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World File Search System胶原酶
果糖与葡萄糖：调节干细胞生长和通过补充糖的功能
试剂或资源源标识符化学品，肽和重组蛋白Puelink RNA Mini Kit Invitrogen 12183018A ISCRIPT™ISCRIPT™cDNA合成Kit Kit Biorad 1708840 Sybr™SELICS SYBR™SELECT MASTER MASTER MASTER MIST 4-12％，10井Genscript M00653胶原酶II Sigma C2-28-100MG DMEM（无葡萄糖）GIBCO GIBCO 11-966-025 FBS FISHER FISHER FISHER SCOCICILIFIC SH3010903 PENICILLIN SH30103 PhosSTOP Roche 4906845001 IBMX Sigma 410957 Insulin Sigma I5500 Indomethacin Sigma 405268 Triiodothyronine (T3) Sigma T6397 Dexamethasone Sigma 265005 Rosiglitazone Sigma PHR2932 LipidTOX deep red neutral lipid stain Fisher Scientific H34477超级阻止诱因37535抗体抗KHK Sigma HPA007040抗HIF1α（D2U3T）细胞信号传导14179抗PPARγ（C26H12）细胞信号2443 C/EBPα细胞信号8178 Anti-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-EBPα细胞信号8178 Anti-al timnigin-αtubin tim-αtubin（38）细胞信号2250质粒和siRNA PVSV-G添加剂138479 PCL-ECO ADDGENE 12371 PBABE-NEOLARGE TCDNA ADDGENE 1780人HIF1A 3091 sirna accell drm-a-a-a-a-004018230001生物。n/a
亲本和子代获得 1q 染色体重复
图 1 hiPSC-NSC 的生成和核型分析。A、在 Matrigel 上生长的 R-iPSC4-hiPSC 菌落。B、用胶原酶 IV 消化 hiPSC 后形成的胚状体 (EB)。C、用 TGF β 抑制剂 SB421543 和 BMP 抑制剂 dorsomorphin 处理的 EB 接种到聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白包被的板上后 7-10 天出现玫瑰花结状结构。D、通过解离玫瑰花结状结构并接种到聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白包被的板上获得神经外胚层细胞。E、F、这些细胞表达 NSC 标记物 Nestin (E) 并在分化第 30 天分化为表达微管相关蛋白 2 (MAP2) 的神经元 (F)。细胞核用 Hoechst 33342 (蓝色) 染色。比例尺：100 µ m。G、H、基于全基因组 SNP 阵列的 hiPSC-NSC 核型分析。针对位于该区域的阵列上所有 SNP，绘制了每条染色体的 B 等位基因频率（上图）和 log 2 R 比率（下图）。每个点都是一个 SNP。虽然第 10 代（p10）的细胞没有显示任何主要核型异常（G），但 p16 的 hiPSC-NSC 表现出 1 号染色体整个长臂的重复，dup(1)q（H）
CRISPR-CAS9介导的甲基转移酶METTL4突变导致胚胎bbybyx mori
摘要：最近发现DNA N6-甲基趋化（6MA）在基因中扮演调节作用，该作用与真核物种的各种生物学过程联系起来。6MA甲基转移酶的功能鉴定对于理解表观遗传6MA甲基化的潜在分子机制至关重要。据报道，甲基转移酶METTL4可以催化6ma的甲基化。但是，METTL4的功能在很大程度上未知。在这项研究中，我们旨在研究Bombyx Mori同源性METTL4（BMMETTL4）在鳞翅目模型昆虫中的作用。通过使用CRISPR-CAS9系统，我们在蚕中对BMMETTL4进行了体积突变，发现BMMETTL4的破坏会导致蚕胚晚期的发育缺陷和随后的致死性。我们进行了RNA-Seq，并确定了BMMETTL4突变体中有3192个差异表达的基因，其中包括1743个上调和1449个下调的基因。基因和基因组分析的基因本体论和京都百科全书表明，涉及分子结构，几丁质结合和丝氨酸水解酶活性的基因受BMMETTL4突变的显着影响。我们进一步发现，表皮蛋白基因和胶原蛋白的表达明显降低，而胶原酶高度增加，这对异常的胚胎和蚕的孵化性降低了。采取了这些结果，这些结果表明6MA甲基转移酶BMMETTL4在调节蚕的胚胎发育中的关键作用。
