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干细胞，组织工程中的分化和基因编辑专家
，请查看我们的招聘政策所需的候选人将作为服务患者衍生的类器官（PDOS），鼠标和人类多能2D（单层）和3D（类器官）干细胞分化程序提供的角色，并将执行CRISPR/CAS9基因编辑服务。候选人将根据用户要求特定项目来设置特定的2D/3D差异化和基因编辑程序。候选人应具有准确的工作习惯，并成为一个好的团队成员。理想的候选人具有强大的多任务和以服务为导向的心态的能力。该职位涉及在一年中的一些周末和假期工作。单元组织工程设施是核心设施计划中的科学技术核心设施。组织工程单元的目标是为CRG，PRBB和外部研究人员提供干细胞生物学，干细胞分化，器官形成，诱导多能干细胞（IPSC）和CRISPR/CAS9基因编辑领域中使用的最新技术。它是8年前创建的，目的是帮助研究界进行干细胞和器官项目，以增加干细胞和类器官项目和应用的影响。该单元正在不断设置在上述字段中出现的新技术。我们想雇用谁？专业经验
便携式铯蒸气磁力仪型号 G-859AP ...
操作 G-859AP 采矿磁选机使用图形界面，可快速高效地进行勘测设计和数据采集。“简单”或“映射”模式使用线号和已知的放样参考点来定义地图参数。或者，用户可以使用集成的 Tallysman TW5310™ GPS 自动绘制位置图。位置信息可能来自外部 GPS、操作员输入的间距均匀的基准标记，或两者兼而有之。用户可随时切换到“剖面”模式，以堆叠剖面的形式观察最后 5 条数据线。数据收集在最多 5 个单独的勘测文件中，并通过高速 RS-232 数据链路（或带转换器的 USB）传输到计算机，以进行进一步分析和地图生成。提供功能齐全的图形数据编辑程序 MagMap2000，允许重新定位、重新对齐、GPS 平滑、数据过滤和数据插值。编辑后，数据将格式化为 Surfer for Windows 或 Geosoft 格式，以便进一步绘图和分析。速度和效率 G-859AP 数据采集提供连续（自动）或离散站点记录。由于仪器在连续模式下的采样率很高，因此数据质量始终很高，而且大多数项目的成本都较低。这使操作员能够快速勘测某个区域，在给定的时间段内覆盖的面积比其他磁力仪多 10 倍。
酿酒酵母表达系统代谢调控的先进技术和新进展展望
酿酒酵母是广泛使用的生物合成系统之一，用于生产各种生物产品，尤其是生物治疗药物和重组蛋白。由于外来基因的表达和插入总是受到酿酒酵母内源性因素和非生产性程序的阻碍，因此已经开发出各种技术来增强转录的强度和效率并促进基因编辑程序。因此，阻碍异源蛋白质分泌的限制已经得到克服。已经开发出负责转录起始和精确调控表达的高效启动子，这些启动子可以通过合成启动子和双启动子表达系统进行精确调控。适当的密码子优化和协调以适应酿酒酵母的基因组密码子丰度有望进一步提高转录和翻译效率。通过将专门设计的信号肽与上游外源基因融合，可以实现高效、准确的转运，从而促进新合成的蛋白质的分泌。除了广泛应用的启动子工程技术和明确的内质网分泌途径机制外，创新的基因组编辑技术 CRISPR/Cas（成簇的规律间隔的短回文重复序列/CRISPR 相关系统）及其衍生工具可以更精确、更有效地进行基因破坏、定点突变和外源基因插入。本综述重点介绍为精确调控酿酒酵母表达系统的代谢而开发的复杂工程技术和新兴遗传技术。
体外组织培养技术在小麦育种和遗传改良中的应用
