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RNF43 和 PWWP2B 可抑制癌细胞增殖，是晚期胃癌患者 FDA 批准药物的预测或预后生物标志物
FDA 批准的 1,448 种药物化合物库购自 Selleck Chemicals。INC280 由 Novartis（瑞士巴塞尔）提供。将 HAP1、HAP1 RNF43 KO 和 HAP1 PWWP2B KO 细胞以 2,000 或 3,000 个细胞/孔的密度接种在 384 孔透明底培养板中，加入 20 µL 含有 10% FBS 的 IMDM 或 RPMI 1640 培养基，培养 24 小时。然后，将 10 µM FDA 批准的药物加入孔中，并将细胞再孵育 48 小时。对照细胞未暴露于药物。在增殖测定当天，除去培养基，向384孔板的每个孔中加入20μL新鲜培养基，然后加入5μL MTS溶液（Cell Titer 96 Aqueous One Solution细胞增殖测定试剂盒；美国威斯康星州麦迪逊市Promega公司），将板在37°C下孵育1小时。
2021; 12(15): 4616-4625。doi: 10.7150/jca.56014 研究论文 RNF43 和 PWWP2B 抑制癌细胞增殖并具有预测或预后生物学
背景：基因的异常调控与胃癌密切相关。胃癌的表征需要开发新的治疗方法以及识别预后标志物以预测对新药的反应。在我们的研究中，我们使用 RNA 测序分析来显示胃癌组织中的胃癌预后标志物。我们特别选择研究 RNF43，因为它通过与 Wnt 受体相互作用来抑制胃癌相关的 Wnt/β-catenin 信号传导。选择 PWWP2B 是因为它是胃癌中下调的基因。方法：利用 RNA 测序分析，我们评估了胃癌患者的 mRNA 表达谱。此外，我们使用了 HAP1 细胞，这是一种源自男性慢性粒细胞白血病细胞系 KBM-7 的人类近单倍体细胞系。这些细胞系每个基因都有一个副本，确保编辑的等位基因不会被其他等位基因掩盖。我们研究了1,449种FDA批准药物在HAP1、HAP1 RNF43 KO和HAP1 PWWP2B KO细胞中的筛选。RNA测序数据显示，复发性胃癌患者中RNF43和PWWP2B表达下调。接下来，我们研究了选定药物在RNF43和PWWP2B下调的MKN45胃癌细胞和异种移植模型中的抗癌作用。结果：在这些FDA批准的药物中，三种药物（多西他赛三水合物、培利替尼和uprosertib）在RNF43 KO细胞和PWWP2B KO细胞中显示出强效的抑制作用。在MKN45异种移植模型中，多西他赛三水合物、uprosertib或培利替尼治疗组的肿瘤体积显著缩小。我们的数据表明RNF43和PWWP2B是预测胃癌复发的生物标志物。结论：我们的研究结果表明多西他赛三水合物、uprosertib 和培利替尼可作为预防和治疗 RNF43 和 PWWP2B 表达降低的胃癌的新型治疗药物。