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基于 CRISPR/Cas9 的非洲锥虫血液中必需基因的精准标记
目的蛋白质经常用融合标签来表达，以方便实验分析。在通常为二倍体的锥虫中，标签编码 DNA 片段通常与一个天然等位基因融合。然而，由于重组细胞在转染后占群体的 0.1% 以下，这些 DNA 片段还包含一个标记盒用于正向选择。因此，天然 mRNA 非翻译区 (UTR) 被替换，可能会扰乱基因表达；在锥虫中，UTR 通常会在广泛和组成性多顺反子转录的背景下影响基因表达。我们试图开发一种标记策略，以保留血流形式非洲锥虫的天然 UTR，在这里我们描述了一种基于 CRISPR/Cas9 的敲入方法来驱动精确和无标记的必需基因标记。使用简单的标签编码扩增子，我们标记了四种蛋白质：组蛋白乙酰转移酶，HAT2；组蛋白去乙酰化酶，HDAC3；切割和多聚腺苷酸化特异性因子 CPSF3；以及变体表面糖蛋白排除因子 VEX2。该方法保留了天然 UTR，并产生了表达功能性重组蛋白的克隆菌株，通常两个等位基因都被标记。我们展示了基于免疫荧光的定位和富集蛋白质复合物的实用性；在本例中是 GFP HAT2 或 GFP HDAC3 复合物。这种精确标记方法有助于组装表达必需重组基因的菌株，同时保留其天然 UTR。
2020 年 5 月 22 日 本文件由 Liquor 提供......
2020 年 5 月 22 日 该文件由酒类执法部门提供，作为参考，旨在帮助酒类许可证持有人起草控制计划。 LED 绝不要求采用本例中列出的完全相同的控制措施，但计划中应解决下文详述的控制计划的每个领域。 控制计划： 营业时间：许可证持有人详细说明扩建场所的营业时间，同时考虑到当地政府实施的任何限制。 边界：许可证持有人详细说明将在修改后的场所使用的边界类型。它应该标记该区域，并且不仅仅是地面上的标记。可接受的屏障示例是绳索或临时围栏，可以清楚地标记服务区。 入口和出口：许可证持有人将如何控制进出临时服务区的人员？是否会有员工驻守在那里以验证是否正在保持社交距离并确保酒精不会带出场所？标牌：详细说明“此处禁止饮用酒精饮料”标牌及其在临时场所的位置，最好包括入口/出口。负责任的服务：详细说明场所工作人员在防止向未成年人或明显醉酒的人出售酒精饮料方面将发挥的作用。此部分还可以列出员工资格，例如培训和经验。我们希望本文件能帮助您起草控制计划和申请流程。此致，科罗拉多州酒类执法部门
EM_1110-2-5026.pdf - 疏浚沉积物的有益用途
a. 自从 1969 年颁布《国家环境政策法》（NEPA）并要求全面披露环境信息（在本例中包括详细说明处置方案）以来，要求更多地依赖密闭式或陆上处置疏浚物的压力显著增加。与此同时，由于城市化、农业和现有场地可用容量的利用，高地处置场地正在迅速枯竭。对水质改善和/或维护以及对水生育苗、产卵、鱼类通道和洄游以及觅食区的保护的关注，是将开放水域和外围湿地从潜在处置场地清单中剔除的因素（第 81 条）。应该指出的是，除了受污染材料的情况外，疏浚作业不会引起监管机构的过多关注。虽然不能断然排除开阔水域和湿地作为处置方案，但疏浚人员一般已将注意力转向高地，将处置问题从水生环境转移到陆地环境，但特殊情况除外，例如密西西比河下游，每年因沉降和侵蚀而消失 50 平方英里的沼泽。在那里，人们故意在浅浅的开阔水域处置废物，从而形成沼泽。由于城市扩张的推进，随之而来的自然或开阔区域的减少，以及最近人们越来越意识到无节制开发带来的社会经济和环境影响，控制土地使用的力度不断加大。近年来，只有在五大湖这种特殊情况下，湖内已建造了封闭式处置设施 (CDF) 岛，以及在某些允许建造 CDF 和岛屿的港口，才在原有水生环境的地方形成了陆地。
绘制印度时尚与生活方式的工作与家庭冲突...
时尚新闻的压力与传统新闻形式截然不同。需要随时了解品牌、穿着得体、维持现状，这些是时尚记者面临的最大压力。本研究评估了时尚记者从工作到家庭所承受的“冲突”压力。一个部门的角色冲突或不满可能会引起另一个部门的骚动。在竞争激烈的世界中，工作和家庭之间的冲突尤其如此。平衡工作和家庭并避免冲突是时尚记者的重要任务。记者需要具备可信度和高道德标准，而每天和每小时的截止日期压力往往会给这些记者的社交、情感和家庭生活带来动荡，导致许多人在几年后退出该行业。工作与家庭的冲突意味着员工（本例中为记者）从办公室到家所承受的压力和冲突。本文绘制了总部位于印度昌迪加尔的报纸和杂志（印刷媒体）时尚、生活方式和专题报道领域的 40 名记者的工作与家庭冲突（包括来自旁遮普邦、哈里亚纳邦和喜马偕尔邦分社的记者）。这些记者使用李克特量表对他们的“工作与家庭需求”、“工作分心”和“与家人共度的宝贵时间”进行了评分和评估。对这项统计研究的评估表明，这些时尚记者的工作与家庭冲突的影响与他们的性别、工作概况和月收入没有显著差异。关键词：工作与家庭冲突、时尚记者、生活方式记者、媒体专业人士、印度记者、媒体组织 序言
印度时尚与生活方式记者的工作与家庭冲突地图：
时尚新闻的压力与传统新闻形式截然不同。时尚记者面临的压力中，最重要的是要了解品牌、穿着得体、维持现状。本研究评估了时尚记者从工作到家庭所承受的“冲突”压力。一个部门的角色冲突或不满可能会引起另一个部门的骚动。工作和家庭之间的冲突在竞争激烈的世界中尤为明显。平衡工作和家庭并避免冲突是时尚记者的重要任务。记者需要具备可信度和高道德标准，而每天和每小时的截止日期压力往往会给这些记者的社交、情感和家庭生活带来动荡，导致许多人在几年后退出该行业。工作与家庭的冲突意味着员工（在本例中为记者）从办公室到家庭所承受的压力和冲突。本文绘制了总部位于印度昌迪加尔的报纸和杂志（印刷媒体）时尚、生活方式和专题报道领域的 40 名记者的工作与家庭冲突（包括来自旁遮普邦、哈里亚纳邦和喜马偕尔邦分社的记者）。这些记者使用李克特量表对他们的“工作与家庭要求”、“工作分心”和“与家人共度的宝贵时间”进行了评分和评估。对这项统计研究的评估表明，这些时尚记者的工作与家庭冲突的影响与他们的性别、工作概况和月收入没有显著差异。关键词：工作与家庭冲突、时尚记者、生活方式记者、媒体专业人士、印度记者、媒体组织序言
消融连接至...的 Mahaim 附加通路
动脉，简言之，采用它所穿过结构的腔内形状（图 1）。这种宏观描述对应于绒毛状粘液瘤，一种不太常见的粘液瘤亚型。6 本病例报告完全是例外，因为该心脏内肿瘤的性质是粘液瘤，与初始病变没有明显联系，尽管睾丸生殖细胞肿瘤已被描述为可导致心脏转移的肿瘤 3 ；由于粘液瘤的位置，其起源于上腔静脉-头臂干，静脉部位非常特殊，尽管据报道它位于下腔静脉和股静脉 7,8 ；最后，由于它能够在第一次手术后生长和复发。最难解释的方面是粘液瘤和初始肿瘤之间的关联（如果存在的话）。该粘液瘤的形式和位置支持了那些曾经为血栓性起源辩护的人的假设。考虑到其位于腔内且患者有 Port-A-Cath ® 的事实，并接受癌症患者的促血栓形成倾向，因此粘液瘤的起源可归因于这种情况。反对这一假设的一个理由可能是右心室前部存在相同组织学的同步病变。此外，在本例中，可以通过钙网膜蛋白的免疫组织化学测试确认粘液瘤的性质，该技术对于区分粘液瘤和血栓具有完全特异性。5 从这个案例中可以吸取的最后一个教训是，任何异常生长都应接受病理检查，无论病史如何。对于该患者，由于其复杂且广泛的肿瘤病史，可能假设目前的心内肿块是转移性的，不需要治疗，而实际上，它是良性的，并且在很大程度上是可切除的。
扩展数据图1. 使用RFdiffusion设计β链配对支架。为了充分利用RFdiffusion的多样化生成潜力，同时
扩展数据图 1. 使用 RFdiffusion 设计 β 链配对支架。为了充分利用 RFdiffusion 的多样化生成潜力，同时鼓励在设计输出中使用 β 链界面，我们实现了一种界面调节算法，该算法可根据简单的用户输入生成 SS/ADJ 调节张量。该模型以张量的形式理解折叠调节，这些张量标记每个残基（a，顶部和左侧）的二级结构（蓝色）以及这些二级结构块的邻接关系（a，黄色中心）。用户指定的参数指定了以下信息：结合剂界面二级结构块（在本例中为 β 链）、该块的长度（b，结合剂张量 L 中的青色块）以及结合剂块相邻的靶位残基（b，靶位张量 T 中的青色块）。根据这些预定义参数，该算法随机采样结合剂界面二级结构块在残基索引空间中的位置，同时保持与指定靶位残基的确定邻接关系（绿色）。该用户定义的调节张量将扩散输出导向β链配对的结合物-靶标界面 (c)。此前，RFdiffusion 界面设计计算可以针对指定为靶标“热点”的特定残基，以指定要结合的靶标残基。而这种新的链间 SS/ADJ 调节功能，使用户能够在结合物支架生成过程中指定“β链热点”或“ɑ-螺旋热点”。基于扩展的结合物-靶标 SS/ADJ 张量调节的结合物支架输出，支持用户指定 β 链界面类型的设计。
工作场所强制性 Covid-19 疫苗接种政策 - ...