摘要：过去，新的遗传变异来源仅限于现有的种质。小麦的基因组中存在各种农学性状，人们对此进行了广泛的研究。小麦染色体较大，多倍体基因组能够容忍染色体的增加或丢失，这促进了早期利用细胞遗传学技术进行小麦遗传学研究的快速发展。与此同时，小麦基因组较大，限制了以二倍体物种为重点的遗传表征研究的进展，目前已经开发出小型基因组和基因工程程序。如今，遗传转化和基因编辑程序为小麦育种提供了有吸引力的传统技术替代方案，因为它们允许将一个或多个基因引入或改变到优良品种中，而不会影响其遗传背景。最近，在再生各种植物组织方面取得了重大进展，为再生转基因植物提供了必要基础。此外，农杆菌介导、基因枪和植物内粒子轰击 (iPB) 基因传递程序已开发用于小麦转化和高级转基因小麦开发。因此，除了目前传统的改善性状价值的努力之外，现在还有几种有用的基因已被转移或将有助于转移到小麦中，例如对非生物和生物因素的抵抗力、谷物质量和植物结构。此外，植物内基因组编辑方法将极大地促进基因组编辑作物的社会实施，以创新育种渠道并利用独特的气候适应性。
背景：1。一部分风险CRIS/CAS
新的基因组编辑程序目前正在迅速发展。这也增加了负责处理相关风险的需求。最有希望，最有希望的程序是CRISPR/CAS系统。在本背景文件中，使用案例研究讨论了基因组植物的可能环境影响。使用LeIndotter（Camelina sativa）用于此，在其脂肪酸含量中的基因剪刀CRISPR/CAS9的帮助下，已经更改了几次。解释了对基因组植物的代谢途径的不良影响，以及预期和无意变化的环境影响。即使预期变化导致的意外副作用，即使DNA中的变化是成功的，并且通过基因组编辑过程，这些变化的效果可能与预期的效果大不相同。，确切地说，不能准确等同。由于与其他基因的相互作用，例如，植物成分的组成可能会发生变化，或者它们变得更容易受到疾病的影响。也可能是与花粉，土壤生物或食物链的相互作用。这些影响有时很难发现，因为它不足以仅检查DNA的结构。相反，通常必须更详细地检查细胞中的复杂代谢过程。对由CRISPR/CAS引起的其他代谢路径和信号路径的无意影响导致对遗传物质的变化，除了所需的情况外，还可以干预其他，无意的信号或代谢途径：代谢途径彼此近距离交流。这是蛋白质和/或代谢产物可以相互相互作用并刺激或阻止其功能的方式。是用基因剪刀预防的，例如，阅读基因，不再形成相应的蛋白
难以转化是豆科植物基因组编辑的障碍
植物基因组编辑是最近发现的一种定向诱变方法，已成为作物改良和基因功能研究的有前途的工具。过去十年中，许多基因组编辑植物已经出现，例如水稻、小麦和番茄。由于基因组编辑程序的初步步骤涉及基因转化，因此基因组编辑的适应性取决于基因工程的效率。因此，关于上述作物的报道很多，因为它们相对容易转化。豆科作物富含蛋白质，因此是大多数国家人类饮食中植物蛋白质的首选来源。然而，豆科植物的种植经常受到各种生物/非生物威胁，从而导致高产量损失。此外，某些豆科植物（如花生）含有过敏原，需要消除这些过敏原，因为它们剥夺了许多人从此类作物中获得好处的权利。某些豆科植物的进一步遗传变异有限。基因组编辑不仅可以提供对抗生物/非生物胁迫的解决方案，还可以产生理想的敲除和遗传变异。然而，除大豆、苜蓿和日本莲花外，关于其他豆科作物基因组编辑的报道较少。这是因为，除上述三种豆科作物外，大多数豆科植物的转化效率都很低。获得更多的基因组编辑事件是可取的，因为它提供了根据基因型/表型选择最佳候选者的选项，而没有脱靶突变的负担。消除基因工程的障碍将直接有助于提高基因组编辑率。因此，本综述旨在比较各种豆科植物的转化、编辑和再生效率，并讨论可用于提高豆科植物转化和基因组编辑率的各种解决方案。
人类生殖细胞基因组编辑：事实说明
