处理并处理所有用于执行测定法的生物样品,试剂和材料,就好像它们能够传递感染剂一样。样品必须专门用于某些类型的分析。必须在层流罩下处理样品。。用于处理样品的移液器必须专门用于此特定目的。移液器必须为正配置类型,或与气溶胶过滤器尖端一起使用。所用的尖端必须是无菌的,没有DNASE和RNass,没有DNA和RNA。必须在层流罩下处理试剂。必须以一个可以在一次会话中使用的方式制备放大所需的试剂。用于处理试剂的移液器必须专门用于此特定目的。移液器必须为正配置类型,或与气溶胶过滤器尖端一起使用。所用的尖端必须是无菌的,没有DNASE和RNass,没有DNA和RNA。避免直接与用于进行测定的生物样品试剂和材料接触。戴无粉手术手套。穿防护服(工作服和个人
描述RNase抑制剂(不含甘油)是一种重组蛋白,通过以1:1的比例非共价结合来抑制不同的RNase(a,b,c)。在10 14 m的缔合常数中,RNase抑制剂(不含甘油)在RNass存在是潜在问题的任何应用中都是有用的。无甘油制剂确保RNase抑制剂(无甘油)与冻干格式的兼容性。
核糖核酸酶(RNase)无处不在,可以在许多方面引入实验:例如,在RNA隔离期间的共纯化,裸手和移液器尖端的持久性。这种RNase污染通常不会引起人们的注意。核糖防护RNase抑制剂非常适合对RNA敏感的应用,例如RT-QPCR,因为即使少量RNase也可能不利于最终的实验结果。核糖防护酶抑制剂是一种高效的抑制剂(图1)一系列真核RNass,没有抑制聚合酶或逆转录酶活性(图2),因此可以用于cDNA合成或一步RT-QPCR反应中。
•细胞裂解和核酸酶灭活后,可以通过过滤或离心轻松从裂解物中除去细胞碎片。•接下来是去除蛋白质和RNA。•通常,通过用蛋白水解酶(例如蛋白酶K)消化大多数蛋白质,该蛋白酶K具有活性,而蛋白酶K具有广泛的天然蛋白质。•大部分RNA被切开时释放的RNass切割。•DNA提取物中RNA的存在不是主要问题,因为这不会干扰PCR或限制消化。•在某些情况下,重要的是要分离不含RNA的DNA,以便能够使用分光光度计准确地量化DNA产量。•浓缩DNA最广泛使用的方法是用乙醇沉淀。•用酒精(通常是乙醇或异丙醇)沉淀DNA。由于DNA不溶于这些酒精,因此会聚集在一起,在离心时给出颗粒。此步骤还去除了酒精可溶性盐
注意6·通过添加能够破坏二硫键键的还原剂(例如ß-甲醇(ß -me)或二硫代硫醇(DTT))的减少剂,从而污染了污染的RNass。为了促进二硫键的还原,使用前,每1 mL缓冲液DRP加入10 µLß -ME。添加ß -ME后,DRP缓冲液保持稳定1个月。使用前,每1 ml缓冲液在使用前,在RNase无rNase无水中添加10 µl [1 m] DTT的毒性但更昂贵的替代品。dtt在缓冲区DRP中不稳定,因此不得存储DTT-供应的DRP缓冲液等分试样。[1 M] DTT储备溶液在RNase无水酶中的工作等分试样必须存储在-20°C下,以保持稳定性。设置[1 M] DTT储备溶液(MW = 154.25 g mol -1),溶解1.54 g DTT每10 ml RNase无rNase无水,并将其存储在等分试样中以进行一次使用。
对饮食microRNA的营养特性进行调查是一个新兴的研究主题,需要从食品科学技术的角度来解决。 在过去的几年中,体外,体内和临床研究表明,水果和蔬菜从宿主细胞mRNA中的microRNA潜力。 1这些发现提出了植物微NA在转录后水平上的跨王国调节作用,该效应可能调节与人类疾病相关的途径。 然而,尽管有希望的结果表明,饮食中的microRNA可以被视为新的营养素,但在以下各节中讨论了不同的研究主题,需要解决我们当前的知识,然后再对其消费进行现实建议,以预防和/或治疗慢性疾病(图1)。 ■膳食microRNA:人类吸收它们吗? 考虑人类可以吸收植物microRNA的跨国调节时,最早的争议之一就是。 在这方面,最近的动物模型研究发现,以SIDT1依赖性机制可以在胃中吸收自由形式的植物microRNA。 2此外,已经证明,唾液中存在的RNass在口腔中的摄入的microRNA的消化开始,并且食物基质在咀嚼过程中通过用食物成分将microRNA封装在保护其降解方面起着关键作用。 3水果和蔬菜中的大多数microRNA都包含在外泌体(例如纳米颗粒)中,这些纳米颗粒也可保护microRNA免受口腔中RNase的降解。对饮食microRNA的营养特性进行调查是一个新兴的研究主题,需要从食品科学技术的角度来解决。在过去的几年中,体外,体内和临床研究表明,水果和蔬菜从宿主细胞mRNA中的microRNA潜力。1这些发现提出了植物微NA在转录后水平上的跨王国调节作用,该效应可能调节与人类疾病相关的途径。然而,尽管有希望的结果表明,饮食中的microRNA可以被视为新的营养素,但在以下各节中讨论了不同的研究主题,需要解决我们当前的知识,然后再对其消费进行现实建议,以预防和/或治疗慢性疾病(图1)。■膳食microRNA:人类吸收它们吗?考虑人类可以吸收植物microRNA的跨国调节时,最早的争议之一就是。在这方面,最近的动物模型研究发现,以SIDT1依赖性机制可以在胃中吸收自由形式的植物microRNA。2此外,已经证明,唾液中存在的RNass在口腔中的摄入的microRNA的消化开始,并且食物基质在咀嚼过程中通过用食物成分将microRNA封装在保护其降解方面起着关键作用。3水果和蔬菜中的大多数microRNA都包含在外泌体(例如纳米颗粒)中,这些纳米颗粒也可保护microRNA免受口腔中RNase的降解。的确,根据人类食用植物外泌体的一项研究的报道,证明外泌体中包含的microRNA到达大肠中,并被肠道微生物群吸收,从而通过益生菌细菌中的不同基因结合了微生物组,从而改变了微生物组(图1)。此外,这种由生姜的外泌体引起的微生物组的修饰产生了小鼠结肠炎的改善,显示了药理学活性。进一步的研究应集中于确定水果和蔬菜所需的消耗,以获得目标组织中膳食microRNA的浓度,以发挥所需的药理作用。
