摘要 志贺氏菌是一种革兰氏阴性细菌,可侵入人体肠道上皮。由此引起的感染志贺氏菌病是最致命的细菌性腹泻病。有关决定志贺氏菌病理生理的基因(包括染色体和毒力质粒)的大部分信息都是通过经典反向遗传学获得的。然而,流行的诱变技术的技术限制使得单次反应中只能产生少量突变体,从而阻碍了大规模的志贺氏菌靶向诱变和随后的表型评估。我们采用了一种 CRISPR-Cas 依赖性方法,其中切口酶 Cas9 和胞苷脱氨酶融合在单向导 RNA(sgRNA)的引导下引入靶向 C ! T 转换,导致内部终止密码子和翻译过早终止。在使用 mCherry 荧光报告基因的原理验证实验中,我们能够在大肠杆菌和志贺氏菌中生成功能丧失突变体,效率高达 100%。使用改进的波动分析,我们确定在优化条件下,由 Cas9 脱氨酶融合引入的非靶向突变的频率与自发突变在同一范围内,这使我们的方法成为细菌诱变的安全选择。此外,我们对该方法进行了编程,以突变已充分表征的染色体和质粒携带的志贺氏菌基因,并发现突变体的表型与已报道的基因缺失突变体的表型相似,在表型水平上没有明显的极性效应。该方法可用于 96 孔板格式,以提高通量并在几天内生成一系列靶向功能丧失突变体。
志贺氏菌是全球中度至重度腹泻的主要原因,也是中低收入国家 5 岁以下儿童腹泻相关死亡的主要原因。针对志贺氏菌病的疫苗需求量很大。SF2a-TT15 是一种合成的碳水化合物结合疫苗,可对抗志贺氏菌 2a (SF2a),经证实对成年志愿者安全且具有强免疫原性。本文表明,10 µg 寡糖 (OS) 疫苗剂量的 SF2a-TT15 可在接种疫苗后 2 年和 3 年随访的大多数志愿者中诱导持续的免疫反应,且免疫反应强度和功能均保持良好。接种疫苗 3 个月后确定的任一体液参数的高水平以及特异性 IgG 记忆 B 细胞的数量是免疫反应持久性的良好预测指标。这项研究首次检验了志贺氏菌候选疫苗诱导的抗体功能和记忆 B 细胞反应的长期持久性。
Neisseria是一种革兰氏阴性,催化和氧化酶阳性的球杆菌细菌,能够发酵葡萄糖并产生精氨酸二氢酶[1,2]。是通过释放肽聚糖,脂肪酸糖和外膜外囊泡作为诱导炎症和免疫反应的片段[3]。尽管存在11种已知的奈瑟氏菌种,但人类大多容易受到两种菌株,即脑膜炎和淋病链球菌。neisseria andaryoris和neisseria canis经常与牙龈,口腔和鼻腔分泌犬和猫科动物分泌[2,4]。这些菌株在人类中是罕见的人畜共患病原体,但通常与猫或狗叮咬有关[1]。对这些细菌的非肿瘤人类伤口感染很少见,文献稀疏,病例报告只有14例病例[5]。尚未描述过动物科和猪笼草的病例,引起了隔室综合征和坏死性筋膜炎的坏疽性感染。
近来,超过 70% 的鱼被熏制作为保存方法。熏制是一种古老的加工方法,至今在尼日利亚仍广泛使用。本研究调查了从两个不同的鲶鱼养殖场获得的熏制鲶鱼中重金属积累和微生物负荷水平,以确定研究期间在奥沃销售的熏制鲶鱼的安全性。样本采集自位于尼日利亚翁多州奥沃地方政府区奥沃的两个农场(农场 1 和农场 2)。鉴定出的微生物包括链球菌属、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌属、克雷伯氏菌属、铜绿假单胞菌和大肠杆菌。样本 A 和 B 的微生物计数如下:链球菌属(90.0 和 60.0)、金黄色葡萄球菌(160.0 和 170.0)、芽孢杆菌属(230.0 和 215.0)、克雷伯氏菌属(110.0 和 120.0)、铜绿假单胞菌(15.0 和 10.0)和大肠杆菌(2.0 和 1.0)。重金属的浓度分别为 Cu(0.001 和 0.000)、Cd(0.222 和 0.002)、Cr(0.840 和 0.670)、Mn(2.33 和 1.99)和 Zn(132.020 和 127.001)。微生物数量最高的是来自样品 A(230.0)和样品 B(215.0)的芽孢杆菌属,而最低的是来自样品 B(1.0)和样品 A(2.0)的大肠杆菌。在重金属中,锌在两个样品中含量最丰富,样品 A(132.020)的浓度高于样品 B(127.001)。铜含量最低,在样品 A(0.001)中几乎检测不到,在样品 B(0.000)中完全检测不到。该研究揭示了鲶鱼养殖场之间的微生物和重金属污染水平差异。它强调监管机构需要实施湿度控制措施并实施策略以减少可能导致熏制鲶鱼产品中细菌生长和重金属污染的人为活动。
