该方案描述了如何将核糖核蛋白(RNP)复合物组成,这些复合物由纯化的CAS9核酸酶复制,用化学改良的合成单导剂RNA(SGRNA)复制到永生的粘附或悬浮液中。包括一个敲门选项。RNP递送是使用Thermo Fisher Neon™转染系统完成的。包括各种细胞类型的电穿孔设置的参考。化学修饰的SGRNA旨在抵抗可导致细胞死亡的外核酸和先天的细胞内免疫级联反应。Editco化学修改的合成SGRNA具有特殊的纯度,并且始终驱动高编辑频率。
电气额定值 100–240 VAC,50/60 Hz,270 VA 脉冲电压 500–2,500 V 脉冲持续时间 1–100 毫秒 最大占空比 0.1 充电时间 最长 6 秒 海拔高度 最高 2,000 米 工作温度 15°C 至 30°C 最大相对湿度 最高 80% 防护等级 IPX0 保护接地 I 类(接地) 安装类别 II 仪器类型 台式装置 设备尺寸(宽 x 长 x 高) 9.5 x 10.1 x 7.6 英寸(24.1 x 25.7 x 19.3 厘米) 1 通道移液器工作站尺寸(宽 x 长 x 高) 4.9 x 6.6 x 5.0 英寸(12.4 x 16.8 x 12.7 厘米) 8 通道移液器工作站尺寸(宽 x 长 x 高) 5.2 x 8.9 x 4.8 英寸(13.2 x 22.6 x 12.2 厘米) 设备重量 10.1 磅(4.6 千克) 内置功能 触摸屏(800 x 600 像素),数字显示
PD 是成人全身性疾病患者中观察到的皮肤病 [1]。虽然 Rapini 在 1989 年提供的分类已被广泛采用,但值得注意的是,PD 的分类仍然是一个需要进一步研究和统一的课题。PD 是一组罕见的疾病,最常与患者的肾脏疾病、糖尿病和代谢综合征有关,但也有药物诱发 PD 的报道。我们是第一个进行文献综述来总结由分子靶向治疗 (MTT) 药物(索拉非尼、尼洛替尼、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、维莫非尼、仑伐替尼、西罗莫司、贝伐单抗、奈昔单抗、帕尼单抗、西妥昔单抗、特雷普利、苯达莫司汀-利妥昔单抗)引起的 PD 的人。MTT 药物是癌症治疗的主要方式之一,它通过抑制细胞生长来阻止癌细胞的生长。
系统组件....................... ... 11 Neon™ NxT 单通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 单通道移液器..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站.................................................................................................................................................................................. .................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 15 Neon™ NxT 8 通道移液器.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. ..................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 尖端..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 1 通道管.................. ... ........................................................................................................................................................................................................................................................................19 Neon™ NxT 8 通道管.......................................................................................................................................................................................................................................................................19
