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8001001 ），旋涡振荡 30 秒混匀，室温静置 5 分钟后再进入步骤 3 的操作。 3. 加入 15 ml Buffer L7 ，盖紧管盖，用力上下摇晃混合均匀。 4. 加入 8 ml Buffer EX ，盖紧管盖，用力上下摇晃混合均匀。≥ 12,000 g 离心 5 分钟。 5. 在一个洁净的 50 ml 离心管中加入 8 ml 异丙醇备用。 6. 吸取步骤 4 中的所有离心上清液（约 25 ml ）转移到步骤 5 备用的 50 ml 离心管 中，盖紧管盖，混匀上清液和异丙醇。
工程化干细胞在组织再生领域的应用
归纳效率和分化精度不足。为了进一步增强干细胞的治疗性，并赋予它们新功能特征，越来越多的研究专门用于修饰工程干细胞及其在组织再生领域中的应用，并证明了最初的影响。本综述简要回顾了干细胞的工程策略，并着重于阐述工程干细胞在诸如伤口修复，软骨愈合，骨修复和免疫调节等方面的应用进展。
干细胞和骨组织工程
摘要：由创伤，感染，肿瘤切除或骨质疏松性骨折引起的节段性骨缺损表现出重大的手术治疗挑战。宿主骨自体移植被认为是恢复功能的黄金标准，但伴随着收获现场合并症的成本。同种异体骨是次要选择，但在与宿主骨骼及其成本合并中具有自身的局限性。因此，需要制定新的骨组织工程策略来治疗骨缺损。在过去的三十年中，使用不同支架或生长因子进行骨组织工程的干细胞取得了巨大进步。已从不同组织中分离出许多干细胞，用于骨组织工程。This review summarizes the progress in using different postnatal stem cells, including bone marrow mesenchymal stem cells, muscle-derived stem cells, adipose-derived stem cells, dental pulp stem cells/periodontal ligament stem cells, periosteum stem cells, umbilical cord-derived stem cells, peripheral blood stem cells, urine-derived stem cells, stem cells from apical papilla, and induced pluripotent stem细胞，用于骨组织工程和修复。本综述还使用外泌体或带有各种脚手架的骨修复的外泌体或细胞外囊泡进行了总结。还将详细讨论和解释每种类型的干细胞的优点和缺点。希望将来，这些临床前结果将转化为骨缺损修复的新再生疗法。
骨组织工程基于石墨烯的材料
骨骼在轻伤时能够再生自身。但是，由于严重损伤而无法再生的骨骼的治疗通常需要手术应用。另一方面，组织工程旨在消除这些手术干预中缺乏供体组织和不兼容的问题。脚手架是实现这一目标工程目标的最进口结构。支架为细胞附着，增殖和分化提供了环境，从而有助于形成新的组织。在脚手架设计期间，应考虑一些特性，例如机械性能，表面特性，生物降解性，生物相容性和孔隙率。确定组织的支架的创建与所用的材料和生产方法有关。用石墨烯及其在支架中的衍生物的使用是组织工程中的重要应用之一，作为细胞增殖和差异化的调节剂。石墨烯（GR）及其衍生物在骨骼再生中具有重要作用，因此在骨组织工程应用中使用了机械和生物学特性。这项研究报告了在脚手架中使用基于石墨烯的生物材料进行骨组织工程的重要性和优势。在各种研究中获得的基于石墨烯的生物材料的生物学特性有所改善，成骨细胞的粘附和增殖也有所增加。
