至少 20 nt 长度的探针已经过测试。探针可以设计为 3´ 或 5´ 生物素/脱硫生物素亲和基团,用于链霉亲和素富集 (NEB #S1421)。为获得最佳效果,受保护的 DNA:RNA 杂交区域应为 4 或 5 个核苷酸
已测试至少20 nt。探针可以用3´或5´生物素/Desthiobiotin亲和力组设计,用于链霉亲和素富集(NEB#S1421)。为了获得最佳结果,受保护的DNA:RNA杂交区应为4或5个核苷酸
在37°C,200 rpm时10分钟。RNA,并在冰上被5 µL冰冷1 N NaOH碎片碎片10分钟。用25 µl 1 M Tris-HCl(pH 6.8)中和后,将RNA再次用异丙醇沉淀。Biotin RNA被预洗的dynabeads™M-280链霉亲和蛋白珠(Invitrogen,#11206D)富含,被高盐缓冲液,分别降水缓冲液,低盐缓冲液洗涤,然后用Trizol和Zymo rna Clean&Compentor(Zymoresearch(Zymoresearch)(Zymoresearch)在珠子上提取。用20°C的100 µM VRA3 RNA适配器与1 µL的100 µM VRA 3 RNA连接过夜。然后将生物素RNA富集并再次提取。RNA通过RPPH(NEB,#M0356)在5'端修饰,并通过T4 PNK(NEB,#M0201L)进行了羟基修复。被Zymo RNA清洁和浓缩器提取后
在整个进化过程中,大多数酿酒酵母菌株都失去了合成生物素的能力,生物素是几种羧化酶的必不可少的辅助因子。结果,必须从环境中吸收必需的维生素或其前体,并经常在发酵中补充以达到高细胞密度。与生物素无关的酿酒酵母菌株的工程是消除对外部生物素供应的需求。在此,我们通过工程旁乙酰辅酶A羧化酶(一种在合成脂肪酸的合成中的基本生物素依赖性酶)来描述了与生物素无关的酵母菌菌株的构建。除了无生物素培养基中的生长量完全挽救外,与生物素相比,酿酒酵母菌株的生长显着改善。除了其工业相关性之外,此处报道的酵母菌菌株在基础研究领域可能很有价值,例如,用于开发新的选择标记或提高生物蛋白 - 链霉亲蛋白技术在生物系统中的多功能性。
细胞内钙(Ca 2+)在生物学跨生物学中无处不在。虽然现有的荧光传感器和记者可以检测具有Ca 2+水平升高的活化细胞,但这些方法需要植入物向深层组织传递光,从而排除了它们在自由表现的动物中的无创使用。在这里,我们设计了一种酶催化的方法,该方法在体内迅速和生物化学用升高的Ca 2+标记细胞。Ca 2+活化的分裂 - 涡轮增生(铸造)标记在10分钟内激活细胞,并具有外源递送的生物素分子。随着Ca 2+浓度和生物素标记时间的增加,酶促信号的增加,表明铸造是总Ca 2+活性的时间门控积分器。此外,与需要数小时生成信号的转录记者相比,可以在活动标记后立即执行铸造读数。这些功能使我们能够使用铸造剂来标记psilocybin激活的前额叶皮层神经元,并将铸造信号与psilocybin诱导的psi胶诱导的头扭态响应相关联。
微生物对生物素的生物合成研究 (主审员) 论文研究委员会 绪方光一教授 镰田久明教授 岩井和夫教授
摘要:用生物大分子(例如蛋白质,聚糖或具有良好控制方向和密度的核酸)装饰的表面形成至关重要的重要性对于在体外模型的设计中,例如合成细胞膜和互动分析。为此,配体分子通常用锚固术功能化,该锚特定与具有高密度结合位点的表面结合,从而控制了分子的呈现。在这里,我们提出了一种方法,可以通过在孵育溶液中调整靶分子的相对浓度和自由锚固剂的相对浓度来鲁棒和定量控制一种或几种类型的锚固分子的表面密度。我们提供了一种理论背景,该背景将孵育浓度与感兴趣分子的最终表面密度联系起来,并提出了有效的指南,以优化对表面密度定量控制的孵化条件。专注于生物素锚,这是一种相互作用研究的常用锚,作为一个显着的例子,我们在实验上证明了表面密度在多种密度和靶分子大小上的控制。相反,我们可以通过量化样品溶液中的残留游离生物素反应剂的量来表明该方法如何适应质量控制质量的质量纯度,例如生物素化的糖胺聚糖。■简介
501 Fragrance Regulation 502 Tribally-Directed Precision Medicine Research 503 Unregulated Hemp-Derived Intoxicating Cannabinoids, and Derived Psychoactive Cannabis Products (DPCPs) 504 FDA Regulation of Biosimilars 505 Mitigating the Harms of Colorism and Skin Bleaching Agents 506 Screening for Image Manipulation in Research Publications 507 Ban on Dual Ownership, Investment, Marketing or Distribution of Recreational Cannabis by Medical Cannabis Companies 508 AMA to support regulations to decrease overdoses in children due to ingestion of edible cannabis 509 Addressing Sarcopenia and its Impact on Quality of Life 510 Study to investigate the validity of claims made by the manufacturers of OTC Vitamins, Supplements and “Natural Cures” 511 National Penicillin Allergy Day and Penicillin Allergy Evaluation & Appropriate Delabeling 512 AED位于513 Biotin补充包装免责声明的阿片类药物过量逆转代理
第四单元:酶(12个讲座)酶,全酶,全酶,载脂蛋白,辅因子,辅酶,辅酶,假体,肠道酶,肠道酶,单晶和单晶和非成熟酶,激活能量和过渡性,特定的特定活动,常见的活动,常见的特征,常见的特征,常见的特征,类型,特定的特征,来自极端嗜热和过度嗜好的古细菌和细菌的生物催化剂。的作用:NAD+,NADP+,FMN/FAD,辅酶A,硫胺素焦磷酸盐,吡啶还毒素磷酸盐,lipoic-酸,生物素维生素B12,四氢叶酸和金属离子