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metap2抑制作用将血红蛋白S修改为延迟...
液相色谱 - 冰冻/融化，涡流和离心（10 000 g，5分钟，4°C）之前，然后使用Zeba Spin Desalting柱，7K MWCO，7K MWCO，0.5 mL（Thermo Fisher Scientific，Waltham，Ma）将上清液中的任何残留缓冲液与水交换。样品在分析之前将样品转移到新容器中，并在2 80°C下存储。完整的环球蛋白块通过使用水的生育BEH300 C4反相柱（2.1 3 100 mm，300°孔，1.7 m m;零件号;零件号186004496）在Agilent 1290 Infinity II超高性液相色谱仪上，与Agilent 6530精确的质量电喷雾电离四极杆飞行时间质量表格仪耦合。光谱被解卷积以计算球蛋白的修饰百分比。
CD44 和 CD221 定向磁性立方体将海伦林靶向递送至横纹肌肉瘤细胞
立方体的合成无功能立方体（Cub unfun ；由 GMO、尼罗河红和 F127 组成的空立方体）和空白立方体（Cub blank ；未经功能化的 PEG 化阳离子立方体，由 GMO、DSPE-PEG-Mal、DOTAP、尼罗河红和 F127 组成）的制备采用之前发表的方法并进行了一些修改 [1]。将 GMO、DSPE-PEG-Mal、DOTAP、尼罗河红、helenalin、SPION 溶解在乙醇中并充分涡旋混合（表 S1）。在 70 °C 的真空条件下在加热块中蒸发有机溶剂，然后在 N 2 气流下进一步干燥。将脂质混合物冷冻干燥过夜。然后将 2 微克/毫升 Pluronic F127（溶于 PBS）加入干脂质中，然后以 20 kHz 的频率进行超声处理，开启 5 秒，关闭 5 秒，持续 5 分钟。为了将未封装的化合物（如 helenalin 和 Nile Red）从立方相分散体中分离出来，使用 10 kDa MWCO Slide-A-Lyzer MINI 透析装置（Fisher Scientific Ltd，拉夫堡，英国）对溶液进行透析 2 小时。对于抗体结合，将 5 µg 抗 CD221 抗体与 50 ng Traut 试剂（Sigma Aldrich，吉林汉姆，英国）在磷酸盐缓冲液（0.1 M，2 mM EDTA，pH 8.0）中在室温（RT）下反应 1 小时进行硫醇化，导致 -SH 基团附着到完整的抗体上 [2]。或者，抗 CD221 抗体通过与 10 mM DTT 在室温下反应 2 小时在铰链区处被切割。反应结束后，通过 10 kDa MWCO 透析 2 小时从硫醇化抗体或半抗体中去除残留化学物质 [3]。纯化的硫醇化抗体或半抗体通过抗体的-SH 基团和立方体上的马来酰亚胺基团之间的硫醇-马来酰亚胺迈克尔反应过夜结合到 Cub 空白中，形成 Cub wh-Ab 或 Cub ha-Ab 。对于透明质酸 (HA) 结合，将不同体积的 1 mg/mL 透明质酸与 Cub 空白在室温下孵育 4 小时，产生 Cub 1-5%HA 。我们在溶剂蒸发之前将不同量的 SPION 掺入脂质混合物中，并通过超声处理生成 Cub 1-5%ION。通过将半抗体与 Cub 1%ION 结合，再与 HA 连接，合成三功能立方体 (Cub fun)。立方体中海伦那林的包封率 (EE) 是通过将载有海伦那林的立方体经 10 kDa MWCO 透析后用乙醇溶解，并通过液相色谱 (LC) 定量 NPs 中包封的海伦那林，然后将包封的海伦那林的量除以海伦那林的总量并乘以 100 来计算的。海伦那林的释放率是通过从 100 中减去 EE 来评估的。
通过超滤对病毒的浓度和纯化
摘要本简短的评论总结了不同研究应用的各种病毒的集中和纯化步骤。讨论的方法已用于医学研究，监测海洋环境中的水生病毒以及对饮用水和食物质量的分析。此外，具有流行病和流行潜力的病原体构成的持续威胁（尤其是近年来）带来了诸如埃博拉病毒（例如EBOV），冠状病毒（例如MERS-COV，SARS-COV-1和SARS-COV-2）和痘病毒（例如mpxv）进入聚光灯。在这些情况下，超滤具有广泛的适用性，从一般研究到新型疫苗和治疗开发以及疾病监测。我们重点介绍了许多示例，其中vivaspin®和vivaflow®超滤设备已在这些研究领域中使用，并包括针对选择最佳设备和分子量临界值（MWCO）的指导。
macrodep®预防离心设备
Macrodep Advance离心设备可快速有效地浓度和纯化20 mL的生物样品。独特的设计使过滤区域最大化，以快速处理样品，同时保持温和的浓度环境以保持蛋白质活性和构象。超滤分子量截止（MWCO）设备的广泛选择融合了蛋白质和核酸结合非常低的欧米茄膜。超滤设备非常适合浓缩小肽，寡核苷酸，核酸，酶，抗体和其他类似的大分子。Macrodep Advance离心过滤器也有0.2和0.45μm的孔径，含有Pall的Supor supor聚氨酯膜，用于低蛋白质和核酸结合，具有高化的化学兼容性。微孔膜选择是微生物浓度，样品澄清，颗粒和胶体的去除以及从琼脂糖凝胶中温和洗脱核酸的理想选择。
MAD7：IP友好CRISPR酶