使用3D Bioprointer制造的胶原蛋白 - 北酸球体
1型糖尿病是由对β细胞抗原引起的自身免疫反应引起的。如今，胰岛素注射仍然是领先的治疗选择。但是，注射治疗无法模仿β细胞提供的高度动态胰岛素释放。3D细胞的微球，作为组织移植物植入的生物工程胰岛素分泌构建体的主要平台和用于体外药物筛查平台的模型。当前的微球制造技术具有几种抽签：需要含有表面活性剂的油相，微球直径不一致以及耗时较高的过程。这些技术已广泛使用藻酸盐，以快速凝胶化，高加工性和低成本。但是，其低生物相容性特性不能提供有效的细胞附着。这项研究提出了使用3D生物生产商使用ECM样微环境来实现有效细胞的微球产生来克服这些局限性的高通量方法。与单宁酸交联的微球可防止胶原酶降解并增强球形结构一致性，同时允许营养和氧气扩散。该方法允许自定义微球直径具有极低的可变性。总而言之，开发了一种新型的生物印刷程序，以制造大量可重复的微球，能够响应细胞外葡萄糖刺激而分泌胰岛素。
绿山DNA会议
7月22日至24日，2024年伯灵顿，佛蒙特州7：30 - 8：15 AM注册和欧陆式早餐早餐8:15 - 8:30 AM欢迎和开幕词emerald III Ballroom ballroom trisha ballroom trisha trisha trisha trisha trisha trisha trisha trisha trisha trisha在审判中，哈佛大学的弗雷德里克·R·比伯（Frederick R. deconvolution using microhaplotypes Sarah Cavanaugh, Bode Technology 11:30 – 12:00 pm Determining kinship in missing persons and disaster victim identification cases with an end-to-end workflow Laurence Devesse, QIAGEN 12:00 – 1:00 pm Lunch The Atrium Moderator: Michael Marciano Emerald III Ballroom 1:00 – 1:30 pm Engineering a better carrion fly.遗传修饰是为法医昆虫学验证实验制造工具。杰弗里·威尔斯（Jeffrey Wells），佛罗里达州国际大学1：30 - 2：00 pm从皮质骨切片中的成骨细胞进行化学切除，从皮质骨切片中通过完整的胶原酶消化，弗吉尼亚州英联邦大学2:00 - 2:30 PM当前的实践和开发法医学血清学的方法Sarah Sarah Seashols-Williams，弗吉尼亚州弗吉尼亚州弗吉尼亚州弗吉尼亚州
增强的肝脏X受体信号传导减少了脑损伤并促进了脑内出血后的组织再生：小胶质细胞/巨噬细胞的作用
抽象的背景炎症效率为继发性脑损伤和有限的组织再生是脑内出血后有利预后的障碍（ICH）。作为炎症和脂质代谢的调节剂，肝脏X受体（LXR）具有改变小胶质细胞/巨噬细胞（M/ M）表型的潜力，并通过促进胆固醇外排和从吞噬细胞中促进胆固醇外排和回收来帮助组织修复。为支持潜在的临床翻译，在实验性ICH中检查了增强的LXR信号传导的好处。方法用LXR激动剂GW3965或媒介物处理胶原酶诱导的ICH小鼠。 在多个时间点进行了行为测试。 使用T2加权，扩散张量成像和动态对比增强的MRI序列评估病变和血肿的体积以及其他大脑参数。 染色固定的脑冷冻切片，并应用共聚焦显微镜检测LXR下游基因，M/M表型，脂质/胆固醇含有含有脂肪的吞噬细胞，少突胶质细胞谱系细胞和神经干细胞。 还使用了 Western印迹和实时QPCR。 CX3CR1 CRER：ROSA26 IDTR小鼠用于M/m-消耗实验。 结果GW3965治疗减少了病变体积和白质损伤，并促进了血肿清除。 处理过的小鼠上调LXR下游基因，包括ABCA1和载脂蛋白E，并降低了M/M的密度，显然从促炎性介绍性介绍性介绍性介绍性介绍性白介素-1β +转移到精氨酸酶1 + CD206 +调节性表型。 在GW3965小鼠中观察到较少的胆固醇晶体或髓素碎片吞噬细胞。