使用 Laponite 为骨组织工程提供 BMP-2
骨折不愈合是由多种因素引起的，从而导致可能出现严重的骨缺损。虽然自体移植和同种异体移植是目前治疗骨折不愈合的黄金标准，但与可用性和免疫排斥相关的挑战凸显了改进治疗方法的必要性。骨组织工程的一种策略是利用生长因子来诱导细胞改变其表型和行为，并启动信号通路，从而增加基质沉积和组织形成。骨形态发生蛋白-2 (BMP-2) 是一种有效的成骨生长因子，然而，鉴于其在体内的快速清除时间，存在特定的治疗窗口以发挥功效，同时避免潜在的有害副作用。结果表明，在 3D 可打印和生物可吸收的聚己内酯三甲基丙烯酸酯基树脂上涂覆 Laponite 纳米粘土能够结合 BMP-2，降低释放速率，从而能够降低使用浓度，同时在体外和体内模型中增强骨诱导作用。
前列腺癌和骨组织共培养研究的模型
结果表明，与玻璃和聚-L赖氨酸涂层的玻璃相比，Cellbind®塑料可以用作优质的底物，因为它支持了更好的细胞生长和增殖。在该基材上，细胞成功形成了单层，这对于将模型应用于共培养研究至关重要。发现使用透析膜可减少模型中培养的两个不同细胞系的分化谱的差异，包括通过各种矿化测定法分析它们的有效分化的变化。PC3细胞与骨模型共培养的图像分析显示，骨组织成熟与癌细胞增殖之间存在相关性：癌细胞在更成熟的骨组织中表现出降低的增殖。需要进一步的研究来复制这些发现，并通过额外的骨骼成熟测定法和可能延长培养期，以确保模型的功能。
源自牙周韧带组织对骨形成的细胞的影响
摘要。背景/目标：最近的报道表明，在正畸力载荷期间，硬化蛋白被牙周韧带组织衍生（PDL）细胞分泌，并且分泌的硬化素会导致骨代谢。但是，详细的机制知之甚少。这项研究的目的是确定PDL细胞如何影响骨形成。材料和方法：大鼠牙周韧带组织对硬化蛋白进行免疫组织化学染色。分别检查了从大鼠牙周韧带组织，瓦尔瓦里亚和皮肤分离的培养的原代PDL细胞，成骨细胞和皮肤成纤维细胞（SFB）。成骨细胞长达21天。培养的成骨细胞。成骨细胞，用于骨gla蛋白（BGP），AXIN2和KI67表达。分析用于获得条件培养基的PDL细胞的SOST，Ectodin和Wnt1表达，并与SFBS中的表达进行比较。结果：通过免疫组织化学染色在牙周韧带组织中观察到硬化素的表达。与成骨细胞培养中的cont-CDM相比，PDL-CDM中矿化结节的形成被抑制。在PDL-CDM中，与CONT-CDM相比，成骨细胞中BGP和AXIN2的表达水平降低。在PDL细胞中，SOST和过骨质的表达水平远高于SFBS。但是，
骨矿物质
由于细胞抑制剂的肿瘤浓度不足，阻碍了实体瘤的有效全身药物治疗，因此需要开发智能局部药物输送系统。为了克服这个问题，我们证明了用于骨肉瘤治疗的基础药物阿霉素 (DOX) 表现出对纳米 (nHA) 和微米 (mHA) 尺寸的羟基磷灰石 (HA) 的可逆性增生。用 DOX 功能化的 nHA 颗粒被吞没在骨肉瘤细胞的溶酶体中，其中酸性微环境导致 DOX 和 HA 之间的结合中断。释放的 DOX 随后积聚在线粒体中，导致细胞饥饿、迁移减少和细胞凋亡。HA + DOX 输送系统还在患有骨肉瘤的小鼠身上进行了体内测试。通过 PET-CT 和增殖和凋亡标志物的免疫组织化学染色可以看出，通过 HA 颗粒局部输送 DOX 比对照组具有更强的肿瘤根除效果。这些结果表明，除了全身化疗外，辅助 nHA 可用作 DOX 细胞内输送的载体，以预防骨肉瘤手术切除后的肿瘤复发。此外，我们证明 nHA 颗粒是这种方法的关键，但 nHA 与 mHA 的组合可以提高与颗粒纳米材料相关的安全性，同时保持相似的治疗潜力。