6. 用 2 mL 电解缓冲液填充 Neon NxT 管(对于 10 μ L Neon NxT 吸头,使用缓冲液 E10)。 7. 将 Neon NxT 管插入 Neon NxT 移液器站。 8. 在设备上设置所需的电穿孔方案和脉冲条件。 9. 将预热的细胞培养板从培养箱移到生物安全柜 10. 要将 Neon NxT 吸头插入 Neon NxT 移液器,请按下移液器上的按钮至第二档以打开夹子。 11. 按照下面的板图或表格对样品进行电穿孔。移取样品溶液,将移液器停靠在站上,然后应用相应的电穿孔方案(11a)。每次电穿孔运行完成后,将样品转移到
1。如果需要进一步的长期研究,糖尿病发生后两到五天(如血糖水平所示)会接受分泌胰岛素的颗粒。 2。 胰岛素颗粒释放约0.1 U /24小时> 30天,在IACUC啮齿动物手术指南之后,使用制造商的套管卡或手术切口将皮下植入皮下植入。 如果对植入物胰岛素颗粒进行切口,请按照与渗透泵植入IACUC标准程序相同的说明,但是您不会植入渗透泵,而是植入胰岛素颗粒。 遵循胰岛素颗粒制造商提供的给药指南。 根据制造商的不同,体重不到25克的小鼠可能只需要一个胰岛素颗粒。血糖不受正常范围内(70-150 mg/dl)内的较大小鼠可能会接受两个胰岛素颗粒。 3。 应在协议中描述替代性胰岛素治疗。糖尿病发生后两到五天(如血糖水平所示)会接受分泌胰岛素的颗粒。2。胰岛素颗粒释放约0.1 U /24小时> 30天,在IACUC啮齿动物手术指南之后,使用制造商的套管卡或手术切口将皮下植入皮下植入。如果对植入物胰岛素颗粒进行切口,请按照与渗透泵植入IACUC标准程序相同的说明,但是您不会植入渗透泵,而是植入胰岛素颗粒。遵循胰岛素颗粒制造商提供的给药指南。根据制造商的不同,体重不到25克的小鼠可能只需要一个胰岛素颗粒。血糖不受正常范围内(70-150 mg/dl)内的较大小鼠可能会接受两个胰岛素颗粒。3。应在协议中描述替代性胰岛素治疗。
电穿孔会导致细胞膜通透性暂时增加,并导致兴奋细胞和非兴奋细胞的跨膜电压 (TMV) 发生长时间变化。然而,这些 TMV 变化的机制仍有待完全阐明。为此,我们使用 FLIPR 膜电位染料将两种不同的细胞系暴露于单个 100 µ s 电穿孔脉冲后,在 30 分钟内监测 TMV。在表达极低水平内源性离子通道的 CHO-K1 细胞中,脉冲暴露后的膜去极化可以用非选择性漏电流来解释,这种漏电流一直持续到膜重新密封,使细胞能够恢复其静止的 TMV。在表达多种不同离子通道的 U-87 MG 细胞中,我们意外地观察到初始去极化阶段之后的膜超极化,但仅在 33 ◦ C 时发生,而在 25 ◦ C 时未发生。我们开发了一个理论模型,该模型得到了离子通道抑制剂实验的支持,该模型表明超极化在很大程度上可归因于钙激活钾通道的激活。离子通道激活与 TMV 和细胞内钙的变化相结合,参与各种生理过程,包括细胞增殖、分化、迁移和凋亡。因此,我们的研究表明离子通道可能是影响电穿孔后生物反应的潜在靶点。
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10p的抽象部分缺失是一种罕见的疾病。这种疾病的共同特征包括智力障碍,发育延迟,畸形特征,甲状旁腺功能减退,耳聋和肾异常,但患者之间的表型可能会有所不同。我们报告了一个婴儿女孩,出现了全球发育延迟,唇裂,先天性外脱皮,喉乳突,心房间隔缺陷和感觉性听力损失的独特面部特征。46,xx,del(10p→ter)在G带分析中观察到。进行了染色体微阵列,以获取有关可能与临床表型,医疗问题和管理有关的缺失大小和基因受累的更多详细信息。缺失涉及10p15.3 – p12.31的区域,大约为19.528739 MB。缺失的大小可以确定表型的变异性,而微阵列对于更好地理解缺失大小和基因受累的必要条件是必要的。
手术程序:将根据IACUC的啮齿动物生存手术指南制备怀孕(12.5-16.5 d后)女性的腹部。然后,将在皮肤和腹膜中进行腹部中线切口,长度约1.5厘米至2厘米,以暴露子宫角。应注意维持无菌的子宫和周围的组织,并用温暖的无菌盐水保持湿润。胚胎/胎儿可以使用纤维光通过子宫壁进行透射,以可视化受体组织。可视化目标区域的其他方式,例如超声。完成电穿孔程序后,子宫角将返回腹膜腔,切口将以两层关闭。完成电穿孔程序后,子宫角将返回腹膜腔,切口将以两层关闭。