引言 雇主是否可以在工作场所实施强制接种疫苗政策？在回答这个问题之前，需要考虑雇主面临的一些法律义务。雇主有法律义务（《职业健康与安全法》第 8 条）在合理可行的范围内提供和维护一个安全且不危及员工健康的工作环境。这包括在使用防护设备之前，采取合理可行的措施消除或减轻对员工安全或健康的任何危害或潜在危害。2021 年 6 月 11 日经修订的《关于某些工作场所职业健康与安全措施的 Covid-19 综合指令》（Covid-19 OHS 指令）也列出了雇主必须采取的措施，以提供安全的（免受 Covid-19 侵害的）工作场所。同样，雇主也负有保护其顾客健康和安全的合理义务，如果法院发现顾客的 Covid-19 感染源头是该雇主的工作场所，而雇主未能确保采取合理可行的措施来防止感染，则雇主可能被追究责任。实施强制性 Covid-19 疫苗接种政策的“许可”来源是经修订的 Covid-19 职业健康与安全指令。发布该指令的法定权力源自《灾害管理法》第 27(2) 条，该条允许授权内阁部长（在本例中为就业和劳工部长）发布与灾害状态相关的指令。但是，雇主在工作场所实施强制性疫苗接种政策之前，必须考虑某些因素并采取某些步骤。这些将在下文中讨论。进行工作场所风险评估作为一个简要框架，Covid-19 职业健康与安全指令要求雇主根据指令进行工作场所风险评估。风险评估应告知计划需要采取哪些保护措施以分阶段重返办公室（员工可能在家工作）。它还应告知雇主有关员工疫苗接种的计划。
卡莱尔公园管理计划 2024 年 1 月
卡莱尔公园管理计划 2024-25：前言 卡莱尔公园是当地居民和游客的重要场所。泰晤士河畔里士满伦敦自治市将根据我们的战略原则和政策，以最高标准维护和管理公园。该管理计划基于对公园的审计，遵循中央政府指导方针，即 PPG 17。本文档对此进行了解释，但方法基于常识。我们认为，把简单的事情做好很重要。绿地干净整洁吗？草修剪了吗？树木和灌木是否维护良好？涂鸦是否有效快速地清除？与当地社区合作提供最高质量的服务是重中之重，希望本文件能为持续和改善对话提供框架。该场地将得到适当维护，并将就任何拟议的设施和基础设施变更或改进咨询当地社区。特别是，自治市与卡莱尔公园之友密切合作。我们积极鼓励对公园各个方面的建议。公园官员与 Continental Landscapes 的同事密切合作，采用合作方式定期监测公园。我们还鼓励当地社区成员告诉我们他们对维护水平的印象以及他们的想法。希望由此产生的观察和想法能够不断改善管理和维护实践。虽然委员会愿意接受当地社区对自治市公园内设施不断变化的需求，但卡莱尔公园是一个长期存在的当地绿地，维护良好。我们不会设想对公园或其设施进行重大更改。本文件末尾的行动计划反映了这一观点。当前的财务状况将不可避免地对可用于改善和维护自治市公园和开放空间的资源产生不利影响。自治市将继续与其合作伙伴（在本例中为 Continental Landscapes 和卡莱尔公园之友）密切合作，以保持标准。此外，我们还需要寻找额外的资金方式来维护和改善行政区公园，这是我们最宝贵的资产之一。
潜在的重要药物相互作用，包括......
• 本文件所含信息仅与已知或疑似的相互作用药物的影响有关，如有注明，则来自 FDA 批准/授权的 PAXLOVID 标签。辉瑞不建议或推荐以完整处方信息中所述以外的任何方式使用 PAXLOVID。• 药物清单仅供参考，并非可能与 PAXLOVID 相互作用或禁忌使用药物的完整清单。如果药物未在完整处方信息或本资源中列出，则不应假定与 PAXLOVID 共同使用是安全的。请查阅 PAXLOVID 完整处方信息和 FDA 批准/授权的共同使用药物标签，以获取有关所列相互作用及其治疗出现的不良事件的信息，以及与强效 CYP3A 抑制剂（如利托那韦）同时使用时的剂量或监测。 • 未给出或暗示任何临床建议，医疗保健提供者必须自行判断药物组合的风险和益处，这取决于两种药物之间药代动力学相互作用以外的因素。 • 在考虑每种药物的组合、药代动力学、药效学和安全性概况时，在本例中为 PAXLOVID 和其他药物，可考虑本文件以帮助识别潜在的相互作用来源。辉瑞尚未进行任何研究来评估 PAXLOVID 与其他药物联合使用的安全性和有效性。医疗保健提供者可以考虑以下信息和 PAXLOVID 完整处方信息中的信息，以确定 PAXLOVID 与特定（药物类别）/药物的组合是否适合患者使用。 • 本文件中的信息仅供医疗保健提供者根据 FDA 授权标签开具 PAXLOVID 处方时作为教育性背景信息。如果您是遇到医疗紧急情况的消费者/患者，请立即拨打 911 并与您的医疗保健提供者交谈。此信息不应取代医疗保健提供者基于临床判断的医疗建议，也不应在必要时代替 COVID-19 咨询。