少于 20 个核苷酸,应使用与下引物 T 相等的退火温度。也可以使用温度梯度来优化每个引物对的退火温度。对于两步循环,梯度
Lot Quantity Description 3070014 0.2 kU Phusion DNA Polymerase 3130783 0.4 mL 10 mM dNTP MixPhusion kit component 3048246 0.04 mL Lambda-DNA 3085897 0.4 mL Lambda & PhiX MixReady to Use Marker 3016845 0.05 mL Primer Mix 1.3 kb 3083834 0.05 mL Primer Mix 10 kb 3121943 3×1.5 ml 5x phusion hf缓冲液3121933 1.5 ml 50 mm MGCl2 3087331 1.5 ml 5x 5x phusion GC缓冲液3085597 0.5 ml DMSO
批次 数量 描述 2727858 2 x 1.25 mL Phusion™ Plus PCR Master Mix 2740002 1.25 mL Phusion™ GC 增强剂 2720703 2 x 1.25 mL 水,无核酸酶
图3。增加MGCL₂浓度对目标下90%的扩增的影响。富裕的s。金黄色葡萄球菌gDNA靶序列使用Phusion Plus Plus DNA聚合酶在Proflex PCR系统上进行扩增。每个20 µL反应含有10 ng的s。金黄色葡萄球菌和另外1 mm,1.5 mm,2 mm或2.5 mmmgcl₂。热循环条件:98°C的30秒;在98°C,最佳退火温度下10秒的10秒循环(表4),在64°C时为1分钟/kb;在64°C下5分钟。PCR产品以2%E-Gel 48含Sybr安全染色的琼脂糖凝胶运行。车道M:E-GEL 1 KB Plus Express DNA梯子。
Thermo Scientific™Phusion™高保真DNA聚合酶启用了高性能PCR。自推出以来,Thermo Scientific™Phusion™产品已不断改进,以应对更多的应用和挑战。最新的添加(Thermo Scientific™Phusion™加上DNA聚合酶)适用于许多应用,因为它的高忠诚度,鲁棒性,抑制剂耐受性和通用引物退火。