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cas12b（A.酸性）重组
描述：重组A.酸性AAPCAS12B（V型CRISPR相关蛋白CAS12B），无标签。AAPCAS12B属于V型CRISPR效应器CRISPR-CAS12B/C2C1，对于广泛的应用，高温。物种：酸性酸性酸性构建体：CAS12B（全长）（酸性）浓度：0.20 mg/ml表达系统：大肠杆菌纯度：80％格式：水缓冲液溶液。以：50 mm磷酸钠，pH 7.5、300 mm NaCl，1 mM DTT和10％甘油MW：128 kDa GenBank登录：WP_067623834稳定性：至少在-80°C时至少6个月。存储：-80°C使用的说明：在冰上解冻，并在使用前轻轻混合。不要涡旋。在打开前进行快速旋转。等分的小容量，然后闪烁冻结以进行长期存储。避免多个冻结/解冻周期。测定条件：使用基于CRISPR的荧光记者测定法测量了不同量的AAPCAS12B活性，以获得最佳结果。使用RNA引导的DNA与CAS12结合，将靶DNA切割和不加选择的单链DNA侧支裂解激活。荧光信号的发射是由于裂解后ssDNA记者的降解所致。Active Cas12 was thawed on ice while 1X Endonuclease Buffer containing 10 mM Tris- HCl, pH 8.0, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl 2 , and 0.1 mg/ml BSA, guide RNA (custom designed crRNA), ds DNA activator (complementary sequence to crRNA and a PAM sequence specific for Cas enzyme) and FQ-ssDNA substrate （用荧光团和淬火器标记）平衡为室温。然后将板密封并在37°C下孵育10-30分钟。使用1X内核酸酶缓冲液制备了活性CAS12（4倍最终浓度）指南RNA（4倍最终浓度）和含有DS DNA激活剂和SSDNA报告基因（2倍最终浓度）的激活器/报告剂混合物（2倍最终浓度）。10 µL的4倍活性CAS12和10 µL的4倍引导RNA在室温下在固体黑色96井板的一半面积中预孵育10分钟。预孵育后，将20 µL的2倍激活剂/报告基因混合物添加到板上，并将其放置在振动孵化器上1分钟。然后将板平衡至室温，去除板密封剂，并在毫用读取器上读取荧光。阴性对照是通过用相等量的测定缓冲液代替酶工作溶液来测量的。应用程序：
comnavresforcominst 5100.12b
COMNAVRESFORCOMINST 5100.12B N00SA 2023 年 9 月 11 日 COMNAVRESFORCOM 指令 5100.12B 来自：海军预备役司令部指挥官 主题：指挥摩托车指导计划 参考：(a) OPNAV M-5100.23H 附件：(1) 行驶前检查清单 (2) 公路/团体骑行清单 (3) 第 13 页 摩托车安全确认表 (4) 第 13 页 摩托车操作员状态变更 1. 目的。为海军预备役司令部 (COMNAVRESFORCOM) 指挥官摩托车指导计划 (M2P) 分配职责并制定政策。 2. 取消。COMNAVRESFORCOMINST 5100.12A。3. 范围。本说明适用于位于 NH-32 号楼的所有摩托车、非公路摩托车 (踏板车)、越野摩托车 (泥地车) 和三轮车 (三轮车) 操作员和乘客，无论是在岗还是下班，也不论是驾驶自有、租赁、借用或租用的摩托车用于个人用途或公务。鼓励每位摩托车操作员积极参与并支持 M2P 的目标，树立积极的榜样并促进所有参与者的安全和福利。4. 背景。从历史上看，摩托车事故造成的伤亡大大降低了海军和海军陆战队的战备水平。为了减少事故，骑手必须接受继续教育和技能发展，并保持高度的危险意识。M2P 将为每位摩托车操作员提供一种通过非正式指导和辅导来增强其知识和技能的方法。5. 目标 a. M2P 旨在提高骑手知识、提高安全意识和提高摩托车操作员技能。为缺乏经验的骑手或刚到汉普顿路地区的骑手提供指导，并为所有骑手提供继续教育。c. 将缺乏经验的骑手与骑类似摩托车的有经验的骑手配对，帮助新骑手获得经验和安全的骑行技巧。
热诱导 CRISPR/Cas12b (C2c1) 的应用......
摘要 CRISPR/Cas9 和 Cas12a (Cpf1) 工具已大规模用于基因组编辑。最近建立了一种具有单个核酸酶结构域、相对较小尺寸、低频率脱靶效应和高温下切割能力的新效应物，并将其命名为 CRISPR/Cas12b (C2c1)。Cas12b 还表现出在哺乳动物系统中的温度诱导性。因此，该系统对于编辑耐高温植物物种（如棉花）的基因组具有潜在价值。利用这种新系统，在一系列温度下通过农杆菌介导的遗传转化成功生成了陆地棉突变体。暴露在 45°C 下 4 天的转化子（被农杆菌感染的外植体）显示出最高的编辑效率。全基因组测序未检测到脱靶突变。T0 代中 AacCas12b 进行的基因组编辑忠实地传递给了 T1 代。综上所述，CRISPR/Cas12b 是一种高效、精确的棉花基因组编辑工具。