基因编辑 基因编辑是通过插入、删除或修改 DNA 来改变生物体的特定遗传特征。新兴的基因编辑技术和工具（例如 CRISPR）可以以一定的精度编辑基因，从而扩大其在医疗、农业和工业领域的应用。这些突破性技术可能为治疗毁灭性的人类疾病和提供环境可持续的粮食生产系统提供一系列不同的选择，这些系统可以养活不断增长的世界人口，预计到 2050 年将超过 90 亿。目前，人类基因编辑的主要应用是非生殖细胞（“体细胞”），其中 DNA 的任何变化都不会传递给下一代。大多数人体细胞都是体细胞——肾脏、心脏、大脑、皮肤、骨骼、血液和结缔组织都是由体细胞组成的。1 体细胞基因改造正在带来传统疗法无法实现的变革性健康结果。 2 体细胞基因编辑程序的首次试验现已获得批准，人们普遍认为 CRISPR 可能有助于加速治疗以前无法治愈的疾病，例如血友病、囊性纤维化和杜氏肌营养不良症。 3 迄今为止，只有一种用于治疗视网膜营养不良症的基因疗法（Luxturna - Spark Therapeutics）和用于治疗淋巴细胞白血病的 Kymriah（Novartis）是基于细胞的基因疗法（“基因编辑”）的唯一例子。生殖细胞是指参与生殖的细胞（即精子或卵细胞），编辑这些细胞、它们的前体或早期胚胎的细胞意味着这些变化将传递给后代。
背景：2。CRISPR/CAS应用程序固有风险的一部分
新的基因组编辑程序目前正在迅速发展。这也增加了负责处理相关风险的需求。最有希望，最有希望的程序是CRISPR/CAS系统。基因剪刀CRISPR/CAS的应用非常不同，并且在多阶段过程中运行。组合了各种分子生物学技术，每种都与特定风险相关。当CRISPR/CAS插入细胞和细胞核时，基因组，RNA或蛋白质的不良变化可能在细胞水平上发生。本背景文件概述了使用CRISPR/CAS和较旧的基因工程方法时可能发生的固有风险。此外，还提出了可以广泛检查基因组植物的程序，并可以发现无意的变化。基因组编辑是一个多阶段的过程，可以使用基因剪刀导致无意的变化。在背景文件中详细描述了使用基因剪刀的不同阶段。在第一步中，必须首先将基因剪刀引入蔬菜细胞中。仅在下一步中才形成细胞的基因剪刀，识别目标序列并切割。目前，流派DNA随附有关类型剪刀形成的信息，目前被带入细胞中并安装在遗传材料中。通过旧基因工程的方法（例如基因大炮的颗粒火或农业转化）进行了第一步。第二步是当基因剪刀在细胞中活跃并且目标序列正在寻找和切割时，新基因工程的应用。作为此多阶段过程的风险的一个例子，大米应为使用基因剪刀CRISPR/CAS9来增加收入[1]。展示了自己
碳足迹信息如何影响消费者选择？现场实验
luzi冰雹接受。We thank an anonymous associate editor, an anonymous reviewer, Jens Müller, Victor van Pelt, conference and workshop participants at the 2nd JAR Registered Reports Conference, LMU Munich, HU Berlin, Passau University, Aalto University, IESE Busi- ness School, University of Padova, and the European Accounting Association's Virtual Ac- counting Research Seminar (VARS), as well as members of the Accounting for透明度协作研究中心有价值的评论。，我们还感谢穆恩申（StudentenwerkMünchen）的食堂业务的负责人和几名员工的支持和见解，以及Luise Engel的宝贵研究援助。我们感谢Sandra Denk，Andreas Oberhauser，Alexander Paulus，Julian Schneider，Victor Sehn和Victor Wagner在进行实验方面的协助。这项研究已获得胡柏林道德委员会的批准。作者感谢德国研究基金会（Deutsche Forschungsgemeinschaft -dfg）的财务支持：项目ID 403041268- TRR266。