方法用LXR激动剂GW3965或媒介物处理胶原酶诱导的ICH小鼠。在多个时间点进行了行为测试。使用T2加权，扩散张量成像和动态对比增强的MRI序列评估病变和血肿的体积以及其他大脑参数。染色固定的脑冷冻切片，并应用共聚焦显微镜检测LXR下游基因，M/M表型，脂质/胆固醇含有含有脂肪的吞噬细胞，少突胶质细胞谱系细胞和神经干细胞。Western印迹和实时QPCR。CX3CR1 CRER：ROSA26 IDTR小鼠用于M/m-消耗实验。结果GW3965治疗减少了病变体积和白质损伤，并促进了血肿清除。处理过的小鼠上调LXR下游基因，包括ABCA1和载脂蛋白E，并降低了M/M的密度，显然从促炎性介绍性介绍性介绍性介绍性介绍性白介素-1β +转移到精氨酸酶1 + CD206 +调节性表型。较少的胆固醇晶体或髓素碎片吞噬细胞。lxr激活增加了围绕围场区域中OLIG2 +PDGFRα +前体的数量和OLIG2 + CC1 +成熟的少突胶质细胞的数量，并且病变和脑膜下区域中的SOX2 +或Nestin +神经干细胞的升高。MRI结果支持GW3965的更好的病变恢复，这通过返回到功能性rotarod活性的预元值来证实。GW3965的治疗作用被CX3CR1 CRER中的M/M耗竭消除：ROSA26 IDTR小鼠。使用GW3965减少脑损伤的结论LXR激动剂，促进了m/m的有益特性，并促进了胆固醇回收的促进组织修复通讯。
对带有集成微流体通道的聚合物袖口电极进行急性体内测试，用于对大鼠坐骨神经进行刺激、记录和药物输送
背景：神经外接口是侵入性最小的周围神经接口之一，因为它们位于神经外部。然而，与侵入性更强的接口相比，这些电极可能存在选择性和灵敏度较低的问题，因为目标神经纤维与电极的距离更远。新方法：通过微加工技术实现了溶解和吸引接口 (LACE)，并旨在提高选择性和灵敏度，同时保持接口格式。它的工程设计在之前的工作中有所描述。LACE 是一种集成了微电极和微流体通道的混合接口。最终目标是通过微通道局部输送 (1) 溶解剂以去除将电极与神经纤维分开的结缔组织，和 (2) 神经营养因子以促进暴露的神经纤维轴突发芽到嵌入电极的微流体通道中，从而提高束状选择性和灵敏度。在这里，我们重点展示微流体和微电极在急性准备中的体内功能，其中我们评估局部去除结缔组织并用微通道嵌入微电极记录和刺激大鼠坐骨神经神经活动的能力。与现有方法的比较：虽然神经外接口优先考虑神经健康，而神经内接口优先考虑功能，但 LACE 代表了一种新的神经外方法，它可能在两个目标上都表现出色。结果：手术植入显示经过小心和最少的操作后，LACE 功能得以保留。体内电评估表明放置在微流体通道内的微电极能够成功刺激和记录来自大鼠坐骨神经的复合动作电位。此外，通过微通道输注胶原酶后，富含胶原的神经外膜被局部去除，并通过显微镜确认。结论：在对大鼠坐骨神经进行的急性实验中证明了使用集成微电极和微流体的cuffi来刺激、记录和输送药物以局部溶解神经外膜层的可行性。
大麻二醇减少脑室内出血脑损伤，保留髓鞘并防止血液屏障功能障碍
脑室内出血（IVH）是极早产儿的长期残疾的重要原因，没有目前的治疗。这项研究评估了使用未成熟大鼠在IVH模型中大麻二醇（CBD）的潜在神经保护作用。ivh通过左室周围注射裂术胶原酶在1天大的（P1）Wistar大鼠中诱导。一些大鼠会产前接受CBD（10 mg/kg I.P.到达大坝），然后是5 mg/kg I.P.IVH后 6、30和54 h（IVHÞCBD，n¼30）。 其他IVH大鼠接收了车辆（IVH车，n¼34）和用车辆处理的非IVH大鼠用作对照（SHM，n¼29）。 大鼠在P6，P14或P45处被人性地杀死。 Brain damage (motor and memory performance, area of damage, Lactate/N-acetylaspartate ratio), white matter injury (ipsi- lateral hemisphere and corpus callosum volume, oligodendroglial cell density and myelin basic protein signal), blood-brain barrier (BBB) integrity (Mfsd2a, occludin and MMP9 expression, gadolinium leakage), in fl然后评估了弹性毒性（TLR4，NFκB和TNFα表达，在促炎细胞的纤维化中），兴奋毒性（谷氨酸/N-乙酰基 - 吐型比）和氧化应激（蛋白质硝基化）。 