高通量的witturb-seq实验遵循CRISPRI屏幕,单细胞库准备,测序和数据分析的工作流程(图1)。虽然多种单细胞测序方法与wisturb-seq兼容,但该实验是由合同研究组织(荷兰乌特雷希特的单细胞发现)进行的,但使用了组合索引套件来最大程度地提高细胞吞吐量。CRISPR液滴测序(农作物Seq)指导RNA(GRNA)载体用于CRISPRI屏幕引入Polya尾巴,以确保与试剂盒中的GRNA捕获引物的兼容性。在CRISPRI屏幕之后,固定细胞并将其存储在-80°C下,直到库制备。生成了两种不同类型的条形码测序库:SCRNA-SEQ库和CRISPR库。对于涵盖100,000至1,000,000个单元的项目,建议使用25B流单元的Novaseq X Plus系统(表1)。
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