I.引言244 II。有机和无机化合物245 III的链终止。金属烷基247 IV的链终止。 分子氢251 V的链终止。不饱和碳氢化合物256 VI的链终止。 通过热裂解258 VII进行链终止。 机械力的链终止259参考259金属烷基247 IV的链终止。分子氢251 V的链终止。不饱和碳氢化合物256 VI的链终止。通过热裂解258 VII进行链终止。机械力的链终止259参考259
DNA测序技术已经发展。Sanger测序称为第一代。使用PCR作为基本方法。它涉及使用无线电标记的链终止或与荧光摄影者的二氧氧基核苷酸合成与受询问的型号胶带互补的DNA胶带。片段按大小分离,并通过凝胶或头发电泳分析以确定序列。
Sanger 测序或链终止或双脱氧方法基于 DNA 聚合酶的两个特性:聚合酶合成单链 DNA 模板的精确正确的互补拷贝,并且它们可以使用 2',3'- 双脱氧核苷酸三磷酸 (ddNTP) 作为底物。双脱氧核苷酸的 3' 端缺少羟基并且只有氢,因此一旦该核苷酸在生长点被掺入链中,链的延长就会停止在 ddNTP 处并且不再充当链延长的底物。在实践中,使用 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段,因为它不具有 5'- 3' 外切酶活性,这是完整酶的特性。所有 DNA 合成都需要引物,因此化学合成的寡核苷酸被用作引物,该引物退火到靠近需要测序的序列的位置。 (克列诺片段是大肠杆菌的DNA聚合酶I被蛋白酶枯草杆菌蛋白酶酶切时产生的一个大的蛋白质片段,它保留了5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,用于去除预编码核苷酸并进行校对,但失去了5'→3'外切酶活性,即引物去除活性)。