这项研究研究了与细菌性脑膜炎治疗(青霉素,氨基霉素,氨基霉素,脂蛋白脂蛋白和甲状腺素)相结合的四种抗生素组合中,肾翼终结元素精油的杀菌作用。这些组合的吞噬作用还针对人类白细胞细胞进行了测试。通过时间杀伤分析,动态检测到端硫酸疟原虫精油(PEO)和抗生素组合的杀菌作用。通过紫外分光光度计分析了PEO和抗生素在渗透到外膜屏障中的功能。根据分数抑制浓度(FIC)指数计算抗生素与精油之间的相互作用。在脑膜炎链球菌(FIC 0.5)上确定了cipro flofro oxacin + PEO组合的协同作用,但观察到对H. infuenzae(FIC = 1)的添加效应。将PEO与庆大霉素的联合使用对脑膜炎和H. infuenzae(FIC 0.5)产生协同作用。青霉素 + PEO组合的抗臭效应高于单独使用的青霉素 + PEO。氨苄青霉素 + PEO组合对脑膜炎链球菌具有协同作用,并且对H. infuen-Zae产生了附加作用。我们的研究结果表明,精油增加了膜的渗透性活性,并且在人白细胞细胞中也具有吞噬活性。©2021 Saab。由Elsevier B.V.保留所有权利。将抗生素与靶向分析细菌的精油结合起来,可以打开对微生物耐药性打击的新选择。
于2023年11月23日收到; 2024年3月7日接受;于2024年3月26日发表作者分支:1生物学与生物技术系,意大利帕维亚大学,意大利帕维亚大学; 2 MRC全球传染病分析中心,英国伦敦帝国学院; 3英国欣克斯顿的欧洲生物信息学研究所欧洲分子生物学实验室; 4 Microbiology和病毒学单元,Fondazione Irccs Policlinico San Matteo,意大利帕维亚; 5英国巴斯大学生命科学系米尔纳进化中心; 6 Fondazione Irccs Policlinico San Matteo,意大利帕维亚。*信函:John A. Lees,Jlees@ebi。Ac。UKUK关键字:AMR;抗生素抗性;细菌基因组学; gwas;肺炎;机器学习;麦克风缩写:AMR,抗菌耐药性; BACC,平衡精度; CI,一致性指数; CPFX,环丙沙星; ES,效果大小; fn,假否定; Gen,庆大霉素; GTR,一般时间可逆; GWAS,基因组广泛的关联研究; LD,连锁不平衡; MAF,次要等位基因频率; MEM,MeropeNem; MIC,最小抑制浓度; SNP,单核苷酸多态性; TP,真正的积极; TZP,哌拉西林/tazobactam; WGS,整个基因组测序。数据语句:文章或通过补充数据文件中提供了所有支持数据,代码和协议。本文的在线版本可以使用二十四个支持数据和一个补充表。001222©2024作者
对农作物保护化学杀真菌剂的依赖引起了环境和健康的关注,促使需要可持续和环保的替代品。使用拮抗微生物(如Paenibacillus Terrae B6A)的生物控制,为管理疾病的疾病提供了一种环保的方法。该研究的目的是评估P. terrae B6a作为针对增生型PPRI fpri 31301的生物防治剂的功效,重点是其体外拮抗活性,其对真菌形态和酶促含量的影响及其对减轻病原体诱导脂肪诱导脂肪植物的胁迫的能力。使用标准方案进行了B6a对F. forperatum的体外拮抗活性。 planta分析中的是通过用1×10 6 CFU/mL的B6A生物制成玉米种子进行的,并用F. propiferatum感染了7天。 使用分光光度计方法进行了生物染色玉米根的生化,酶和抗氧化剂活性。 使用双重培养和细胞内粗制的体外拮抗测定法分别抑制了F. propiferatum的70.15和71.64%。 此外,B6A改变了f的形态和菌丝结构。 在高分辨率扫描电子显微镜(HR-SEM)下增殖。 这是由于几丁质含量(48.03%)的增加(p <0.05)和细胞外多糖含量(48.99%)和β-1,4-葡萄糖酶活性(42.32%)的降低(P <0.05)。 玉米种子的感染带有F. ropiferatum,导致根长度显着降低(P <0.05)(37%)。使用标准方案进行了B6a对F. forperatum的体外拮抗活性。是通过用1×10 6 CFU/mL的B6A生物制成玉米种子进行的,并用F. propiferatum感染了7天。使用分光光度计方法进行了生物染色玉米根的生化,酶和抗氧化剂活性。使用双重培养和细胞内粗制的体外拮抗测定法分别抑制了F. propiferatum的70.15和71.64%。 此外,B6A改变了f的形态和菌丝结构。 在高分辨率扫描电子显微镜(HR-SEM)下增殖。 这是由于几丁质含量(48.03%)的增加(p <0.05)和细胞外多糖含量(48.99%)和β-1,4-葡萄糖酶活性(42.32%)的降低(P <0.05)。 玉米种子的感染带有F. ropiferatum,导致根长度显着降低(P <0.05)(37%)。使用双重培养和细胞内粗制的体外拮抗测定法分别抑制了F. propiferatum的70.15和71.64%。此外,B6A改变了f的形态和菌丝结构。在高分辨率扫描电子显微镜(HR-SEM)下增殖。这是由于几丁质含量(48.03%)的增加(p <0.05)和细胞外多糖含量(48.99%)和β-1,4-葡萄糖酶活性(42.32%)的降低(P <0.05)。玉米种子的感染带有F. ropiferatum,导致根长度显着降低(P <0.05)(37%)。相对于对照和感染种子,用B6A生物抗化显示根长度(P <0.05),在根长度(44.99%)中,反应性氧(ROS)诱导的氧化损伤显着降低(P <0.05)。总而言之,P。terrae B6a可能是良好的生物防治候选者,并且可以被配制成生物 - 绞霉剂,以控制经济上重要的农作物中的F. propieratum和其他相关的植物病。
