在德克萨斯农工大学(Div>),Rathore博士主要专注于棉花,但也与其他农作物(例如高粱,大米和马铃薯)合作。 当时,棉花高度顽固地是转变和再生,超出了公共部门实验室的能力。 Rathore博士花了大量时间和精力来理解生成转基因棉花的各个方面,最终制定和发布详细的方案,以使棉花生物技术社区受益。 他的实验室也是第一个证明CRISPR/CAS9系统在棉花基因组中靶向敲除的实用性。 此外,他的团队还设计了棉花植物,以抵抗,耐受或胜过各种生物胁迫(线虫,真菌疾病,虫害,杂草)和非生物胁迫(干旱)。在德克萨斯农工大学(Div>),Rathore博士主要专注于棉花,但也与其他农作物(例如高粱,大米和马铃薯)合作。当时,棉花高度顽固地是转变和再生,超出了公共部门实验室的能力。Rathore博士花了大量时间和精力来理解生成转基因棉花的各个方面,最终制定和发布详细的方案,以使棉花生物技术社区受益。他的实验室也是第一个证明CRISPR/CAS9系统在棉花基因组中靶向敲除的实用性。此外,他的团队还设计了棉花植物,以抵抗,耐受或胜过各种生物胁迫(线虫,真菌疾病,虫害,杂草)和非生物胁迫(干旱)。
RNA 干扰 (RNAi) 仍然是一种强大的技术,可通过 mRNA 降解来有针对性地减少基因表达。该技术适用于多种生物,在物种丰富的鞘翅目 (甲虫) 中非常有效。在这里,我们总结了在新生物中开发该技术的必要步骤,并说明了它在水生潜水甲虫 Thermonectus marmoratus 的不同发育阶段中的应用。可以通过针对已知基因组的近亲或从头组装转录组来经济高效地获得目标基因序列。候选基因克隆利用特定的克隆载体 (pCR4-TOPO 质粒),该载体允许使用单个通用引物为任何基因合成双链 RNA (dsRNA)。合成的 dsRNA 可以注射到胚胎中用于早期发育过程,也可以注射到幼虫中用于后期发育过程。然后,我们说明如何使用琼脂糖固定将 RNAi 注射到水生幼虫中。为了演示该技术,我们提供了几个 RNAi 实验示例,生成具有预测表型的特定敲低。具体来说,晒黑基因 laccase2 的 RNAi 会导致幼虫和成虫的角质层变浅,而眼色素沉着基因 white 的 RNAi 会导致眼管变浅/缺乏色素沉着。此外,关键晶状体蛋白的敲低会导致幼虫出现视力缺陷和捕猎能力下降。综合起来,这些结果体现了 RNAi 作为一种工具的强大功能,可用于研究仅具有转录组数据库的生物体的形态模式和行为特征。