• 8 联管(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0264)或其他无核酸酶、PCR 级联管(固定在 PCR 架中)或 96 孔板(已验证可与您的 FACS 仪器配合使用) • 微孔板膜(USA Scientific,目录号 2920-0010),用于在分选前密封管/板 • 铝制单片箔密封(USA Scientific,目录号 2938-4100)或盖条(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0784/AB0850),用于在分选后密封管/板 • 用于 96 孔板或联管的低速台式离心机 • 适合容器中的干冰,用于快速冷冻细胞 • (可选)BD FACS 预分选缓冲液(BD Biosciences,目录号 563503) • (可选)SMART-Seq HT Kit 裂解组分(Takara Bio,目录号 634439)或 10X 裂解缓冲液(Takara Bio,目录号 635013)用于对额外的板进行分类
• 8 联管(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0264)或其他无核酸酶、PCR 级联管(固定在 PCR 架中)或 96 孔板(已验证可与您的 FACS 仪器配合使用) • 微孔板膜(USA Scientific,目录号 2920-0010),用于在分选前密封管/板 • 铝制单片箔密封(USA Scientific,目录号 2938-4100)或盖条(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0784/AB0850),用于在分选后密封管/板 • 用于 96 孔板或联管的低速台式离心机 • 适合容器中的干冰,用于快速冷冻细胞 • (可选)BD FACS 预分选缓冲液(BD Biosciences,目录号 563503) • (可选)SMART-Seq HT Kit 裂解组分(货号 634439)或 10X 裂解缓冲液(Takara Bio,货号 635013)用于对额外的板进行分类
标本CSF,血清:1.0 mL(0.25 mL),冷藏(7天)或冷冻(90天)。eswab®收集带有拭子的阴道标本,并在带有液体介质的管中放置。断裂拭子(预得很详细)和密封管进行运输。样品在室温下稳定30天(15-30°C)。ThinPrep:2.0毫升(1.0毫升),存储和运输环境(最多3个月)。SurePath:1.0毫升(0.5毫升),商店和船舶周围(14天)。拭子:从任何地点,放置在1-2 ml病毒运输培养基中,商店和船舶环境或冷藏(14天)。要进行更长的存储空间,请冷冻(90天)。全血(EDTA或ACD):5.0 mL(3.0 mL),环境(4天)或冷藏(7天)。新鲜组织:0.2 g(0.1 g),放置在病毒运输培养基中,存储和船舶环境或冷藏(最多14天)。拒绝数量的原因不足(QN)进行分析;时间和/或温度说明未遵循;肝素中的全血。
用于样品制备•8管条(Thermo Fisher Scientific,Cat。编号ab0264)或其他不含核酸酶的PCR级管条,固定在PCR架中,或已验证的96孔板,这些板已验证以与您的FACS仪器一起使用•Microplate Film(USA Scientific,Cat。编号2920-0010)用于分类之前的密封管/板•铝单选项卡箔封封(美国科学,猫。编号2938-4100)或帽条(Thermo Fisher Scientific,Cat。编号ab0784/ab0850)•用于96孔板或管条的低速台式离心机•合适的容器中的干冰,用于闪光灯冷冻电池•(可选的)BD FACS PRACES PRACES PRACES PRES pre-SORT SORT SORT BUFFER(BD BISCIENCES,BD BISCIENCES,CAT。编号563503)•(可选)智能seq ht套件裂解组件(cat。编号634439)或10x裂解缓冲液(Takara Bio,Cat。编号635013)用于排序额外的板
1。简短离心管,包含siRNA,以确保在管子的底部收集siRNA颗粒。2。使用表1。a中列出的所需量的所需的最终浓度重悬于无RNase 1X siRNA缓冲液中(请参见下面的注释)。例如:对于10 nmol的siRNA和20 µm库存浓度,加入500 µl 1x siRNA缓冲液。3。移液器上下溶液上下3-5次,避免引入气泡并牢固密封管(或多孔板)。4。在室温下将溶液放在轨道搅拌机/振动器上30分钟。5。简短离心管,包含siRNA,以确保将溶液收集在管子底部。6。使用260 nm处的紫外分光光度法验证siRNA的浓度。对于siRNA,1 µm = 13.3 ng/µl。对于microRNA模拟,1 µm = 14.1 ng/µl和microRNA发夹抑制剂,1 µm = 18.5 ng/µl请参阅FAQ,有关其他信息。7。RNA可以立即使用,或将等分等分为较小的体积以限制冻融周期的数量。重悬于的siRNA应将其存储在-20°C中,以手动除霜或非周期冰柜。在4°C下存储最多可容纳6周。