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CRISPR 敲入协议 - 用于刺激人类 T 细胞......
注意：确保将 Cas9 蛋白作为反应中的最后一种材料添加。如果进行了敲除编辑，则无需添加 HDRT。表中 Cas9 与 sgRNA 的比例为 1:3。强烈建议对每个设计进行 Cas9：sgRNA 比例以及 Cas9 蛋白和 HDRT 的量进行实验优化。GenScript 建议通过测试 1:1 和 1:4 之间的 RNP 比例开始优化。ssDNA 或 dsDNA 的量可以分别最初设置在 1 μ g - 4 μ g 或 0.2 μ g - 1 μ g 之间（对于 0.5 kb 和 4 kb 之间的 HDRT；如果 HDRT 长度超出此范围，则需要相应调整试剂量）。最好为第一次实验设置阴性对照、阳性对照和转染对照。
CRISPR 敲入方案
注意：确保将 Cas9 蛋白作为反应中的最后一种材料添加。在 KO 实验中，无需添加 HDRT。表中 Cas9 与 sgRNA 的比例为 1:3，对于 1.8kb ssDNA，HDRT 为 4 μ g。强烈建议针对每个具体设计对 Cas9：sgRNA 比例以及 Cas9 蛋白和 HDRT 的量进行实验优化。GenScript 建议通过测试 1:1 和 1:4 之间的 RNP 比例开始优化。我们建议 ssDNA 的量可以设置在 2 μ g 和 6 μ g 之间（对于 0.5kb 和 4kb 之间的 HDRT 长度；如果 HDRT 长度超出此范围，则可能需要适当调整试剂的量）。最好为第一次实验分别设置阴性对照、阳性对照和转染对照。
CRISPR敲入协议 - 用于Jurkat细胞...
注意：确保将Cas9蛋白添加为反应中的最后材料。在KO的情况下，无需添加HDRT。表中Cas9与SGRNA的比率为1：3，对于1.8kb dsDNA，HDR为1μg。强烈建议每种特定设计对CAS9的实验优化：SGRNA比和Cas9蛋白和HDRT的量。Genscript建议通过测试1：1至1：4之间的RNP比率开始优化。我们建议最初可以将DsDNA的量设置在0.5μg和3μg之间（对于0.5kb和4KB之间的HDRT；如果HDRT长度超过此范围，则可能需要适当调整试剂的量）。为第一个实验分别设置负面对照，阳性对照和转染控制是最好的做法。