Bianca Beyer承认芬兰经济教育基金会（Likesivistysrahasto）的财务支持。可以在https://github.com/trr266/ Carbonfood访问论文的数据和代码。本文是由JAR为其2021年的特殊2021年注册报告Conforence实施的基于注册的编辑程序（REP）产生的最终注册报告；该过程的详细信息可在此处找到：https：//www.chicagobooth.edu/research/chookaszian/chokaszian/journer-oke-of-accounting-research-research/mogentered-Reports。本报告的接受的建议和在线附录可以在此处找到：https：//research.chicagobooth.edu/ arc/journal arc/journal-of-accounting-research-research/inline-supplements。
基于 CRISPR 切口酶的软基因组编辑
摘要 Prime editor 在疾病建模和再生医学方面具有巨大潜力，包括针对肌肉萎缩症杜氏肌营养不良症 (DMD) 的研究。然而，Prime 编辑系统的庞大规模和多组分性质带来了巨大的生产和交付问题。本文，我们报告将优化的全长 Prime 编辑构建体包装在腺病毒载体颗粒 (AdVP) 中，可以在人类成肌细胞（即成肌细胞和间充质干细胞）中安装精确的 DMD 编辑（分别高达 80% 和 64%）。AdVP 转导确定了优化的 Prime 编辑试剂，这些试剂能够恢复约 14% 患者基因型的 DMD 阅读框架，并恢复未选择的 DMD 肌细胞群中的肌营养不良蛋白合成和肌营养不良蛋白-β-肌营养不良聚糖连接。 AdVP 同样适用于纠正 DMD iPSC 衍生的心肌细胞，并通过靶向外显子 51 缺失提供针对 DMD 修复的双引物编辑器。此外，通过利用不依赖细胞周期的 AdVP 转导过程，我们报告 2 组分和 3 组分引物编辑模式在细胞周期中最活跃，而不是在有丝分裂后细胞中。最后，我们确定将 AdVP 转导与无缝引物编辑相结合可以通过连续的递送轮次堆叠染色体编辑。总之，AdVP 允许对高级引物编辑系统进行多种研究，而不管其大小和组分数量如何，这应该有助于它们的筛选和应用。引言由序列定制的向导 RNA (gRNA) 和 Cas9 内切酶组成的可编程核酸酶是基因组编辑的有力工具。然而，双链 DNA 断裂 (DSB) 的普遍修复是通过容易出错的末端连接过程进行的，这赋予了基于核酸酶的基因组编辑内在的高诱变特性。相比之下，prime 编辑允许在特定基因组序列上安装任何单个碱基对变化和精确的小插入或删除 (indel)，而不会形成 DSB (1)。通常，prime 编辑复合物包含与切口 Cas9 变体 (prime editor) 融合的工程逆转录酶 (RT) 和 3' 端延伸的 gRNA，称为 prime 编辑向导 RNA (pegRNA)。pegRNA 分别通过其间隔物和 RT 模板部分指示靶位点选择和感兴趣的编辑。在靶位点切口后，释放的单链 DNA 与 pegRNA 的引物结合位点 (PBS) 退火，引发 RT 介导的 RNA 模板复制为互补 DNA，在基因组位点杂交、瓣切除和 DNA 修复或复制后，导致靶向染色体编辑 (1)。prime 编辑有两种主要模式，即 PE2 和 PE3 (1)。前者的 2 组分系统仅依赖于一个引物编辑蛋白（例如 PE2）和一个 pegRNA，而后者的 3 组分系统则需要一个补充的常规 gRNA。在 PE3 中，gRNA 引导的未编辑 DNA 链切口促使其被编辑链取代，这通常会导致同源双链 DNA 编辑频率更高，尽管同时增加了插入/缺失副产物 (1)。