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服务表免疫肿瘤学：癌症免疫疗法革命刚刚开始
HBV小鼠模型：通过AAV载体转导HBV的免疫胜任动物，随着时间的推移，通过针对特定应用（直接抗病毒药或宿主靶向剂）定制的治疗方案，导致持续的病毒产物。疾病相关的终点包括：通过RT-PCR确定循环和肝脏病毒DNA和RNA；通过DDPCR和Southern印迹进行CCCDNA定量；分析病毒抗原HBEAG/ HBSAG；免疫浸润和细胞因子释放的分析；肝组织和AST/ALT评估的免疫历史学。
AAV8 衍生的 CRISPR 对乙肝病毒的抑制... - NET
慢性乙型肝炎病毒 (HBV) 感染的治愈性治疗仍是一个遥远的目标，HBV 复制过程中稳定的共价闭合环状 DNA (cccDNA) 的持续存在是目前批准用于治疗 HBV 的药物难以突破的关键障碍。由于基因组编辑的准确性、效率和成本效益，CRISPR/Cas 技术被广泛应用于基因治疗和抗病毒策略。虽然 CRISPR/Cas 可能清除 cccDNA，但确保其安全性是应用的必要条件。在我们的研究中，我们分析了几种启动子的肝脏特异性，并构建了 CRISPR/金黄色葡萄球菌 Cas9 (SaCas9) 系统结合肝嗜性 AAV8（其中 AAV 指腺相关病毒）的候选启动子来验证对抗 HBV 的功效。结果显示，将原始启动子替换为肝脏特异性启动子的重建 CRISPR/SaCas9 系统在体内和体外仍然可以抑制 HBV 复制。 3种功能性向导RNA（gRNA）T 2 、T 3 和T 6 针对不同HBV基因型的保守区域，在不同肝脏特异性启动子的作用下均表现出较好的抗HBV效果，且3种gRNA对A、B、C基因型HBV的复制均有不同程度的抑制作用。在EnhII-Pa1AT启动子和AAV8作用下，SaCas9在其他器官或组织中的表达较肝脏进一步降低。本研究结果有助于确保CRISPR/Cas9系统的作用局限于肝脏，从而降低因非特异性靶向其他器官而产生不良有害作用的可能性，为肝脏的临床应用提供参考。
HBV 和靶向合成 (ts)DMARDs
乙肝病毒 (HBV) 感染是最复杂和最令人着迷的病毒感染之一。HBV 感染的缓解表现为血清中 HBV DNA 的消失、戊型肝炎和乙肝表面抗原 (HBsAg) 血清转换以及肝转氨酶完全正常化。这些生物实验室测试应表征病毒的完全清除。但 HBV 并非如此。感染的复杂性在于非常长的免疫反应，这种反应在急性期后可持续数年，并且正如几项研究表明的那样，在明显恢复数年后，血清、外周单核细胞和肝脏中仍存在 HBV DNA 阳性。1 因此，只有肝脏中没有 DNA 才意味着治愈。尽管没有明确的数据显示低水平的 HBV DNA 会导致肝损伤进展，但很明显，无论是自发的还是在免疫抑制治疗后，HBV 都可以重新激活（rHBV）。 2 3 一旦 HBV DNA 仍可检测到，而 HBsAg 却检测不到，则生物学指示存在隐匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）。 OBI 被定义为在目前的检测方法 HBsAg 检测呈阴性的人群的血液和/或肝脏中存在有复制能力的 HBV DNA（即游离型 HBV 共价闭合环状 DNA (cccDNA)）。4 5 研究表明，HBV DNA 仅间歇性地在血清/血浆中检测到，并且当可检测到时，浓度较低，通常低于 200 IU/mL（约 1000 拷贝/mL）。6 从分子角度来看，OBI 的特点是 cccDNA 在被感染的肝细胞核中稳定且长期存在，宿主的防御机制强烈抑制整体复制活性和病毒蛋白表达。存在有复制能力的 HBV DNA 和
空间转录组学揭示了HBSAG损失患者的转录活性乙型肝炎病毒整合程度较低