cbd阻止了IVH的长期运动和认知后果，在短期和长期保护的寡头细胞中减少了脑损伤，从而保留了足够的髓鞘形成并保持BBB的完整性。 CBD的保护作用与炎症，兴奋性和氧化应激的调节有关。 CBD是改善IVH诱导的未成熟脑损伤的潜在候选者。6、30和54 h（IVHÞCBD，n¼30）。其他IVH大鼠接收了车辆（IVH车，n¼34）和用车辆处理的非IVH大鼠用作对照（SHM，n¼29）。大鼠在P6，P14或P45处被人性地杀死。Brain damage (motor and memory performance, area of damage, Lactate/N-acetylaspartate ratio), white matter injury (ipsi- lateral hemisphere and corpus callosum volume, oligodendroglial cell density and myelin basic protein signal), blood-brain barrier (BBB) integrity (Mfsd2a, occludin and MMP9 expression, gadolinium leakage), in fl然后评估了弹性毒性（TLR4，NFκB和TNFα表达，在促炎细胞的纤维化中），兴奋毒性（谷氨酸/N-乙酰基 - 吐型比）和氧化应激（蛋白质硝基化）。cbd阻止了IVH的长期运动和认知后果，在短期和长期保护的寡头细胞中减少了脑损伤，从而保留了足够的髓鞘形成并保持BBB的完整性。CBD的保护作用与炎症，兴奋性和氧化应激的调节有关。CBD是改善IVH诱导的未成熟脑损伤的潜在候选者。总而言之，在未成熟的大鼠中，CBD降低了IVH诱导的脑损伤及其短期和长期后果，显示出强大的和多效性神经保护作用。
全球研究趋势和关于肌腱衍生的干细胞的热点：书目可视化研究
（Andarawis-Puri等，2015; Thomopoulos等，2015; Millar等，2021; Pearce等，2021）。恢复受伤肌腱的正常结构在运动医学中构成了重大挑战。肌腱衍生的干细胞（TDSC）是肌腱组织中发现的一种间充质干细胞。严格来说，由于其生物异质性，TDSC不能将其分类为常规干细胞。考虑到它们分化为有限数量的特定细胞谱系的能力，将它们描述为“茎/祖细胞”细胞更为准确。此外，它们具有某些干细胞特征，例如克隆性，高增殖率和自我更新能力（Bi等，2007）。我们总结了补充表S1中TDSCS研究中报告的细胞培养方法。简而言之，培养和隔离肌腱干细胞的方法如下：在无菌条件下，肌腱组织在37°C下用胶原酶（通常是I型或II型，通常为I型或II型，浓度约为0.1％ - 3％），持续几个小时，以持续几个小时，以隔夜隔断以分离细胞。然后在特定的培养基（例如低葡萄糖DMEM）中收集并培养细胞，并在5％CO 2的环境中添加10％ - 20％的血清，并在37°C下保持在37°C，并以适当的时间间隔进行，以维持细胞的耐用性。tdsc的特征是存在诸如CD44，CD146，CD105和CD90之类的标记，这是间充质干细胞的典型特征（Zhang和Wang，2010a； Lee等，2018）。由于其独特的细胞微环境，与骨髓衍生的间充质干细胞相比，TDSC具有更大的产生肌腱和关节组织的能力（BMSC）（Tan等，2012）。当前对TDSC的细胞来源主要是：大鼠，小鼠，兔子和人类；研究的少量TDSC来自马，猪。主要研究重点是：治疗靶标和药物作用，疾病机制，组织工程和细胞特性。（补充表S1）肌腱损伤后，肌腱完整性的成功恢复涉及三个阶段：炎症阶段，细胞增殖阶段和细胞外基质（ECM）重建阶段。在炎症阶段，它涉及炎症细胞的内部效果，炎症因子的分泌以及TDSC的募集和激活（Vinhas等，2018； Ackerman等，2021）。细胞增殖阶段的特征是新肌腱细胞的产生，而ECM重建阶段涉及新的ECM和肌腱结构的形成。TDSC通过将ECM分泌给肌腱并区分为肌腱细胞，在肌腱修复中起着至关重要的作用（Zhang等，2019a）。使用适当的技术激活内源性肌腱干细胞或移植TDSC已成为促进肌腱损伤修复的创新方法（Lee等，2015）。因此，TDSC具有增强肌腱和肌腱骨连接的愈合的重要潜力（Chen等，2013）。TDSC在骨科研究中的重要性导致了近年来的大量研究（Leong等，2020）。但是，大多数研究都集中在TDSCS研究的特定方面，从而导致对该领域文献的全面分析。特定的文章声称采用文献计量方法来研究TDSC（Long等，2022）；但是，其文献搜索内容不准确。尽管TDSC的发现可以追溯到2003年，但该研究的选定文献包括大量出版物
电子补充信息β-内酰胺酶...