细胞，并重悬于裂解中（20 mM Tris，500 mM NaCl和10 mM Imidazole，pH 8.0），并补充了“完整的蛋白酶抑制剂鸡尾酒”（Merck，CAT，CAT＃11697498001）。重悬于重悬酶后，苯并酶核酸酶（默克，CAT＃E1014-5KU，每40 ml裂解物10μl）和溶菌酶（默克，CAT＃10837059001，1 mg/ml裂解物），并加入冰上30分钟。细胞在Avestin乳液C-5均质器（15-20 kpsi）上被破坏，并通过离心（15,000 g，4°C，15分钟）去除不溶性细胞碎片。在10°C下进行所有随后的色谱步骤。清除的裂解物被加载在5 ml Histrap FF柱上（Cytiva，Cat＃17525501）。将树脂用10列的洗涤液（裂解效果）洗涤（但使用20 mM咪唑）洗涤，并用10列的洗脱体洗脱蛋白（裂解效果，但用250毫米咪唑）洗脱。馏分合并，并在透析中稀释至25 mL（250 mM KCl，20 mM HEPES和1 mM DTT和1 mM EDTT和1 mM EDTA，pH 8.0）。使用透析膜管透析在10°C下透析，使用分子量切割为6-8 kDa（光谱/POR标准级再生纤维素，宽23毫米）的透析膜管。1-2小时后，将透析液替换，透析继续过夜。第二天，将透析样品在10 mM HEPE（pH 8）中稀释了两倍（pH 8），并立即加载在5 mL HITRAP肝素HP柱（Cytiva，CAT，CAT＃17040601）上，并用Bu效率a（20 mM Hepes，150 mm Hepes，150 mm KCl，pH 8.0）。关注的分数被汇总并上升。将树脂用2柱体积洗涤，并使用bu虫B（20 mM Hepes，2m kcl，pH 8.0）的线性梯度在12柱体积上洗脱蛋白质。含量为2 mL；通过在120 mL SuperDex200凝胶滤光管（Cytiva＃28989335）上注射上浓缩样品，以50 mM磷酸钠，300 mM NaCl，300 mM NaCl，0.1 mm EDTA，pH 7.5 AS分离bu e e e e e e e e e e o 进行了最终的色谱步骤。进行了最终的色谱步骤。
电子补充信息β-内酰胺酶...
7-氨基-3-氯甲基-3-头孢烯-4-羧酸对甲氧基苄酯盐酸盐 (ACLE) 购自 AK Scientific (加利福尼亚州联合城)。4-硝基苯硫酚 (NBT) 和 3-马来酰亚胺基丙酸购自 TCI Chemicals (日本东京)。头孢噻吩购自 P212121, LLC (马萨诸塞州波士顿)。氘代二甲基亚砜 (DMSO-d 6 ) 购自 Cambridge Isotope Laboratories (马萨诸塞州安多弗)。三乙胺 (TEA)、4-甲基吗啉 (NMM)、无水二氯甲烷 (DCM)、无水二甲基甲酰胺 (DMF)、己烷、乙醚、乙酸乙酯、薄层色谱法 (TLC) 硅胶 60 玻璃板、无水磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钠、CENTA、二甲基亚砜 (DMSO)、三氟乙酸 (TFA)、苯甲醚、硫醇官能化的 4 臂聚乙二醇 (4 臂-PEG-SH; 20 kDa)、来自蜡样芽孢杆菌的 β L (β L-BC; cat.# P0389, 28 kDa, 2817.8 U/mg 蛋白, 4.72% 蛋白)、来自铜绿假单胞菌的 β L (β L-PA; cat.# L6170, 30 kDa, 1080 U/mg 蛋白，1% 蛋白）、来自阴沟肠杆菌的 β L（β L-EC；目录号 P4524，20-26 kDa，0.37 U/mg 蛋白，56.45% 蛋白）、来自溶组织梭菌的胶原酶、磷酸盐缓冲盐水 (PBS)、硝酸钠、阳离子调整的 M¨uller-Hinton 肉汤 (CMHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸、1-[双 (二甲氨基) 亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶 3-氧化物六氟磷酸盐 (HATU)、N,N-二异丙基乙胺 (DIPEA) 和盐酸 (HCl) 均购自 Millipore Sigma（密苏里州圣路易斯）。甲醇、硅胶、胰蛋白酶大豆肉汤 (TSB) 和 SYLGARD 184 硅胶弹性体试剂盒购自 Thermo Fisher Scientific (马萨诸塞州沃尔瑟姆)。甲氧基聚乙二醇硫醇 (mPEG-硫醇；1.7 kDa) 购自 Laysan Bio, Inc. (阿拉巴马州阿拉伯)。金黄色葡萄球菌菌株 25923 和 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) MW2、蜡样芽孢杆菌 13061、大肠杆菌 25922 和阴沟肠杆菌 13047 购自 ATCC (弗吉尼亚州马纳萨斯)。铜绿假单胞菌 PA01 由沃尔特里德陆军研究所 (马里兰州银泉) 慷慨捐赠。大肠杆菌 DH5-α 购自 Life Technologies (加利福尼亚州卡尔斯巴德)。双马来酰亚胺-PEG 3（mal-PEG-mal，494.5 Da）购自 BroadPharm（加利福尼亚州圣地亚哥）。Repligen Biotech 纤维素酯 500-1000 Da 分子量截留 (MWCO) 透析管购自 Spectrum Labs Inc.（加利福尼亚州兰乔多明格斯）。超高纯度氮气（99.999%）购自 Airgas（罗德岛州沃里克）。所有实验均采用超纯去离子水（18.2 MΩ·cm，Millipore Sigma，马萨诸塞州比勒里卡）。本研究中提到的室温 (RT) 约为 23 ◦ C。