最近，基于将 prime editor 与双 pegRNA 一起递送的多重 prime 编辑正在进一步扩大 DSB 独立的基因组编辑程序的范围。事实上，在这种情况下，一对 prime 编辑复合物协同作用以安装基因组插入、删除和/或替换，其大小远远大于通过 PE2 和 PE3 策略实现的插入、删除和/或替换 (2-7)。由于其巨大的潜力和多功能性，prime 编辑系统正在快速发展，包括改进的 prime 编辑蛋白和 pegRNA，例如 PEmax (8) 和工程 pegRNA (epegRNA) 架构 (9,10)。PEmax 构建体在其 Cas9 切口酶和 RT 部分分别整合了特定突变和密码子优化，有助于增强 prime 编辑活性 (8)。 epegRNA 具有以结构化 RNA 假结形式延伸的 3' 端（例如 tevopreQ1），可保护它们免受核酸外切降解（9,10）。尽管取得了这些重要进展，但 Prime 编辑组件的庞大尺寸造成了严重的生产和交付瓶颈，阻碍了它们最有效的测试和应用。旨在改善交付瓶颈的方法包括将 Prime 编辑器构建体拆分为亚基，这些亚基在进入细胞后原位组装束缚或未束缚的 Cas9 切口酶和 RT 部分（11-20）。此外，其他辅助方法允许通过以下方式富集 Prime 编辑的细胞级分； (i) 使用替代报告基因或药物系统分离在靶基因和可选择标记基因上共同编辑的细胞 (21-23)，或 (ii) 通过共同递送细胞 DNA 错配修复途径的显性负因子来干扰编辑的 DNA 链去除 (8,10)。尽管适用于特定环境，但这些主要编辑系统的多组分特性使其设计复杂，并且其更广泛的应用具有挑战性。PEmax 构建体分别在其 Cas9 切口酶和 RT 部分中整合了特定突变和密码子优化，这有助于增强 prime editing 活性 (8)。epegRNA 具有以结构化 RNA 假结 (例如 tevopreQ1) 形式延伸的 3' 端，可保护它们免受核酸外切降解 (9,10)。尽管取得了这些重要进展，但是 prime editing 组件的尺寸较大，造成了严重的生产和交付瓶颈，阻碍了其最有效的测试和应用。旨在改善交付瓶颈的方法包括将 prime editor 构建体拆分为亚基，当进入细胞时，亚基就地组装束缚或不受束缚的 Cas9 切口酶和 RT 部分 (11-20)。此外，其他辅助方法允许通过以下方式富集 prime 编辑的细胞级分； (i) 使用替代报告基因或药物系统分离在靶基因和可选择标记基因上共同编辑的细胞 (21-23)，或 (ii) 通过共同递送细胞 DNA 错配修复途径的显性负因子来干扰编辑的 DNA 链去除 (8,10)。尽管适用于特定环境，但这些主要编辑系统的多组分特性使其设计复杂，并且其更广泛的应用具有挑战性。PEmax 构建体分别在其 Cas9 切口酶和 RT 部分中整合了特定突变和密码子优化，这有助于增强 prime editing 活性 (8)。epegRNA 具有以结构化 RNA 假结 (例如 tevopreQ1) 形式延伸的 3' 端，可保护它们免受核酸外切降解 (9,10)。尽管取得了这些重要进展，但是 prime editing 组件的尺寸较大，造成了严重的生产和交付瓶颈，阻碍了其最有效的测试和应用。旨在改善交付瓶颈的方法包括将 prime editor 构建体拆分为亚基，当进入细胞时，亚基就地组装束缚或不受束缚的 Cas9 切口酶和 RT 部分 (11-20)。此外，其他辅助方法允许通过以下方式富集 prime 编辑的细胞级分； (i) 使用替代报告基因或药物系统分离在靶基因和可选择标记基因上共同编辑的细胞 (21-23)，或 (ii) 通过共同递送细胞 DNA 错配修复途径的显性负因子来干扰编辑的 DNA 链去除 (8,10)。尽管适用于特定环境，但这些主要编辑系统的多组分特性使其设计复杂，并且其更广泛的应用具有挑战性。