并引起不良副作用（Oun等，2018）。多年来，许多研究突出了奥沙利铂对不同器官和组织的有害作用，包括神经毒性，胃肠道反应和骨髓抑制（Branca等，2021）。神经不良事件（AES）是奥沙利铂的最突出的剂量和残疾副作用，并影响超过80％的治疗患者（Seretny等，2014）。奥沙利铂的神经AES主要表现为冷敏感性的异常，发抖和运动症状，优先在手和脚上，类似于库存和玻璃的模式（Ventzel等，2016）。异常包括麻木，刺，刺痛或挠痒痒（Oun等，2018）。情感障碍表现出刺激的疼痛，通常不会引起疼痛或其他触摸的异常感觉（Oun等，2018）。奥沙利铂的神经学在临床上很重要，原因有几个。运动症状包括束缚和长时间的肌肉收缩（Yang等，2021）。首先，由于奥沙利铂的特定剂量限制性毒性可能导致奥沙利铂剂量的降低或早期终止治疗，这可能会影响患者的化学疗法有效性（Marcotti等，2023）。第二，奥沙利铂诱导的神经系统可能最终导致长期神经系统污染，例如感觉丧失和本体感受的变化，这可能会影响患者的日常活动并持续数月甚至几年（Mols等人，2013年）。第三，奥沙利铂诱导的神经系统经常出现，并且影响了80％以上的治疗患者（Velasco等，2014）。第四，有效的神经系统AE的有效治疗和预防策略是有限的。杜洛西汀是美国临床肿瘤学会治疗奥沙利铂诱导的神经病的唯一药物，但不良药物反应使其引起争议。不建议预防奥沙利铂诱导的神经病（Loprinzi等，2020）。因此，迫切需要对草酸磷脂相关神经AE的详细研究。尽管在某些临床试验中已经描述了与草钙蛋白相关的神经学AE，但
使用基于结构的药物发现方法
摘要：我们使用了一种基于结构的药物发现方法来鉴定人二二氢烷脱氢酶（DHODH）的新型抑制剂，这是治疗癌症，自身免疫性和炎症性疾病的治疗靶标。在急性髓细胞性白血病的情况下，先前发现的Dhodh抑制剂尚未在此临床应用中取得成功。因此，对于可以用作当前护理标准的替代品的新抑制剂仍然非常需要。我们的目标是识别Dhodh的新型抑制剂。，我们在该项目的最早阶段实施了预滤步骤，以省略痛苦和违规者。在数据集中具有更高潜力的口服吸毒性的富集化合物。在Glide SP对接得分的指导下，我们发现了Chembridge Express-Pick库中20种结构独特的化合物，它们用IC 50抑制Dhodh，DhoDH值在91 nm和2.7μm之间，其中10种这些化合物中的10种化合物降低了Molm-13的Molm-13细胞稳定性，用IC 50降低了2.3和2.3和50.6μm。50.6μm。50.6μm。50.6μm。50.6μm.。在生化特征期间，Dhodh比已知的Dhodh抑制剂Teriflunomide（IC 50，Dhodh = 130 nm）更有效，并为未来的命中率优化工作提供了有希望的脚手架。化合物17（IC 50，Molm-13 =2.3μm）在降低MOLM-13细胞系的存活方面最为成功，与我们的其他命中相比。发现的化合物代表了新型Dhodh抑制剂开发和优化的出色起点。2这种分化障碍 - 在多种突变事件中达到顶点，使AML成为高度异质性疾病。■引言急性髓样白血病（AML）是一种毁灭性的癌症，可能影响任何年龄段，但最高的发病率是65岁以上的人。尽管在过去30年中进行了预后改善，但超过一半的年轻患者和约90％的老年患者仍死于这种疾病。1在健康的患者中，髓样细胞从自我更新祖细胞转变为以较低的增殖率的终极分化细胞，以限制细胞的寿命。AML的标志是这种正常成熟过程的破坏，该过程导致白血病细胞在增殖的未分化阶段停止。3在几乎所有AML病例中，都必须使用治疗范例的组合。即使采用涉及细胞毒性化学疗法的积极方法，实现持久的缓解也是一个挑战。4现有治疗范围取决于年龄的范围；通常为60岁以下的AML患者获得35-40％的治疗，但在60岁以上的成年人中，它仅为5-15％。5因此，需要新的治疗途径，具有新型的作用机理，从当前用作现有标准的护理机理。Sykes及其同事的先前工作确定二氢甲酸脱氢酶（Dhodh）是一种有吸引力的治疗