此概况说明了我们的Go Greener计划中的产品包含。该程序标识了Qiagen投资组合中的产品,这些产品与我们的传统产品相比更加环保。与标准面板相比,QIASEQ靶向DNA Pro面板通过切割移液步骤减少塑料废物,从而减少了需要减少68%的移液器尖端。所需的试剂数量也较低,尤其是对于索引板,它已经从两个单独的板转变为一个具有独特双索引(UDIS)的单个板。面板的稳定性有所改善,从7个月的保质期提高到12个月。
†索引引物板(QUDI-96AA,QUDI-96BA,QUDI-96CA,QUDI-96DA QUDI-96EA,QUDI-96FA,QUDI-96FA,QUDI-96GA,QUDI-96HA);每个板包含96对样品指数引物加上通用引物,每个板均与一对UDI样品指数相对应。每个索引都是一次使用。
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图3。水溶液中珠与DNA比对碎片恢复的影响。 为了确定不同的珠与DNA比对DNA片段尺寸选择的影响,将DNA尺寸梯子稀释至总体积为50 µL,并与各种体积的QIASEQ珠子从25 µL(0.5倍)到75 µL(1.5x)孵育。 在室温下DNA结合5分钟后,将管子放在磁性台上,再将溶液清除为止。 接下来,将上清液丢弃,并用200 µl 80%乙醇洗涤两次珠子。 在最终的乙醇洗涤后,除去上清液并将磁珠完全干燥。 将沉淀在6 µL缓冲液EB中洗脱。 在Agilent生物分析仪高灵敏度芯片上分析了等分试样(1 µL)以及未覆盖的尺寸梯子(参考阶梯)。 (a)片段定量。 (b)片段分布的百分比与参考相比。水溶液中珠与DNA比对碎片恢复的影响。为了确定不同的珠与DNA比对DNA片段尺寸选择的影响,将DNA尺寸梯子稀释至总体积为50 µL,并与各种体积的QIASEQ珠子从25 µL(0.5倍)到75 µL(1.5x)孵育。在室温下DNA结合5分钟后,将管子放在磁性台上,再将溶液清除为止。接下来,将上清液丢弃,并用200 µl 80%乙醇洗涤两次珠子。在最终的乙醇洗涤后,除去上清液并将磁珠完全干燥。将沉淀在6 µL缓冲液EB中洗脱。在Agilent生物分析仪高灵敏度芯片上分析了等分试样(1 µL)以及未覆盖的尺寸梯子(参考阶梯)。(a)片段定量。(b)片段分布的百分比与参考相比。
请参阅表1,以确定片段输入DNA所需的时间到所需的大小。如果输入DNA小于10 ng,请根据协议添加FX增强子,并将列出的反应时间一半用于10 ng输入DNA。例如,要产生一个从1 ng输入的片段分布,以约300 bp的含量为中心,请孵育FX反应,包括FX增强剂10分钟。制作新鲜的80%乙醇。冰上解冻试剂。一旦融化试剂,通过快速涡旋彻底混合缓冲液以避免任何局部浓度。使用前在使用前简要旋转涡旋试剂。程序热循环器。为了提高速度和便利性,可以预先编程并预先保存协议的所有孵化步骤。使用前,将QIASEQ珠平衡至室温(15–25°C)20-30分钟。涡流,然后在使用前旋转融化的适配器板。
简介 文库制备是新一代测序 (NGS) 应用的关键要求,也是测序工作流程中最昂贵的部分之一。这不仅是一个耗时的步骤,而且还可能由于操作错误导致样本丢失或输出文库 DNA 质量下降。为了减少这些问题,简化的 QIAseq FX DNA 文库协议经过优化,可在酶促碎裂后直接进行接头连接,而无需中间清理步骤。此外,简单的协议(仅包含三个步骤)可确保在 Hamilton NGS STARlet 上顺利完成高优先级样本和低通量样本数量的文库制备自动化(图 1)。
套件内容................................................................................................................ 4
图5。QIASEQ归一化器从具有不同输入DNA浓度的样品批次产生可重复的,归一化的DNA文库。为了证明这一点,我们创建了一批24个样本的e.coli DNA,范围为10至100 ng输入(CV = 64.67%)。我们使用QIASEQ FX PLUS QIASEQ归一化器(Workflow B)处理了样品,在库准备后,我们在归一化之前和之后删除了等分试样。归一化器产生的文库具有适当的测序浓度(平均1.8 ng/μl)和库浓度降低(CV从33.85%降低至13.53%)。
生物学资格结果通过准备NGS库来评估hamilton ngs Star V上的Qiagen QiaSeq FX DNA方法的性能,并使用QIASEQ FX FX DNA库套件具有重复性,以下是不同的样品Buffer EB。进行了三种生物运行;两个使用大肠杆菌gDNA(DH10B)和QIASEQ珠或Agencourt Ampure XP珠(包括1个阴性对照)和一个使用Microbial社区组成ATCC MSA-1003(20个菌株),ATTC MSA-1001(10菌株)和E. Coli Gdna(dhsec)和QH10B(DH10B)(包括12个菌株)(包括12个菌株)和QASE(dhsseq)(QIACE)(QIACE),使用了八个样品,其中有八个样品和QIASEQ珠子或QIASEQ珠子或Agencourt Ampure XP珠(包括1个阴性对照)。在运行期间施加了10分钟的碎片时间和七个PCR周期。用于文库制备的生物学资格,用定量1x DSDNA HS分析套件确定最终文库浓度。随后,八样本运行的所有库的库大小分布,