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em42手册2020-10版本.pdf
EM42 Advanced Manufacturing Branch *********************************************************** The Advanced Manufacturing Branch, EM42, has two teams: the Additive Manufacturing and Digital Solutions Team (AMDST) and the Advanced Composites Manufacturing Team (ACMT).AMDST提供了整个产品生命周期的各种功能和服务。该团队的主要功能是增材制造，数字制造，结构化的轻扫描，制造执行系统以及支持硬件开发和制造的各种其他数字工具。ACMT使用可用于私人行业的最先进方法提供了高级复合材料结构的开发。这包括：纤维放置，胶带铺设，丝状缠绕，压缩成型，树脂输液，真空包装手袋上篮，烤箱固化和高压灭菌器固化。该团队还提供其他不同的功能和服务，包括用于辐射屏蔽和火箭喷嘴的材料开发，以及提供高压灭绝，步入式冷却器和冷冻机。这些团队能够提供工程解决方案，制造开发以及最复杂的大小和形状的全尺寸硬件生产。团队经验从测试和飞行文章到使用现场设备的制造增强和材料开发。现有的资源和设施已用于许多NASA，私营企业以及其他政府机构的计划，项目和任务。随着协作工作的扩大和能力，该组织设备齐全，并具有合适的人员组合和专业知识，以有效地响应当今负担得起的制造要求的需求。EM42高级制造分支机构联系人Majid Babai先生，分支部长Majid.K.Babai@nasa.gov，256–544–2795 Steven Burlingame先生
野生型 KT2440 与基因组的比较......
假单胞菌 KT2440 是一种强大的芳香分解代谢细菌，已被广泛改造用于将生物基和废物基原料转化为目标产品。为了对假单胞菌 KT2440 进行工业化驯化，之前已经进行了合理的基因组减少，从而产生了假单胞菌菌株 EM42，该菌株表现出可能对生产菌株有利的特征。在这里，我们比较了假单胞菌 KT2440 和 EM42 衍生菌株从芳香族化合物对香豆酸和在单独的菌株中从葡萄糖生产顺式、顺式-粘康酸的情况。令我们惊讶的是，EM42 衍生菌株在从任何一种底物生产粘康酸方面的表现并不优于 KT2440 衍生菌株。在生物反应器培养中，KT2440 和 EM42 衍生菌株分别以 45 g/L 和 37 g/L 的滴度从对香豆酸产生粘康酸，并以 20 g/L 和 13 g/L 的滴度从葡萄糖产生粘康酸。为了进一步了解亲本菌株之间的差异，我们分析了 KT2440 和 EM42 在芳香族化合物作为唯一碳源和能源时的生长情况。总体而言，EM42 菌株的生长速度比 KT2440 菌株低，但生长滞后时间更短。我们还观察到，与 KT2440 衍生菌株相比，EM42 衍生菌株在葡萄糖上的生长速度更高，但仅限于测试的最低葡萄糖浓度。转录组学显示，EM42 中的基因组减少对转录水平具有整体影响，并表明从葡萄糖产生粘康酸的 EM42 衍生菌株在响应葡萄糖浓度变化时表现出基因表达调节降低。总体而言，我们的研究结果表明，有必要进行进一步研究来了解基因组减少对微生物代谢和生理的影响，特别是当用于生产菌株时。
通过热诱导 ssDNA 重组技术对假单胞菌进行高效多位点基因组编辑
单链 DNA 重组工程在肠道细菌以外物种的基因组编辑中的应用受到重组酶效率和内源性错配修复 (MMR) 系统作用的限制。在这项工作中，我们建立了一个遗传系统，用于在生物技术相关菌株 EM42 的染色体中输入多种变化。为此，设计了 PL / c I857 系统的控制下，rec2 重组酶和 P. putida 的等位基因 mutL E36K PP 的高水平热诱导共转录。短时间热转移循环，然后用一套诱变寡核苷酸进行转化，可产生不同类型的基因组变化，每次修饰的频率高达 10%。相同的方法有助于超级多样化短染色体部分，以创建功能性基因组片段文库——例如核糖体结合位点。这些结果使得假单胞菌基因组工程的多重化成为可能，这是这种重要合成生物学底盘代谢重编程所必需的。