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Bxb1 的定向进化用于模块化整合酶 (MINT) 的开发
Sebastian Arangundy Franklin、Friedrich Fauser、Luis Rodriguez、Nicola J Schmidt、Nicholas A Scarlott、Adeline Chen、Rakshaa Mureli、Bhakti N Kadam、Jessica E Davis、Lifeng Liu、Danny F Xia、Mohammad Qasim、Taleoh J Bryange Vaidyak、Lam、Andrew Nguyen、David Paschon、Gregory Davis 和 Jeffrey C Miller
使用CRISPR
从前发表的那些（Lin等人）修改了所使用的原生质体再生方案（图1）（图1），2018年； Hsu等。，2019年）。我们方法的关键是一个事实，即细胞周期的阶段在很大程度上控制了途径的选择。nhej是G1，S和G2阶段中的主要DNA修复途径，而HDR仅在晚期和G2阶段发生（Hiom，2010； Puchta和Fauser，2014）。细胞周期同步已有效提高人类胚胎肾脏293T细胞的Ti效率（Li等，2014）。为了增加晚期和G2相细胞，将烟叶孵育在含有½的强度MS，0.4 M甘露醇，1 mg/L脑苯甲甲基乙酸（NAA）和0.3 mg/l动力蛋白（1N0.3K）之前的固体培养基（1N0.3K），请在原生物分离之前三天（图S1）。在N. Benthamiana中，为了简化过程，我们添加1 mg/l naa和
四倍体马铃薯中可以实现主要编辑，但需要改进
Anzalone AV、Randolph PB、Davis JR、Sousa AA、Koblan LW、Levy JM、Chen PJ、Wilson C、Newby GA、Raguram A 等人 (2019) 无需双链断裂或供体 DNA 的搜索和替换基因组编辑。Nature 576：149–157 Bastet A、Zafirov D、Giovinazzo N、Guyon-Debast A、Nogué F、Robaglia C、Gallois JL (2019) 通过 CRISPR-Cas9 碱基编辑模拟 eIF4E 中的天然多态性与对马铃薯病毒的抗性有关。Plant Biotechnol J 17：1736–1750 Butt H、Rao GS、Sedeek K、Aman R、Kamel R、Mahfouz M 通过水稻中的 prime 编辑实现除草剂抗性工程化。Plant Biotechnology Journal。 doi: 10.1111/pbi.13399 Fauser F, Schiml S, Puchta H (2014) 基于 CRISPR/Cas 的核酸酶和切口酶均可有效用于拟南芥的基因组工程。Plant J 79 : 348–359 Henikoff S, Comai L (2003) 植物功能基因组学的单核苷酸突变。Annual Review of Plant Biology 54 : 375–401 Hua K, Jiang Y, Tao X, Zhu JK 利用 prime editing 系统对水稻进行精准基因组工程。Plant Biotechnology Journal。doi: 10.1111/pbi.13395 Huang TK, Puchta H (2019) CRISPR/Cas 介导的植物基因打靶：同源重组终于迎来转机。 Plant Cell Rep 38 : 443–453 Li H, Li J, Chen J, Yan L, Xia L (2020) 通过 Prime Editing 对水稻外源和内源基因的精确修改。Molecular Plant 13 : 671–674 Lin Q, Zong Y, Xue C, Wang S, Jin S, Zhu Z, Wang Y, Anzalone AV, Raguram A, Doman JL 等人 (2020) 水稻和小麦的 Prime 基因组编辑。Nat Biotechnol 38 : 582–585 Mishra R, Joshi RK, Zhao K (2020) 作物中的碱基编辑：当前进展、局限性和未来影响。 Plant Biotechnol J 18 : 20–31 Sevestre F, Facon M, Wattebled F, Szydlowski N (2020) 促进马铃薯基因编辑：Solanum tuberosum L. cv. Desiree 基因组的单核苷酸多态性 (SNP) 图谱。Sci Rep 10 : 2045