Nyberg

Nyberg 等人 BioRxiv

通过同源定向修复 (HDR) 进行基因组编辑使得对基因序列进行精确而慎重的修改成为可能。CRISPR/Cas9 介导的 HDR 是实现这一目标的最简单方法。然而，在提高效率和扩大对果蝇以及其他果蝇物种的任何遗传背景的适用性方面仍然存在技术挑战。为了解决这些问题，我们开发了一种两阶段标记辅助策略，以促进果蝇的精确、无疤痕编辑，而几乎不需要分子筛选。使用与重组 Cas9 蛋白复合的 sgRNA，我们分析了每个 sgRNA 的基因组切割效率。然后，我们使用有效切割目标基因的 sgRNA 和转化标记的新应用进行 HDR。这些新工具可用于在感兴趣的区域进行单个更改或一系列等位基因替换，或创建其他遗传工具，例如平衡染色体。