R57

A Part A1-牛津大学申请发行GMO（参考24/R57/01）

引入的构建体是通过CRISPR/CAS9系统诱导基因靶向敲除突变体的质粒载体。根据Smedley等人组装该质粒载体。，2021通过使用金门（GG，类型IIS限制酶）模块化克隆（MOCLO）组件。用于针对每个亚基因组中感兴趣基因的三个同源副本（a，b和d），在三个亚基因组的第一个外显子中选择了两个单个引导RNA（SGRNA）序列（sgrNA）序列（guide_2和gude_3）。如Smedley等人所述，使用WheatCrispr工具用于选择SGRNA。，2021。考虑了预测的目标和脱靶切割效率；预计SGRNA脱离目标得分的值为“ 0”，相当于根据WheatCrispr工具在其他遗传或基因间区域中的“无预测命中”。