为了使细胞裂解,必须分解脂质壁。洗涤剂和盐溶液可以实现这一目标。细胞壁,细胞膜和核膜也因搅拌机的作用而分解。除一种协议外,我消除了热量的使用。一些参考文献表明,需要60oC的温度来使DNAase酶变性,而DNAase酶在DNA中导致DNA剪切,而DNA则在DNA约为80oC左右。其他参考文献指出,DNA可以在60oC处变性。从我运行的所有实验中(小麦胚芽规程除外),当我使用热量时,我剪切了DNA。热量可能破坏酶以及DNA。但是,保持溶液冷却似乎会减慢酶作用。PREP溶液使用泻盐和缓冲阿司匹林进一步停用释放时降解DNA的酶并稳定DNA(酸与碱)。碳酸氢钠(小苏打)也用于缓冲溶液。肉类嫩化器具有木瓜蛋白酶,一种酶,有助于清洁可能污染其的DNA的蛋白质。木瓜汁和菠萝汁还含有此酶。最后,乙醇用于沉淀DNA。在水中,DNA可溶。 当它在乙醇中时,它会脱落和沉淀,留下其他不溶于乙醇的细胞成分。在水中,DNA可溶。当它在乙醇中时,它会脱落和沉淀,留下其他不溶于乙醇的细胞成分。
图1。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。 使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。 在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。 布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。 DNAase I处理后,遵循该过程。 作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。 进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。 可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。 因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。 车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。 11900)。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。DNAase I处理后,遵循该过程。作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。11900)。
图1。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。 使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。 在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。 布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。 DNAase I处理后,遵循该过程。 作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。 进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。 可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。 因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。 车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。 11900)。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。DNAase I处理后,遵循该过程。作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。11900)。
图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,同时不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,按照程序进行。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而无需进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)
图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,同时不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,按照程序进行。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而无需进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)
图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,且不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,遵循该程序。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而不进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)。