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慢病毒介导的 CRISPR/Cas9 递送可降低小鼠青光眼模型中的眼压
肌动蛋白 ( MYOC ) 突变是已知的原发性开角型青光眼的主要遗传原因，约占所有病例的 4%。MYOC 突变会导致功能获得性表型，其中突变的肌动蛋白会在内质网 (ER) 中积聚，导致 ER 应激和小梁网 (TM) 细胞死亡。因此，在基因组水平上敲除肌动蛋白是永久治愈该疾病的理想策略。我们之前已成功利用 CRISPR/Cas9 基因组编辑通过腺病毒 5 (Ad5) 靶向 MYOC。但是，Ad5 不是适合临床使用的载体。在这里，我们试图确定腺相关病毒 (AAV) 和慢病毒 (LV) 靶向 TM 的功效。首先，我们通过玻璃体内 (IVT) 和前房 (IC) 注射检查了单链 (ss) 和自互补 (sc) AAV 血清型以及表达 GFP 的 LV 的 TM 趋向性。我们观察到 LV_ GFP 表达对通过 IVT 途径注射的 TM 更具特异性。色氨酸突变体 scAAV2 的 IC 注射显示 TM 中 GFP 的显著表达。然而，在睫状体和视网膜中也观察到了强劲的 GFP 表达。我们接下来构建了表达 Cas9 和靶向 MYOC (crMYOC) 的引导 RNA (gRNA) 的慢病毒颗粒，并用 LV_cr MYOC 转导稳定表达突变型肌动蛋白的 TM 细胞可显著减少肌动蛋白积累及其相关的慢性 ER 应激。在 Tg-MYOC Y437H 小鼠中单次 IVT 注射 LV_cr MYOC 可减少 TM 中的肌动蛋白积累并显著降低升高的眼压。总之，我们的数据表明，LV_cr MYOC 靶向 TM 中的 MYOC 基因编辑并挽救了肌动蛋白相关青光眼的小鼠模型。
揭示环境因素与珊瑚免疫之间的联系：对Acropora cervicornis中荧光蛋白表达和苯酚氧化酶活性的研究
由于气候变化而导致的环境状况恶化，严重影响了全球珊瑚礁的健康。因此，了解珊瑚如何对温度和/或极端太阳照射的极端水平和/或太阳照射的响应将指导该宝贵生态系统的未来保护和恢复工作。在此，我们介绍了一项研究，濒临灭绝的珊瑚Acropora cervicornis对水温（WT），光强度（LI）和水深度的季节性波动的免疫反应。免疫反应，这是一种参与光保护蛋白黑色素的生物合成的酶。为了研究这些反应，在12个月的时间内以三个月的间隔测量了视觉健康的A. cervicornis片段，深度为12 m，GFP，CYPF和PO活性。在此期间，还测量了每个深度的海水温度和光强度。使用一般线性混合模型来确定WT，LI和水深对免疫蛋白的季节性变化的影响。GFP，CYFP和PO活动在随着时间的流逝差异很大 - 在夏末/秋季秋末/秋季较低，在冬季晚期/早春较低。同样，WT和LI显着影响GFP，CYFP和PO活动。另一方面，水深仅对荧光蛋白浓度有显着影响，而不是PO活性。我们的研究表明，珊瑚可以在自然季节性爆发中调节这些关键的免疫相关蛋白质。也就是说，在较高的热和光条件下增加的几个月，同时在轻度的热和光条件下减少了几个月。
使用 Dharmacon Edit- 对斑马鱼胚胎进行显微注射……
图 1：微注射 Edit-R Cas9 核酸酶 mRNA 和合成 crRNA:tracrRNA 的斑马鱼胚胎具有可检测的编辑事件。仅微注射 Edit-R Cas9 mRNA（+/+ 泳道）或微注射 Edit-R Cas9 mRNA 加靶向 GFP 的 crRNA:tracrRNA（+ 泳道）。注射后 2 天制备基因组 DNA，并使用位于切割位点两侧的引物进行 PCR。使用 T7EI 进行 DNA 错配分析，并在 2% 琼脂糖凝胶上分离样品。使用 ImageJ 软件估计由于基因编辑而导致的插入和缺失百分比 (Indel %)，并显示在泳道底部。在所分析的斑马鱼胚胎中，75% 实现了使用靶向 GFP 的 crRNA:tracrRNA 编程的 Cas9 mRNA 的靶向 DNA 切割。