由淋病奈瑟氏菌引起的淋球菌感染是由于其高患病率,严重的健康疾病和对抗生素的耐药性而引起的重大全球公共卫生挑战。在过去的二十年中,淋球菌感染率在全球范围内飙升,估计有8240万(4770万– 1.304亿)患者在2020年刚刚感染了Gonorrhoeae。1对阿奇霉素的耐药性正在增加,而新兴的淋病链球菌对头孢曲松的新兴耐药性也引起了山内霉菌的最后一线治疗,其中74个国家报告了N. gonorrhoeae的抗菌耐药性(AMR)。2这种趋势威胁到当前治疗方案的有效性,可能导致更难治疗的感染和较高的并发症发生率,例如不育和新生儿健康问题。此外,抗性菌株的升级需要紧急开发新的抗菌剂和治疗策略,从而增加医疗保健成本。感染可能从症状性泌尿生殖器感染到无症状病例,尤其是在女性中。诸如口咽和直肠中的植入外感染在某些人口中很常见,并且通常是无症状的,它是传播的储层,这使得造成了巨石感染的传播,具有挑战性。高风险人口包括与男性发生性关系的男人,性工作者,监狱中的人,患有人类免疫缺陷病毒(HIV)的人,青少年和年轻人。4作为淋病猪笼草的自然感染不会产生持久的免疫力,经常感染是常见的。3土著人民面临着复杂的社会和文化决定因素,以及澳大利亚原住民和托雷斯海峡岛民的风险高五倍的医疗保健障碍。5,6反复感染可以显着增加女性不孕的风险,特别是由于骨盆炎症性疾病的发展,这可能会损害输卵管并导致不育。7淋球菌感染与许多不良妊娠和新生儿结局有关,例如异位妊娠,早产,膜的过早破裂,围产期死亡率,低出生体重和眼科新生儿。8,9淋球菌感染还可以通过引起局部炎症,增加HIV靶细胞数量并破坏粘膜屏障来促进对HIV的传播和敏感性。10尽管在高收入国家的预防和治疗方面做出了巨大努力,但淋球菌感染仍然是最常见的性传播感染之一(STIS)。澳大利亚的淋球菌感染通知率从2012年到2019年增长了127%。 在2020年和2021年的共同大流行限制期间,这种激增下降了23%。 2022年的通知随后返回到类似于2019年报告的通知。 11在低收入国家和中等收入国家,淋球菌感染的发生率尚未显着澳大利亚的淋球菌感染通知率从2012年到2019年增长了127%。在2020年和2021年的共同大流行限制期间,这种激增下降了23%。2022年的通知随后返回到类似于2019年报告的通知。11在低收入国家和中等收入国家,淋球菌感染的发生率尚未显着
在这项研究中,准备在每种营养状况下继续培养大量细菌群落,并使用称为DNA元法编码的技术分析了每个抗共生中细菌物种的增加或减少。结果表明,在某些营养条件下,每次迭代都过渡到几乎相同的社区,而在其他营养条件下,每次迭代都过渡到少数不同的社区(“替代社区”)。此外,我们已经建立了一种方法来确定是否已经向另一个社区进行了过渡,表明在包含特定营养含量的条件下,已经对替代社区进行了每次迭代。
Applied Biosystems QuantStudio TM 5 Real-Time PCR System 鑑別試驗用 5 µM 引子 F .......................................................................................... 1.0 µL 5 µM 引子 R ......................................................................................... 1.0 µL 3.3 µM 探針 P ........................................................................................................................................................................................................................................... ............................................................................................... 20.0 µL 註 3 : Real-time PCR 溶液應於冰浴中配製。 2.6.检体DNA溶液之制备2.6.1。分离菌株之dna