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魔术 - 晶体:在异质样品中稀缺大分子的结构性确定Yasuhiro arimura 1,2*,hide A. Konishi 1,Hironori funabiki 1* 1* 1 1* 1 1* 1个伪装体和细胞生物学实验室,纽约州纽约州立大学,纽约州纽约州立大学。中心,美国华盛顿州西雅图市,98109-1024 *通信:funabih@rockefeller.edu,yarimura@rockefeller.edu或yarimura@fredhutch.org摘要冷冻冷冻级单 - 单点分析通常需要在0.05〜5.5.5.0 mg/ml上达到目标Macromolecule浓度,以下是iSMACromolecule浓度。在这里,我们设计了磁隔离和浓度(魔术)-cryo-em,这是一种能够对磁珠上捕获的靶标的直接结构分析,从而将目标的浓度需求降低到<0.0005 mg/ml。将魔术 - 晶体EM适应染色质免疫沉淀方案,我们表征了连接器组蛋白H1.8相关的核小体的结构变化,这些核小体是从异叶鸡蛋提取物中的相间和中期染色体分离出来的。将重复的选择组合以排除垃圾颗粒(Duster),这是一种去除低信噪比粒子颗粒的粒子策划方法,我们还解决了H1.8结合的核纤维蛋白NPM2的3D冷冻EM结构与与跨相染色体和露出不同的敞开和封闭的结构变体的3D冷冻EM结构。我们的研究表明,魔术 - 晶体EM对异质样品中稀缺的大分子的结构分析的实用性,并为H1.8与核小体关联的细胞周期调节提供了结构见解。关键字冷冻EM,磁珠,Xenopus鸡蛋提取物,核小体,接头组蛋白H1,核纤维蛋白
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