桦树

使用农杆菌介导的转化技术的CRISPR编辑的桦木植物无DNA整合

摘要39 CRISPR/CAS9系统已成为基因组编辑中的强大工具；但是，40代CRISPR编辑的无DNA植物仍然具有挑战性。在这项研究中，使用了使用农业介导的转化43（CPDAT方法），使用41个Betula Plathylla（Birch）构建一种生成CRISPR PRECTER 42植物的方法。该技术利用瞬时遗传转化将TNNA编码GRNA和Cas9引入桦木细胞，T-DNA将表达45个合成的GRNA和CAS9蛋白，这将形成一个复合物以裂解靶标46 DNA位点。基因组可能由于DNA修复而被突变，并且这些突变将被保留47个，并积累不取决于是否将T-DNA整合到48个基因组中。瞬时转化后，将桦树植物切成植物，至49个诱导不定的芽而没有抗生素选择压力。每个不定的芽50可以视为突变51检测的独立潜在的CRISPR编辑线。CRISPR编辑的桦木植物没有外国DNA整合，还可以通过筛选CRISPR编辑的线条而没有T-DNA整合。在65 53个随机选择的独立线中，突变率为80.00％，包括40.00％54的线，两个等位基因突变。此外，在有65条研究的线（7.69％）中，有5条线是CRISPR-编辑的桦木植物，而没有DNA整合。总而言之，这56种创新方法提出了一种生成CRISPR编辑的桦木57种植物的新型策略，从而显着提高了产生常见的58种CRISPR-CRISPR-编辑植物的效率。81这些发现提供了开发植物59基因组编辑技术的巨大潜力。60 61简介62 CRISPR/CAS9是一种适用于植物育种的强大而有效的基因编辑技术，63可以精确有效地修饰基因组（Fidan等，2023）。CRISPR/CAS 64系统最初被发现可以识别并裂解入侵的病毒或噬菌体的65个DNA，可作为细菌中的免疫系统（Ahmad，2023; Kim等，2016; 66 Komor等，2016; Koonin等，2017; Zetsche等，2015; 66 Komor et al。，2015;CRISPR-CAS系统67已根据其CRISPR-CAS位点的布置和相关的CAS 69蛋白（Koonin等，2017; Makarova; Makarova and Koonin，2015）分类为两个主要类（II，II，III，68 IV，V和VI）和各种类型（I，II，III，68 IV，V和VI）。两个主要类是70类1和2，根据其利用的CRISPR 71 RNA（CRRNA）摄影蛋白的复合物（McDonald等，2019）。1类系统（包括72型I，III和IV）由由几种CAS 73蛋白结合的成熟CRRNA组成，形成了巨大的蛋白质复合物。该复合物通过在原始探针75的互补链DNA（靶位点）和GRNA间隔者的5'-End序列之间进行配对，作为目标74 DNA位点的指南，并且具有核酸酶76的活性，以裂解靶向序列（Garneau，2010; Tiwari等，2010; Tiwari et and and and an。2类系统包括II型，V和VI，分别具有78个CAS蛋白，例如Cas9，Cas12或Cas13，并且还具有靶向和切割DNA的79功能（Jinek等，2012）。在2类系统中，80 Cas9-Crispr系统已被广泛应用。