7-氨基-3-氯甲基-3-头孢烯-4-羧酸对甲氧基苄酯盐酸盐 (ACLE) 购自 AK Scientific (加利福尼亚州联合城)。4-硝基苯硫酚 (NBT) 和 3-马来酰亚胺基丙酸购自 TCI Chemicals (日本东京)。头孢噻吩购自 P212121, LLC (马萨诸塞州波士顿)。氘代二甲基亚砜 (DMSO-d 6 ) 购自 Cambridge Isotope Laboratories (马萨诸塞州安多弗)。三乙胺 (TEA)、4-甲基吗啉 (NMM)、无水二氯甲烷 (DCM)、无水二甲基甲酰胺 (DMF)、己烷、乙醚、乙酸乙酯、薄层色谱法 (TLC) 硅胶 60 玻璃板、无水磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钠、CENTA、二甲基亚砜 (DMSO)、三氟乙酸 (TFA)、苯甲醚、硫醇官能化的 4 臂聚乙二醇 (4 臂-PEG-SH; 20 kDa)、来自蜡样芽孢杆菌的 β L (β L-BC; cat.# P0389, 28 kDa, 2817.8 U/mg 蛋白, 4.72% 蛋白)、来自铜绿假单胞菌的 β L (β L-PA; cat.# L6170, 30 kDa, 1080 U/mg 蛋白，1% 蛋白）、来自阴沟肠杆菌的 β L（β L-EC；目录号 P4524，20-26 kDa，0.37 U/mg 蛋白，56.45% 蛋白）、来自溶组织梭菌的胶原酶、磷酸盐缓冲盐水 (PBS)、硝酸钠、阳离子调整的 M¨uller-Hinton 肉汤 (CMHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸、1-[双 (二甲氨基) 亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶 3-氧化物六氟磷酸盐 (HATU)、N,N-二异丙基乙胺 (DIPEA) 和盐酸 (HCl) 均购自 Millipore Sigma（密苏里州圣路易斯）。甲醇、硅胶、胰蛋白酶大豆肉汤 (TSB) 和 SYLGARD 184 硅胶弹性体试剂盒购自 Thermo Fisher Scientific (马萨诸塞州沃尔瑟姆)。甲氧基聚乙二醇硫醇 (mPEG-硫醇；1.7 kDa) 购自 Laysan Bio, Inc. (阿拉巴马州阿拉伯)。金黄色葡萄球菌菌株 25923 和 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) MW2、蜡样芽孢杆菌 13061、大肠杆菌 25922 和阴沟肠杆菌 13047 购自 ATCC (弗吉尼亚州马纳萨斯)。铜绿假单胞菌 PA01 由沃尔特里德陆军研究所 (马里兰州银泉) 慷慨捐赠。大肠杆菌 DH5-α 购自 Life Technologies (加利福尼亚州卡尔斯巴德)。双马来酰亚胺-PEG 3（mal-PEG-mal，494.5 Da）购自 BroadPharm（加利福尼亚州圣地亚哥）。Repligen Biotech 纤维素酯 500-1000 Da 分子量截留 (MWCO) 透析管购自 Spectrum Labs Inc.（加利福尼亚州兰乔多明格斯）。超高纯度氮气（99.999%）购自 Airgas（罗德岛州沃里克）。所有实验均采用超纯去离子水（18.2 MΩ·cm，Millipore Sigma，马萨诸塞州比勒里卡）。本研究中提到的室温 (RT) 约为 23 ◦ C。