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白色念珠菌粘附素ALS1和HWP1调节与链球菌突变的相互作用
摘要：已知白色念珠菌和链球菌在口腔中彼此协同相互作用。例如，葡萄糖基转移酶B（gtfb）由链球菌分泌，可以与白色念珠菌细胞表面结合，从而促进双物种生物膜形成。然而，介导与链球菌相互作用的真菌因子尚不清楚。白色念珠菌粘附素ALS1，ALS3和HWP1是白色念珠菌单物种生物膜形成中的关键参与者，但尚未评估它们在与S. Mutans相互作用中的作用（如果有的话）。在这里，我们研究了白色念珠菌细胞壁粘附蛋白ALS1，ALS3和HWP1在用链球菌形成双种物种生物膜上的作用。我们评估了白色念珠菌野生型ALS1 ∆ / ∆，ALS3 ∆ / ∆，ALS1 ∆ / ∆ / ∆ / ∆ / ALS3 ∆ / ∆ / ∆ / ∆ / ∆ / ∆ / ∆菌株，通过测量厚度的厚度，构造，构造，构造，构造，构造，代理，代理，构造，构造厚度，将双种物种形成二重种菌株。生物膜。我们观察到，白色念珠菌野生型菌株在这些不同的生物纤维分析中形成了增强的双种物种生物膜，并证实了白色念珠菌和葡萄链梭菌在生物纤维上下文中协同相互作用。我们的结果表明，白色念珠菌ALS1和HWP1是与S. mutans相互作用的主要参与者，因为当ALS1 ∆ / ∆ / ∆或HWP1Δ / ∆ / ∆菌株与链球菌在双重物种生物膜中培养双重生物膜形成。als3似乎在与双种物种生物膜形成中与S. mutans相互作用中似乎并没有明确的作用。总体而言，我们的数据表明白色念珠菌粘合剂ALS1和HWP1功能可调节与链球菌的相互作用，并且可能是未来治疗剂的潜在靶标。
通过 Cas12a/CBE 共编辑在 T0 代中产生无转基因抗溃疡病 Citrus sinensis cv. Hamlin
柑橘溃疡病影响柑橘生产。该病由柑橘黄单胞菌（Xcc）引起。先前的研究证实，在 Xcc 感染期间，转录激活因子样效应物 (TALE) PthA4 会从病原体转移到宿主植物细胞中。PthA4 与溃疡病易感基因 LOB1（EBE PthA4 -LOBP）启动子区中的效应物结合元件 (EBE) 结合，激活其表达，随后引起溃疡症状。之前，采用 Cas12a/CBE 共编辑方法破坏高度纯合的柚子的 EBE PthA4 -LOBP。然而，大多数商业柑橘品种都是杂合杂交种，更难产生纯合/双等位基因突变体。在这里，我们采用 Cas12a/CBE 共编辑方法来编辑 Hamlin（Citrus sinensis）的 EBE PthA4 -LOBP，这是一种在世界范围内种植的商业杂合柑橘品种。构建了二元载体 GFP- p1380N-ttLbCas12a:LOBP1-mPBE:ALS2:ALS1，并证明其可通过 Xcc 促进的农杆菌素过滤在 Hamlin 叶片中发挥作用。该构建体允许通过 GFP 选择无转基因再生体，编辑 ALS 以生成抗氯磺隆再生体作为基因组编辑的选择标记，这是通过 nCas9-mPBE:ALS2:ALS1 瞬时表达 T-DNA 的结果，并通过 ttLbCas12a 编辑感兴趣的基因（即本研究中的 EBE PthA4 -LOBP），从而产生无转基因柑橘。共产生了 77 株幼苗。其中 8 株幼苗为转基因植株（#Ham GFP 1 - #Ham GFP 8），4 株幼苗为非转基因植株（#Ham NoGFP 1 - #Ham NoGFP 4），其余为野生型。在 4 株非转基因幼苗中，三个品系（#Ham NoGFP 1、#Ham NoGFP 2 和 #Ham NoGFP 3）含有 EBE pthA4 的双等位基因突变，一个品系（#Ham NoGFP 4）含有 EBE pthA4 的纯合突变。我们在 C. sinensis cv. Hamlin 中实现了 EBE PthA4 – LOBP 的 5.2% 非转基因纯合/双等位基因突变效率，而之前研究中柚子的突变效率为 1.9%。重要的是，存活下来的 4 株无转基因植株和 3 株转基因植株均能抵抗柑橘