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乙酰杆菌中的基因组工程内源性CRISPR/CAS系统，乙酰杆菌和梭状芽胞杆菌自动乙醇
乙细菌可以通过将CO 2转换为工业相关的化学物质和燃料的能力来在净零中发挥重要作用。对该潜力的全面开发将依靠有效的代谢工程工具，例如基于链球菌的链球菌CRISPR/CAS9系统的工具。然而，试图将含Cas9的载体引入木质杆菌的尝试不成功，这很可能是由于Cas9核酸酶毒性的毒性，并且存在内源性a。Woodii限制的识别位点 - cas9 Gene中的Modiiii限制（R -M）系统。作为替代方案，本研究旨在促进将CRISPR/CAS内源系统作为基因组工程工具的开发。因此，开发了一个Python脚本，以自动化杂质的邻近基序（PAM）序列的预测，并用于识别A. woodii I型I型I-B CRISPR/CAS系统的PAM候选。分别通过干扰测定和RT-QPCR在体内表征识别的PAM和本地领导者序列。由本机领导者序列，直接重复和足够的间隔者组成的合成CRISPR阵列的表达，以及用于同源重组的编辑模板，成功地导致了300 bp和354 bp的生成Pyre和Pye和PheA的架子内缺失。为了进一步验证该方法，还产生了3.2 kb的HSDR1缺失，以及在PHEA基因座的荧光激活和吸收转换TAG（快速）报告基因的敲入。同源臂长度，细胞密度和用于转化的DNA量显着影响编辑的效率。随后将设计的工作流应用于梭状芽胞杆菌的I型I-B CRISPR/CAS系统，从而使Pyre的561 bp框架内缺失具有100％的编辑效率。这是使用其内源性CRISPR/CAS系统的A. woodii和C.自身乙烷的基因组工程的第一个报告。
蒙特梭利小学课程的特点
与学龄前和青春期的剧烈发展变化相比，小学阶段是一个稳定的、均匀生长的时期。在这个年龄，孩子们身体强壮、协调性好，喜欢进行体力活动。他们渴望知识，能够想象他们直接的个人经验之外的事物。他们对外部世界的新兴趣表现为对收藏的热情和一些大问题。他们不仅对最高、最古老、最重或最长的东西感兴趣，而且对万物如何形成和为什么形成、什么是好什么是坏、什么是公平和公正以及他们自己在生活中的角色是什么感兴趣。孩子们公开、自由地分享他们的想法和热情，有幽默感，并为自己的成就感到自豪。这是一个英雄崇拜和渴望亲密友谊的年龄，他们努力谈判、辩论和妥协，以便融入同龄人的社交圈。同时，他们继续钦佩父母，不质疑家庭价值观。