抽象的客观丙型肝炎病毒（HBV）可以整合到感染的肝细胞的染色体中，从而有助于丙型肝炎表面抗原（HBSAG）和肝癌发生。在这项研究中，我们旨在探讨转录活性的HBV整合事件是否在慢性HBV感染的不同阶段中遍布整个肝组织，尤其是在HBSAG损失患者中。设计，我们构建了来自18个慢性HBV感染患者的13个059组织斑点的肝活检的高分辨率空间转录组，以分析转录活性病毒整合事件的发生和相对分布。进行了免疫组织化学，以评估HBSAG和HBV核心抗原的表达。通过实时qPCR定量肝内共价闭合圆形DNA（CCCDNA）水平。结果空间转录组测序鉴定出所有患者的肝组织斑点的存在1354个病毒宿主嵌合读数（13 059中的1026个），包括三名HBSAG丧失患者。这些HBV积分位点被随机分布在染色体上，可以定位于参与肝癌发生的宿主基因，例如Alb，Clu和ApoB。接受或接受过抗病毒治疗的患者的含病毒整合点的百分比明显较低，而嵌合读数的百分比明显少于没有治疗的患者。肝内CCCDNA水平与病毒整合事件很好地相关。结论在慢性HBV感染的患者的不同阶段，包括HBSAG损失患者，发生了转录活跃的HBV整合。抗病毒治疗与转录活性病毒整合的数量和程度降低有关，这意味着早期治疗干预措施可能会进一步减少病毒整合事件的数量。
2024 年芝加哥国际乙肝会议计划
08:30 – 10:00 第五场：分子病毒学 III 8:30 – 8:40 对空衣壳和含 pgRNA 衣壳的蛋白质组学分析揭示了调节 pgRNA 包装和 HBV 基因组复制的细胞蛋白 刘晖 8:40 – 8:45 问答 8:45 – 8:55 在肝脏周转过程中保留共价闭合环状 DNA 的乙肝感染细胞的表征 Henrik Zhang 8:55 – 9:00 问答 9:00 – 9:10 SLF2 在与超螺旋 HBV DNA 结合时发生相分离 高子豪 9:10 – 9:15 问答 9:15 – 9:25 体内聚合酶 delta 缺陷对乙肝病毒 cccDNA 生物合成的影响 Andoni Gomez 9:25 – 9:30 问答 9:30 – 9:40 HDV RNA 位于核斑点内，在感染 HDV 的原代人肝细胞 (PHH) 中，HDV 复制需要 RNA 聚合酶 II Beatrice Ary 9:40 – 9:45 问答 9:45 – 9:55 建立 HBV 感染仓鼠模型的可行性：体外证据 张虎 9:55 – 10:00 问答
治愈乙肝需要什么？
缩写：AASLD，美国肝病研究协会；ALT，丙氨酸氨基转移酶；ASO，反义寡核苷酸；CAM，衣壳组装调节剂；cccDNA，共价闭合环状DNA；ChAdOx1-HBV/MVA-HBV，编码多种 HBV 抗原的黑猩猩腺病毒和改良痘苗安卡拉病毒载体；CHB，慢性乙型肝炎感染；EASL，欧洲肝脏研究协会；ETV，恩替卡韦；GalNac 共轭 LNA SSO，N-乙酰半乳糖胺共轭锁核酸单链寡核苷酸；HBcrAg，乙型肝炎核心相关抗原；HBeAg，乙型肝炎 BE 抗原；HBsAg，乙型肝炎表面抗原；HBV，乙型肝炎病毒；HCC，肝细胞癌；IFN，干扰素； MDSC，髓系抑制细胞；NA，核苷（酸）类似物；NAP，核酸聚合物；NK 细胞，自然杀伤细胞；NTCP，牛磺胆酸钠共转运多肽；PD-1，程序性死亡受体-1；PDL-1，程序性细胞死亡配体-1；pegIFN α，聚乙二醇化干扰素α；pgRNA，前基因组RNA；siRNA，小干扰RNA；STOP，S-抗原运输抑制寡核苷酸聚合物；TAF，替诺福韦艾拉酚胺；TCR，T 细胞受体；TDF，富马酸替诺福韦二吡呋酯；TGF，转化生长因子；TLR，Toll 样受体。
CRISPR 介导的 HBV 基因破坏概述
乙肝病毒 (HBV) 感染是全球范围内导致肝病的常见原因。目前使用核苷酸类似物 (NA) 的抗病毒治疗只能抑制从头 HBV 复制，但无法消除慢性 HBV 感染，因为共价闭合环状 (ccc) DNA 会持续存在，从而维持病毒复制。CRISPR/Cas9 系统是一种新型基因组编辑工具，可以精确破坏和灭活基因。CRISPR/Cas9 系统高效且简单，已在多项研究中用于特异性破坏 HBV 基因组，在体外和体内均产生不同的抗 HBV 作用。此外，多位点基因靶向已显示出增强的抗病毒活性，为破坏和灭活 HBV cccDNA 以及整合的 HBV DNA 的联合疗法铺平了道路。尽管该技术具有良好的抗病毒作用，但在临床应用之前仍面临着需要克服的几个挑战，即脱靶效应和体内药物输送。因此，需要改进 CRISPR/Cas9 的效率、特异性、多功能性和传递性。在这里，我们批判性地回顾了最近的文献，这些文献描述了用于设计针对 HBV 基因组的向导 RNA (gRNA) 的工具、用于表达和传递 CRISPR/Cas9 成分的载体、用于评估 CRISPR 介导的 HBV 基因破坏的模型、用于评估 CRISPR/Cas9 介导的 HBV 基因破坏引起的抗病毒和脱靶效应的方法，以及利用这种 HBV 基因编辑方法推进 HBV 治疗走向临床治愈的未来方向和挑战的前景。