Advansol Power Technology Co。,Ltd。 S51 AGC扁平玻璃plc。P1 Ajin Solartec S36和Solar Technology Co。,Ltd。 M46 Anhui Huasun Energy Co。,Ltd。 U23 Anhui Wingo Technology Co。,Ltd。 V29 Antai Technology Co。,Ltd。 S11 AP Systems F41 Asia Growth Ventures Co。,Ltd。 U35亚太城市能源协会(APUEA)Y24 ASTRONERGY W1 ASUENEINC。F34AZ PRO(Xiamen)Technology Co.,Ltd。 H53 Bae Batterien GmbH G19-A Basor Asia Pacific。E11 Baywa R.E. 太阳能系统公司,有限公司。 F11 BCPG上市公司有限公司N7 Bluesun Solar Co。,Ltd。 H35 BMW Millennium Auto Group A3 Botree Recycling Technologies N53 BSP可再生能源公司有限公司H55 C.M. Manufacturing Co。,Ltd。 H19 CF Energy Co。,Ltd。 W42 Changan新兴绿色能源技术(深圳)S52 Changsha Ecer供应链有限公司。 T42 Changzhou Eging Photovoltaic Technology Co。,Ltd。 U11 Changzhou Huashu Jinming Intelligent Equipment技术研究所有限公司。 L11 Changzhou Powitt Solar Co。,Ltd。 M45 Chardon Taiwan Corporation T35 Chiko G56 Chinaland Solar Energy Co。,Ltd。 J41 Clenergy Technology Co。,Ltd。 Q1 CR 3(泰国)有限公司。 V8康明斯DKSH(泰国)有限公司J55 DAH Solar Co。,Ltd。 Q23 DAS Solar Co。,Ltd。 L35 Delta电子(泰国)PCL。 J1 Demco Public Co。,Ltd。 U37 Deng Kai Sdn。 bhd。 X31能源部替代能源开发和效率部(DEDE)M1 Digisine Energytech Co。,Ltd。 S26 Dongguan Better Electronics Technology Co。,Ltd。 D53 DongGuan Goodlink New Energy Co。,Ltd。 D57 Dongguan Lude Photovoltaic Co。,Ltd。 S47 Dongguan Pengjin机械技术有限公司。 N54 Dongguan Xuanjing Electronics Co.,Ltd。 W7 Dosstech M19E11 Baywa R.E.太阳能系统公司,有限公司。 F11 BCPG上市公司有限公司N7 Bluesun Solar Co。,Ltd。 H35 BMW Millennium Auto Group A3 Botree Recycling Technologies N53 BSP可再生能源公司有限公司H55 C.M.Manufacturing Co。,Ltd。 H19 CF Energy Co。,Ltd。 W42 Changan新兴绿色能源技术(深圳)S52 Changsha Ecer供应链有限公司。 T42 Changzhou Eging Photovoltaic Technology Co。,Ltd。 U11 Changzhou Huashu Jinming Intelligent Equipment技术研究所有限公司。 L11 Changzhou Powitt Solar Co。,Ltd。 M45 Chardon Taiwan Corporation T35 Chiko G56 Chinaland Solar Energy Co。,Ltd。 J41 Clenergy Technology Co。,Ltd。 Q1 CR 3(泰国)有限公司。 V8康明斯DKSH(泰国)有限公司J55 DAH Solar Co。,Ltd。 Q23 DAS Solar Co。,Ltd。 L35 Delta电子(泰国)PCL。J1 Demco Public Co。,Ltd。 U37 Deng Kai Sdn。 bhd。 X31能源部替代能源开发和效率部(DEDE)M1 Digisine Energytech Co。,Ltd。 S26 Dongguan Better Electronics Technology Co。,Ltd。 D53 DongGuan Goodlink New Energy Co。,Ltd。 D57 Dongguan Lude Photovoltaic Co。,Ltd。 S47 Dongguan Pengjin机械技术有限公司。 N54 Dongguan Xuanjing Electronics Co.,Ltd。 W7 Dosstech M19J1 Demco Public Co。,Ltd。 U37 Deng Kai Sdn。bhd。X31能源部替代能源开发和效率部(DEDE)M1 Digisine Energytech Co。,Ltd。 S26 Dongguan Better Electronics Technology Co。,Ltd。 D53 DongGuan Goodlink New Energy Co。,Ltd。 D57 Dongguan Lude Photovoltaic Co。,Ltd。 S47 Dongguan Pengjin机械技术有限公司。 N54 Dongguan Xuanjing Electronics Co.,Ltd。 W7 Dosstech M19
