高-GC区域(例如RASSF1A启动子)的扩增通常效率低下,即使在未甲基化的区域中也是如此(请参阅下图中图中的第一组数据;测试的GC的GC含量为72%GC)。这可能会使不论甲基化状态如何准确量化模板的数量。然而,在使用DigitalLightCycler®DPCR系统时,将高GC增强子添加到扩增反应中可以显着提高放大效率和定量准确性(请参见下文);这增加了基于DPCR的DNA甲基化分析的灵敏度和准确性。
dPCR 微生物 DNA 检测试剂盒旨在使用数字 PCR 检测细菌、真菌、寄生虫、病毒、抗生素抗性或毒力因子基因的存在。该检测可以在 QIAcuity ® 上大约两小时内完成,且无需太多手动操作。该检测针对超过 700 种细菌、真菌、寄生虫、病毒、抗生素抗性或毒力因子基因。检测产品由一个含有引物对和水解探针的试管组成,并可针对染料(荧光团)进行配置。可选染料包括 FAM、HEX、ROX、TAMRA 和 Cy5,可在单个试剂盒中混合搭配最多 5 个目标/检测
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明,否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems,Inc。的商标。ext6771 0424
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明,否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems,Inc。的商标。ext6773 0424
摘要。随着基因和细胞治疗产品数量的不断增加,分子技术在生物分析实验室中的应用也变得越来越普遍。目前,这些技术尚无生物分析监管指南,合同研究组织依赖科学判断和最佳实践来执行这项工作,以符合 GxP 要求,用于支持生物分布和载体脱落的临床前和临床研究。本文介绍了定量聚合酶链反应 (qPCR) 和数字 PCR (dPCR) 检测的开发和验证过程和原理,如 2021 年 AAPS 为期两天的 qPCR 协调研讨会上所述。本文的范围包括利用这些技术的生物分析验证参数和验收标准。此外,本文还将重点介绍这些分子技术的优缺点,并说明应避免的常见陷阱。本文旨在提供最佳实践、工作建议和促进未来的监管指导。
定量 PCR (qPCR) 和数字 PCR (dPCR) 用于定量生物样本中的特定核酸。这两种技术都适用于许多应用,但在从通量到灵敏度等许多方面存在差异。那么,哪种方法更适合您的实验室应用呢?
图2。集成的工作流解决方案,以支持过程开发和GMP环境。Resdnaseq DPCR大肠杆菌DNA试剂盒是生物药物制造过程中用于杂质测试的集成工作流程的一部分。使用Applied Biosystems™PrepSeq™残留DNA样品制备试剂盒的Thermo Scientific™Pharma Flex themo Scientific™Pharma Flex™Flex 96深孔磁性颗粒处理器可确保残留大肠杆菌DNA的高恢复,甚至减少劳动力减少,甚至来自最复杂的样品矩阵的误差较小。使用Applied Biosystems™QuantStudio™Absolute Q™软件简化了数据分析,该软件提供了准确的定量和安全性,审核和电子签名(SAE)功能,以启用21 CFR Part 11的合规性。
此概况说明了我们的Go Greener计划中的产品包含。该程序标识了Qiagen投资组合中的产品,这些产品与我们的传统产品相比更加环保。与标准面板相比,QIASEQ靶向DNA Pro面板通过切割移液步骤减少塑料废物,从而减少了需要减少68%的移液器尖端。所需的试剂数量也较低,尤其是对于索引板,它已经从两个单独的板转变为一个具有独特双索引(UDIS)的单个板。面板的稳定性有所改善,从7个月的保质期提高到12个月。
附加声明:是的,存在潜在的竞争利益。N.W.、A.C.、A.J.T.和 G.T.¦ 领导了 dPCR MEGA 方法的专利申请。M.M.、M.H.P.和 S.S. ¦ 领导了用于增强 HDR 的药物抑制剂的专利申请。这项工作得到了英国威康信托基金会 (217112/Z/19/Z) 的支持。A.J.T.、C.B.、A.C.、G.T.和 G.S.还得到了英国国家健康和护理研究所、大奥蒙德街儿童医院、国家健康服务基金会和伦敦大学学院的生物医学研究中心的支持。A.J.T.是 Orchard Therapeutics、Generation Bio、Carbon Biosciences 和 4BIO Capital 的科学顾问委员会成员。C. Booth 在过去 3 年中为 SOBI 和 Novartis 提供临时咨询服务,并为 SOBI 和 Chiesi 制作教育材料。P.A.、S.W.、C.R.J、G.S.、R.N.、M.M.、G.T.目前受雇于阿斯利康,可能是阿斯利康的股东