1 OPNAVINST 4440.26C N4L 2023 年 7 月 11 日 OPNAV ...
(2) 其余部分 (3) 三叉戟 (4) 未安装的航空发动机 d. 每种 OM&S 的详细定义可在本指令的附件 (2) 中找到。 e. 本指令规定了 OM&S 所有权要求。保管要求必须记录在书面协议中，例如引用本指令的合同和协议备忘录（如适用）。指令发布前签订的协议备忘录应在下次审查日期根据本指令进行更新。 f. 虽然军械是本指令中接受指导的 OM&S 类别，但参考资料 (a) 至 (c) 中提供了有关军械管理的进一步指导。 g. 本指令适用于政府拥有或占有的所有财产，随后提供给承包商以履行合同（GFP），无论财产类型如何。GFP 的详细定义和类型列表可在本指令的附件 (2) 中找到。 4. 政策。a.本指令根据参考文献 (d) 和 (e) 分别规定了 OM&S 和 GFP 的问责、管理和报告，由海军作战部长负责。b. 影响美国海军后勤职能的与 GFP 和 OM&S 问责、管理和报告有关的决定由负责舰队战备和后勤的海军作战部副部长 (DCNO N4) 负责。c. 在 OM&S 的接收和验收期间必须建立职责分工。职责分工必须适用于第 6a(1) 款定义的材料的实际接收和验收。对于采购，除非获得豁免，否则必须至少有两名个人执行 OM&S 的接收和验收。被授权接收 OM&S 的个人必须具有当地指挥系统分配的角色，并将首先签收交货。有权在责任财产记录系统 (APSR) 或商业物流应用程序中接收材料的个人必须获得授权委托、在 APSR 或商业物流应用程序中指定的角色、工作指令或在其职位描述中写明的书面责任。验收人员必须拥有代表指挥部接收财产所需的权限，通过签署的文件（例如，授权委托、职位描述、常规命令等）或通过 APSR 或商业物流应用程序中指定的角色（适用于适用级别，并说明其职责）。
间充质 - 茎孔 - enhance-wound-healing- ...
a杀伤力虽然慢性伤口很常见，但这些残疾条件的治疗仍然有限，并且在很大程度上无效。在这项研究中，我们检查了骨髓衍生的间充质干细胞（BM-MSC）在伤口愈合中的益处。使用杂志的伤口夹板模型，我们表明，与同种异体新生儿皮肤成纤维细胞或车辆对照培养基相比，在伤口周围的注射和应用于绿色荧光蛋白（GFP）同种异体BM-MSC的伤口床可显着增强伤口愈合。荧光激活的细胞分选分析对表达GFP的BM-MSC的伤口得出的细胞表明，在7天时，植入了27％，在14天时为7.6％，在总BMSC的总BMSC的28天时为2.5％。BM-MSC处理
06/2012 - 08/2012研究实习（T. Lahaye教授，遗传学），其中我克隆了一个分裂的GFP系统来监视植物病原体的故事。克隆
2023在格罗宁根大学2020年至2021年获得大学教学资格（UTQ）参加了虚拟会议（无介绍）：生物设计会议2020＆2021，CINBI 2020，世界CRISPR日，RNA 2020，RNA 2020，EFB生物催化日开放日。06/2020 Three-day course in analysis of bulk RNA-seq data with R , MRC LMB 11/2019 Four-day course in Numeric Python and Deep Neural Network Basics , MRC LMB 05/2016 Five-day training school systems biocatalysis , COST action, Siena, Italy 2015 – 2016 RUG: 1-day workshop in numerical python , 2-day course on protein mass光谱，为期5天的大师班计算方法，用于酶的发现与工程
unc-52 基因座的两个等位基因破坏了潜在的细胞......
图 1：A：NK358 pat-3::GFP 动物的肌肉细胞。虚线代表致密体（箭头），直线代表 M 线（箭头）；B：pat-3::GFP; unc-52(kq748) 动物的肌肉细胞。虚线代表致密体（箭头），直线（箭头）代表 M 线。定位看起来与图 1A 相似；C：N2 肌肉细胞的罗丹明偶联鬼笔环肽染色。沿肌肉长度的肌动蛋白细胞骨架被染色（箭头）；D：unc-52(kq748) 肌肉细胞的罗丹明偶联鬼笔环肽染色。细（肌动蛋白）丝（箭头）中没有明显异常。比例尺 = 10 µm。； E：unc-52 (kq748)（平均每秒 1.4454 次冲击，n=50）、unc-52(kq745)（平均每秒 1.339 次冲击，n=50）和 N2 野生型（平均每秒 1.99 次冲击，n=50）的冲击试验结果。 * 与 N2 野生型相比，p 值 < 0.05。
T.Yau High School Science Award 仅用于2024丘成桐中学 ...