通常,诊断和治疗较早的肾癌,结果越好。肾癌期生存期为5年的存活率(1)。肾细胞癌(RCC)是最常见的恶性肾脏肿瘤类型。它是在发生过滤的肾脏的主要物质中发现的。RCC可以在肾脏内显示为单个肿瘤,也可以在同一肾脏内显示为两个或两个或更多肿瘤(2)。10个肾脏癌中约有9个是肾细胞癌。尽管RCC通常在肾脏中成长为单个肿瘤,但可以同时在一个肾脏或两个肾脏中同时有两个或更多的肿瘤(3)。RCC根据实验室中癌细胞的出现分为几种亚型。知道RCC的亚型可以帮助您的医生确定您的癌症是否是由遗传性遗传综合征引起的(4)。尽管在RCC治疗方面取得了许多成功,但治疗方案和反应率在各种分子亚型之间有所不同(5)。治疗肾脏肿块的主要目标用于治愈癌症患者并尽可能保留肾脏功能。保护肾功能对于仅肾脏或另一种类型的肾脏疾病的患者很重要(6)。长的非编码RNA(LNCRNA)是RNA转录本,其长度超过200个核苷酸,但未转化为蛋白质。近年来,LNCRNA被发现是各种生物学功能和基因表达调节的重要参与者(7)。某些LNCRNA表达的变化与各种形式的癌症有关(8)。许多LNCRNA,包括Hotair(9),MRCCAT1(9),UCA1(10),ATB(11),H19(12)和–FTX(13)(13),已在RCC肿瘤发生中鉴定出来,并建议对RCC的重要生物标志物进行重要的生物标志物。核拼接组装转录本1(NEAT1)是一个长的非编码RNA,从家族性肿瘤综合征转录,在11q13.1染色体上的多个内分泌肿瘤(MEN)1型基因座,并编码两个转录变体,NEAT1 -1 -1(3756 bp)和Neateat 1(3756 bp)和Neat11 -2 -226 -Bp- 3756 Bp(3756)。由于缺乏NEAT1的小鼠正常发育,因此似乎不需要Neat1来正常的胚胎发育或成人生活。然而,在另一种情况下,Neat1的遗传消融导致乳腺形态发生异常和泌乳缺陷(15)。如果Neat1的损失与正常的细胞活力和生长一致,则应进一步研究。由于Neat1负责肿瘤起始
方法在补充了10%FCS,1%谷歌补充剂(Gibco),100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉菌素的IMDM(Gibco)中培养了衍生成近单倍型HAP1细胞的细胞培养。siRNA转染是根据制造商的指南使用Rnaimax(Invitrogen)进行的。在这项研究中使用了以下siRNA:Sinon-targetable(Dharmacon),Sipolg2(地平线,TargetPlus,SmartPool),SIMRPL23(Horizon,Targetplus,TargetPlus,Smartpool)。将所有药物(Aphidicolin,Hu,Olaparib,Rad51i(B02),DNA-PKI(NU74441)和寡霉素A)溶解在DMSO中,并以指示浓度使用。细胞使用具有137CS源的γ提取器(最佳疗法)进行γ辐射。生长测定HAP1细胞以1500个细胞/孔的密度将HAP1细胞铺在96孔板中,并被视为5天。5天后,使用100%甲醇固定细胞,并在室温下使用Crystal Violet染色2H。随后,将晶体紫溶解在10%乙酸中,并使用Biotek Epoch Epoch分光光度计在595 nm处测量强度。使用非线性拟合,sigmoidal,4pl,x是log(浓度),将这些测量值用于棱镜中的IC50计算。在9mm玻璃盖上生长免疫荧光细胞,并在室温下以4%甲醛和0.2%Triton X-100固定10分钟。使用了以下抗体:人类抗克雷斯特(Cortex Biochem,CS1058),兔抗PH3SER10(Campro,#07-081),小鼠抗ERCC6L(PICH)(ABNOVA,ABNOVA,000548421-B01P)。所有初级抗体在4°C的夜间孵育。使用固定缓冲液I(BD生物科学)固定细胞。细胞。二级抗体(分子探针,Invitrogen)和DAPI在室温下孵育2小时。使用延长金(Invitrogen)安装盖玻片。使用具有60倍1.40 Na油目标的Deltavision Deonvolution显微镜(Applied Precision)获取图像。SoftWorx(应用精度),ImageJ,Adobe Photoshop和Illustrator CS6用于处理获得的图像。单倍体插入诱变筛选基因对用APH或HU处理的HAP1细胞的存活至关重要,如先前所述35,使用单倍体插入诱变筛查鉴定。诱变的HAP1细胞是从Brummelkamp实验室获得的。简短地,获得HAP1细胞的诱变如下:在HEK293T细胞中产生了基因陷阱逆转录病毒。每天两次收获逆转录病毒至少三天,并通过离心(使用SW28转子进行2小时,21,000 rpm,4°C,4°C)进行沉淀。在8μg/ml硫酸素硫酸素的存在下,在T175烧瓶中至少连续两天,在8μg/ml硫酸素的存在下,将大约4000万个HAP1细胞通过浓缩基因陷阱病毒的转导而被诱变。在包含10%DMSO和10%FCS的IMDM培养基中冷冻诱变细胞。解冻后,在存在27.5 nm adphidicolin或100μmHu的情况下,将诱变的HAP1细胞转移了10天。传递后,通过胰蛋白酶-EDTA收集细胞,然后进行沉淀。为了最大程度地减少潜在地含有杂合突变的二倍体细胞的混杂,用DAPI染色固定的细胞,以允许使用Astrios Moflo对G1单倍体DNA含量进行分类。将3000万个排序的细胞在56°C下裂解过夜,以使使用DNA迷你试剂盒(QIAGEN)进行基因组DNA分离。插入位点映射基因陷阱插入位点通过LAM-PCR放大,然后进行捕获,ssDNA接头连接和指数放大,并在测序之前使用含有Illumina适配器的引物,如前所述,如前所述35。映射和插入位点的分析以前描述了78。简短地,在对HISEQ 2000或HISEQ 2500(Illumina)进行测序之后,将插入位点映射到人类基因组(H19),允许一个不匹配,并与RefSeq坐标相交,以将插入位点分配给基因。基因区域在相对链上重叠的基因区域没有考虑进行分析,而对于在相同链基因名称上重叠的基因是串联的。对于每种复制和两种药物治疗(APH或HU)基因的必要性都是通过二项式检验确定的。合成致死性。一个基因通过所有Fisher的测试,其p值截止为0.05,效应大小至少为0.12(减法比率wt sense比率 - 复制应力条件感官比率)。
