光线通过瞳孔进入眼睛,并通过包括角膜和晶状体 152 在内的前眼结构聚焦到视网膜上(见图 2.1)。视网膜中的感光细胞记录图像的基本成分,并通过视神经和其他通路传递到皮质进行感知处理。152 虽然概念简单,但过程复杂,涉及多个结构,它们通过复杂的通路进行通信以创建精确协调的动作序列。这些通路将感光细胞与丘脑、脑干、皮质和小脑连接起来。聚焦的关键动作序列包括 1) 通过协调前眼结构和眼球运动将图像精确聚焦到视网膜感光细胞上 2) 确保感光细胞通过瞳孔充分充满光线 3) 通过眼球运动和调节保持在一定距离范围内的聚焦清晰度。然后,视觉输入通过视神经和其他通路传输到后皮质区域,将语言与图像联系起来,并将其储存在记忆中。137,152 这些结构或通路的任何损害都可能导致视力模糊。2.1.2 视力缺陷视力下降的原因有很多,包括先天性或后天性疾病;遗传或后天性眼部结构缺陷;早年或晚年发生的眼部疾病;因其他疾病、神经系统疾病以及眼部和脑部损伤而发生的疾病。32,
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† 对于在六个标准 QIAcuity 通道(绿色、黄色、橙色、红色、深红色和远红色)中检测单个目标的多重反应,建议最终测定浓度为 0.8 µM 正向引物、0.8 µM 反向引物和 0.4 µM 探针。使用长斯托克斯位移染料时,需要不同的测定浓度。有关更多详细信息,请参阅 QIAcuity 高多重探针 PCR 试剂盒手册。
基因组滴度确定高精度。b参考标准标准(后代),并使用CGT DPCR分析在QIACINID DPCR系统上使用2个三个三重反应(ITR,CMVE,CMVP和GFP,WPRE,HGHPA)进行定量。显示了非ITR目标之间的变异系数(CV)。aav2,aAv8和aav9的目标<5%的目标之间的最大偏差<5%,<2%。C基因组完整性使用Qiacuity软件套件2.5版确定。基因组靶标在5个质子反应中运行。进行了基因组完整性的分析,包括所有5个通道或跨越基因组不同部分的2组。
托盘。h. 将每个孔的内容物转移到纳米板 i 的相应孔中。确保在移液过程中没有气泡进入 dPCR 板的孔中(顶部有气泡问题较少)。j. 使用 QIAcuity Nanoplate Seal 密封纳米板 k. 使用纳米板滚轮垂直和水平滚动 3-4 次 l. 取下透明箔 m. 使用纳米板滚轮垂直和水平滚动 3-4 次,然后在板框上滚动
使用Qiacuity Digital PCR的绝对定量使用终点PCR的过程,但将PCR反应分为数千个单个分区。分区后,某些分区将不包含目标分子的副本,一些分区将包含一个目标分子的一个副本,而其他分子将包含一个以上的目标分子副本。PCR循环后,通过测量跨反应分区的荧光检测到扩增的靶标。由于模板是随机分布的,因此可以使用泊松统计来计算每个有效的可分析分区的目标分子的平均量。通过将每个分区的平均目标DNA量乘以有效分区的数量,可以计算出井的所有分区目标总数。计算目标浓度是通过指代所有可分析分区中的体积(即填充有反应混合物的分区)确定的。 通过反应混合物本身中存在的荧光染料来识别填充分区的总数。 通过DPCR的绝对定量消除了标准曲线的需求,以确定给定样品中目标RNA或DNA的量。计算目标浓度是通过指代所有可分析分区中的体积(即填充有反应混合物的分区)确定的。通过反应混合物本身中存在的荧光染料来识别填充分区的总数。通过DPCR的绝对定量消除了标准曲线的需求,以确定给定样品中目标RNA或DNA的量。
Abbreviations ..................................................................................................................................................... 107
d。添加DNA模板e。混合和涡流管或PCR板f。可选:在将酶添加到模板碎片g的情况下孵化10分钟。小心地处理纳米板(切勿接触底部),然后将其放在干净的纳米板托盘上。h。将每个孔的含量转移到纳米板i的相应孔中。确保在移液器期间不会将气泡引入DPCR板的孔中(顶部的气泡不太有问题)。j。使用Qiacity纳米板密封k密封纳米板。垂直和水平使用3-4次使用纳米板辊。卸下透明的箔m。垂直和水平使用3-4次纳米板辊,然后滚动板框架