•高性能:在纯化,清理和浓度的DNA中获得高产量(最高5μg)和高纯度。该套件有能力去除短底漆,洗涤剂和其他低分子量重量反应组件(例如核苷酸,DMSO,BETAINE)。•高浓度:在非常小的体积中洗脱,低至5μl,可以高度浓缩DNA。•强大的灵活性 - 使用所提供的修改协议纯化小型DNA片段,包括寡核苷酸。•节省时间:该协议仅需5分钟即可完成绑定,洗涤和洗脱步骤,并使用最小的孵育时间和旋转时间。•独特的列设计:自旋柱具有独特的设计,可在低体积中洗脱,并最大程度地减少缓冲液的保留和污染物的结转。•优化的缓冲液:缓冲系统已进行了优化,而无需调整pH。•应用兼容性:纯化的DNA已准备好用于下游分子应用,例如限制消化,DNA测序,连接,扩增和其他酶促反应。
为准备实验,将 100 μL 测试样品溶液加入 96 深孔板的孔中。加入 10 μL 稀释的 CHO DNA,使最终 DNA 含量分别为 100 pg、10 pg 和 1 pg。然后将 60 μL 蛋白酶 K 缓冲液和 10 μL 蛋白酶 K 加入孔中。为了将样品的盐浓度调整为 ~0.5 M NaCl,向每个样品中加入 10 μL 5 M NaCl。然后将板放入仪器中,在 56˚C 下放置 30 分钟,以允许蛋白酶 K 反应进行。经过蛋白酶 K 处理后,将板从仪器中取出。将裂解液(含有酵母 tRNA 和糖原)、磁性颗粒和结合溶液加入孔中。将板放回仪器中,自动进行 DNA 捕获、清洗和洗脱。用 200 μL 洗脱缓冲液洗脱 DNA。
•DNA大小 - 能够恢复基因组和线粒体DNA尺寸片段˃50kb。如果存在,也将回收寄生,微生物和病毒DNA。•DNA产量 - 色谱柱的DNA结合能力为125 µg。通常,哺乳动物组织产生:每毫克骨骼,心脏,肺和脑组织1-3 µg DNA,每毫克肝脏和肾脏3-5 µg DNA。人类全血将产生3-7 µg DNA,每100 µL取样。•洗脱体积 - DNA可以洗脱至200 µL DNA洗脱缓冲液或水。•设备 - 水浴或热块(55°C),离心机或真空源和歧管,微离心,涡流,圆锥管(15 - 50 mL)和微量离心管。•DNA应用 - 使用Quick -DNA™MidiPrep Plus套件分离的DNA可用于生命科学研究(例如下一代SEQ。),基因分型,牲畜育种,兽医研究和常规应用测试。
提取方法在裂解后,将预填充的试剂墨盒加载在Magbinder®Fit24上,并选择了MB FIT24™CFDNA试剂盒的预加载提取脚本并在仪器上运行。所有样品均在Magbinder®拟合24仪器上运行,同时将磁杆一致工作,以在试剂盒的不同井中拾取,转移和释放磁性颗粒,以在末端在电流管中提供纯化的CFDNA。cfDNA在100 µl的体积中洗脱,使用Magbinder®拟合24的协议时间约为55分钟,从弹药放置到CFDNA洗脱。
将每个细胞悬浮液添加到包含0.5 mM玻璃珠的2 mL管中(CAT#19-622)。然后以3、4和5的速度在Omni珠子破裂4(CAT#25-010)中均匀地均匀,持续45秒。加工后,将裂解物转移到清洁2毫升试管中,并以10,000 x g离心1分钟,以弥补任何细胞碎屑。使用Quick-DNA™真菌/细菌微型REIPREP试剂盒(Zymo,Cat#D6005)1 µL DNA洗脱器在纳米光谱表(Thermo Fisher)上量化1 µL DNA洗脱器,以确定DNA浓度和纯度。
基于低成本、储量丰富且环保的亲和基质的“绿色”蛋白质纯化/固定工艺非常可取。未改性的二氧化硅基质非常适合这些需求。由于富含组氨酸的二氧化硅结合肽经常在生物淘选实验中分离,因此这项工作旨在评估使用裸露二氧化硅作为纯化/固定 His 标记蛋白质的替代基质的可行性。对纯化的 His6 标记 EGFP 进行的吸附和解吸研究表明,在测试条件下,不同大小和孔隙率的裸露二氧化硅颗粒会结合,并且可以使用含有 L-精氨酸/L-赖氨酸的环保洗脱液进行洗脱。未标记的 EGFP 不会与这些基质结合。小规模批量纯化方案使用 Davisil 643 或 646 级硅胶作为亲和基质,Tris 缓冲盐水洗脱液中含有 0.5 M L-精氨酸 (pH 8.5),仅经过一个洗脱步骤,便可从大肠杆菌裂解物中纯化出纯度高达 96% 的 His6-EGFP,回收率约为 70%。用二氧化硅结合肽 Car9 标记的 EGFP 以类似的纯度和产量回收。其他 His 标记蛋白也可以纯化到类似的纯度水平。该批量纯化方案的规模被证明是可扩展的。这些结果表明,未改性的二氧化硅基质可用于有效纯化 His 标记蛋白。由于双标记 His6-EGFP-Car9 的回收率仅为 30 – 55%,因此标签组合对于固定化目的而言是有利的。
用于 HPLC 梯度分析。通过临界波长的梯度控制洗脱和漂移可确保无峰基线。GOLD 质量,过滤深度为 0.1 µm,适合 UPLC 分析。更多
在开始以下步骤之前,请阅读重要的笔记。1。将多达200 µL样品(全血,血清,血浆,体液,Buffy Coat)转移到微分离管(未提供)。- 如果样品体积小于200 µL,请添加适当的PBS体积。2。(可选):如果需要无RNA的基因组DNA,则将4 µL的100 mg/ml RNase A加入样品中,并在室温下孵育2分钟。3。将20 µL蛋白酶K和200 µL Fabg缓冲液加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合。- 请勿将蛋白酶K直接添加到Fabg缓冲液中。4。在60ºC下孵育15分钟以裂解样品。在孵育过程中,每3〜5分钟间隔涡流一次。5。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。6。将200 µL乙醇(96〜100%)加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合10秒。7。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。8。将Fabg Mini柱放在收集管上。小心地将混合物(包括任何沉淀物)转移到Fabg Mini柱中。在6,000 x g处离心1分钟,然后将fabg mini柱放在新的收集管上。9。将400 µL W1缓冲液添加到Fabg Mini柱中,并以全速离心30秒,然后丢弃流通液。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到W1缓冲液中。10。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到洗涤缓冲液中。11。12。将750 µL洗涤缓冲液添加到Fabg Mini柱中,并全速离心30秒,然后丢弃流通液。全速离心3分钟以干燥色谱柱。重要步骤!此步骤将避免残留液体抑制随后的酶促反应。将Fabg Mini柱放在洗脱管上。13。将加热洗脱缓冲液或DDH 2 O(pH 7.5-9.0)加入Fabg Mini柱的膜中心。站立fabg mini柱持续3分钟。- 重要步骤!为了有效洗脱,请确保将洗脱溶液分配到膜中心并完全吸收。14。全速离心1分钟以洗脱总DNA。15。将总DNA存储在4°C或-20°C。