2.1 Construction of recombinant plasmids ...........................................................................................9 2.2 Protein expression and purification .............................................................................................. 10 2.3 Electrophoretic characterization of proteins ............................................................................... 11 2.4 Electrical conversion ........................................................................................................................ 11 2.5 Flow cytometry sorting ................................................................................................................... 11 2.6 ELISA reader screening .................................................................................................................. 12 3.Directed evolution of GFP catenane ........................................................................................ 12
抗治疗癌细胞的计算分析
图1。在M12中跟踪EB1彗星的等源性PC细胞系，表达GFP标记的WT-或变体-AR。 mt Tips和AR用GFP标记并成像一分钟（每秒的采集率为两个图像）。 EB1彗星是计算跟踪的（Yang等，2005）。 颜色编码代表EB1速度和较冷的颜色对应于较低的速度，较温暖的颜色对应于更快的速度。 比例尺等于5 µm。 （a）表达野生型AR变体的PC细胞的MT生长轨迹。 中位速度约为15 µm，边缘有明显的放缓，那里没有AR。 （b）表达对紫杉醇治疗具有抗性的ARV7变体细胞的MT生长轨迹。 中位速度约为24 um/min。 下面板显示相应的EB1彗星速度直方图。 在AR野生型中显示了µm/min的生长速度的直方图和ARV7变体的（d）。 我们解散了前列腺组织（图 2）根据（Goldstein等，2011）和培养的类器官在M12中跟踪EB1彗星的等源性PC细胞系，表达GFP标记的WT-或变体-AR。mt Tips和AR用GFP标记并成像一分钟（每秒的采集率为两个图像）。EB1彗星是计算跟踪的（Yang等，2005）。颜色编码代表EB1速度和较冷的颜色对应于较低的速度，较温暖的颜色对应于更快的速度。比例尺等于5 µm。（a）表达野生型AR变体的PC细胞的MT生长轨迹。中位速度约为15 µm，边缘有明显的放缓，那里没有AR。（b）表达对紫杉醇治疗具有抗性的ARV7变体细胞的MT生长轨迹。中位速度约为24 um/min。下面板显示相应的EB1彗星速度直方图。在AR野生型中显示了µm/min的生长速度的直方图和ARV7变体的（d）。我们解散了前列腺组织（图2）根据（Goldstein等，2011）和培养的类器官
给予人源性间充质干细胞
摘要：越来越多的证据表明，间充质干细胞（MSC）的施用是各种脑部疾病（包括缺血性中风）的有前途选择。研究表明，缺血性中风后的MSC移植提供了有益的作用，例如神经再生，部分通过在常规神经源性区（例如脑膜下和粒状区域）中激活内源性神经茎/祖细胞（NSPC）。然而，MSC移植是否调节缺血性中风后在受伤区域激活的损伤诱导的NSPC（INDC）的命运尚不清楚。因此，对小鼠进行缺血性中风，并在巢蛋白– GFP转基因小鼠的受伤部位移植了麦克利标记的人MSC（H-MSC）。脑部切片的免疫组织化学表明，在接枝部位，而不是在脑室下区域的区域周围观察到许多GFP +细胞，这表明移植后的MCHERRY + H-MSC刺激了GFP +局部活化的内源性内源性INDC。为支持这些发现，共培养研究表明，H-MSC促进了从缺血区域提取的INDC的增殖和神经分化。此外，使用微阵列数据的途径分析和基因本体分析表明，在与H-MSCS共培养的INDC中，改变了与自我更新，神经分化和突触形成相关的各种基因的表达模式。我们还将H-MSC（5.0×10 4细胞/ µL）转移到脑动脉闭塞后6周后转移到中风后小鼠大脑中。与注射盐水注射的对照相比，H-MSC移植显示出明显改善的神经功能。这些结果表明，H-MSC的移植在部分通过调节INDC的命运来改善缺血性中风后的神经功能。