现在,您可以使用Applied Biosystems的“ QuantStudio'” 3实时PCR系统快速启动并运行,这是一种负担得起的高性能实时PCR解决方案,为各种经验的用户设计。具有交互式触摸屏界面,直观仪器软件,预取用的协议模板以及基于Web浏览器或桌面分析的选项,OuantStudio 3实时PCR系统提供了出色的性能和质量。利用Thermo Fisher Cloud的功率在您在线时随时随地保持与您的数据连接。
图 1. 数字 PCR 工作流程概述。对于 QuantStudio Absolute Q 系统,dPCR 反应混合物的制备与 qPCR 反应混合物的制备几乎相同。dPCR 和 qPCR 之间的两个主要区别是:(i) 将批量反应混合物分离成数千个单独的微反应,以及 (ii) 基于终点的检测,将微反应分类为目标的阳性或阴性,从而通过应用泊松统计实现直接目标量化。对于 QuantStudio Absolute Q 系统,仪器会自动将反应混合物分离到微室中,进行热循环并收集荧光信号,所有步骤之间都无需用户干预。
染料校准.................... ... . 103 何时进行染料校准. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ...
此快速启动指南提供了为Applied Biosystems™QuantStudio™Absolute Q™数字PCR系统准备数字PCR(DPCR)反应的简洁说明。有关准备和执行DPCR实验的详细说明,请参阅QuantStudio™Absolute Q™数字PCR安装,使用和维护指南(Pub。编号man0025621)。
图 1. 质粒 QC 工作流程说明。从过夜细菌培养物开始,可使用 KingFisher 系统纯化 DNA。为了精确测定数量,在进行后续步骤之前,通过限制性消化将纯化的 DNA 线性化。对于无液滴数字 PCR (dPCR) 定量,将线性化的 DNA 与 Applied Biosystems ™ TaqMan ™ 检测试剂混合,装入 Applied Biosystems ™ QuantStudio ™ Absolute Q ™ MAP16 板中,并在 QuantStudio Absolute Q 数字 PCR 系统上运行。为了验证质粒序列,使用 Applied Biosystems ™ BigDye ™ Terminator 循环测序试剂盒对线性化的 DNA 进行循环测序。然后在 CE 和分析之前使用 Applied Biosystems ™ BigDye XTerminator ™ 纯化试剂盒清理反应物。或者,使用 Applied Biosystems ™ BigDye ™ 直接循环测序试剂盒对 DNA 进行扩增和测序。在 CE 和分析之前,使用 BigDye XTerminator 纯化试剂盒清理这些反应。
Applied Biosystems QuantStudio TM 5 Real-Time PCR System 鑑別試驗用 5 µM 引子 F .......................................................................................... 1.0 µL 5 µM 引子 R ......................................................................................... 1.0 µL 3.3 µM 探針 P ........................................................................................................................................................................................................................................... ............................................................................................... 20.0 µL 註 3 : Real-time PCR 溶液應於冰浴中配製。 2.6.检体DNA溶液之制备2.6.1。分离菌株之dna
Pentra C400 Liaison XS Meso QuickPlex Tapestation QuantStudio 5(SNP 基因分型)ELISA 请参阅 https://www.ntnu.no/hunt/biobank 了解分析概述。样本采集所花费的时间、试剂、对照、校准器和 SNP 检测的费用是额外的,由研究人员/项目全额支付。 *接收、检查和分类提交的样本所需的额外工作每小时费率另计。
使用 Prime Script 逆转录酶(Takara,日本)进行逆转录反应。使用 FastStart Essential DNA Probes Master(瑞士罗氏公司)和 QuantStudio 3 实时 PCR 系统(赛默飞世尔科技)进行定量 PCR(qPCR)。将每个基因的 mRNA 表达水平标准化为 Actb mRNA 的值。TaqMan 引物对和探针的序列描述如下:Actb:5'-FAMCCTGGCCTCACTGTCCACCTTCCA-TAMRA-3'(探针),5'- CCTGAGCGCAAGTACTCTGTGT-3'(正向引物),5'-CTGCTTGCTGATCCACATCTG-3'(反向引物); P2ry12:5'-/56-FAM/CCATGGATG/ZEN/TGCCTGGTGTCAACA/3IABkFQ/-3'(探针),5'- CCAGTCTGCAAGTTCCACTAAC-3'(正向引物),5'-GAGAAGGTGGTATTGGCTGAG-3'(反向引物);Igf1:5'-/56-FAM/TCCGGAAGC/ZEN/AACACTCACATCCACAA/3IABkFQ/-3'(探针),5'-
图2。集成的工作流解决方案,以支持过程开发和GMP环境。Resdnaseq DPCR大肠杆菌DNA试剂盒是生物药物制造过程中用于杂质测试的集成工作流程的一部分。使用Applied Biosystems™PrepSeq™残留DNA样品制备试剂盒的Thermo Scientific™Pharma Flex themo Scientific™Pharma Flex™Flex 96深孔磁性颗粒处理器可确保残留大肠杆菌DNA的高恢复,甚至减少劳动力减少,甚至来自最复杂的样品矩阵的误差较小。使用Applied Biosystems™QuantStudio™Absolute Q™软件简化了数据分析,该软件提供了准确的定量和安全性,审核和电子签名(SAE)功能,以启用21 CFR Part 11的合规性。
图3。集成的工作流解决方案,以支持过程开发和GMP环境。Resdnaseq定量HEK293 DNA试剂盒是生物制药制造过程中杂质和污染物测试的集成工作流程的一部分。使用Thermo Scientific™Pharma thema Flex™Flex 96深孔磁性粒子处理器与Applied Biosystems™PrepSeq™残留DNA样品制备套件有助于确保HEK293残留DNA的高恢复能力减少,而误差减少。Pharma Fisher Flex 96深孔磁性颗粒处理器可以一式三份处理多达24个样品,而使用手动方法一式三份的三个样本。RESDNASEQ试剂盒已在Applied Biosystems™7500快速实时PCR系统和QuantStudio™5实时PCR系统上进行了验证。使用Applied Biosystems™Accuseq™实时PCR检测软件简化了数据分析,该软件提供了准确的定量和安全性,审核和电子签名功能,以帮助启用21 CFR Part 11 Comporiance。