整个质粒和Amplicon Express的测序配置为150bp配对的末端。因此,索引ED扩增子的长度应在150-250bp之间(这是靶向扩增子的长度减去NEX TERA标签)。在同一测序运行中具有不同大小的放大器,例如两个极端:150bp和250bp,可能会产生不同数量的测序读数。这是由于较小尺寸群集的扩增子在流动池上更有效地簇,从而导致其在测序池中较高的表示(从而产生更多数据)。AGRF将采用汇总偏移量来解释大小的差异,并最大程度地减少测序读数的可变性。短PCR扩增子不应包含任何内部修饰,荧光团或深色淬火器。服务仅在珀斯可用。4.0样本提交要求
描述:重组A.酸性AAPCAS12B(V型CRISPR相关蛋白CAS12B),无标签。AAPCAS12B属于V型CRISPR效应器CRISPR-CAS12B/C2C1,对于广泛的应用,高温。物种:酸性酸性酸性构建体:CAS12B(全长)(酸性)浓度:0.20 mg/ml表达系统:大肠杆菌纯度:80%格式:水缓冲液溶液。以:50 mm磷酸钠,pH 7.5、300 mm NaCl,1 mM DTT和10%甘油MW:128 kDa GenBank登录:WP_067623834稳定性:至少在-80°C时至少6个月。存储:-80°C使用的说明:在冰上解冻,并在使用前轻轻混合。不要涡旋。在打开前进行快速旋转。等分的小容量,然后闪烁冻结以进行长期存储。避免多个冻结/解冻周期。测定条件:使用基于CRISPR的荧光记者测定法测量了不同量的AAPCAS12B活性,以获得最佳结果。使用RNA引导的DNA与CAS12结合,将靶DNA切割和不加选择的单链DNA侧支裂解激活。荧光信号的发射是由于裂解后ssDNA记者的降解所致。Active Cas12 was thawed on ice while 1X Endonuclease Buffer containing 10 mM Tris- HCl, pH 8.0, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl 2 , and 0.1 mg/ml BSA, guide RNA (custom designed crRNA), ds DNA activator (complementary sequence to crRNA and a PAM sequence specific for Cas enzyme) and FQ-ssDNA substrate (用荧光团和淬火器标记)平衡为室温。然后将板密封并在37°C下孵育10-30分钟。使用1X内核酸酶缓冲液制备了活性CAS12(4倍最终浓度)指南RNA(4倍最终浓度)和含有DS DNA激活剂和SSDNA报告基因(2倍最终浓度)的激活器/报告剂混合物(2倍最终浓度)。10 µL的4倍活性CAS12和10 µL的4倍引导RNA在室温下在固体黑色96井板的一半面积中预孵育10分钟。预孵育后,将20 µL的2倍激活剂/报告基因混合物添加到板上,并将其放置在振动孵化器上1分钟。然后将板平衡至室温,去除板密封剂,并在毫用读取器上读取荧光。阴性对照是通过用相等量的测定缓冲液代替酶工作溶液来测量的。应用程序: