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Thermo Fisher Scientific Inc.诉Brian Douglass ...
Thermo Fisher的标准不竞争协议在范围上如此广泛，以至于它可以在Bar Douglass的脸上受到Repligen的工作。IT声称可以禁止道格拉斯（Douglass）为开发，制造或出售的任何公司都以任何方式“类似”的产品工作，即使没有任何“相似”的产品，即使没有任何表明这些产品实际上与Thermo Fisher的市场竞争。，它还声称要为任何开发，制造或销售“与Thermo Fisher竞争”的公司工作的公司工作，即使（在这种情况下（在这种情况下），竞争产品是由公司的另一部分和Douglass处理的产品，而Douglass在他在Thermo Fisher的工作后的第一个2个月内与它们无关。
使用在线 UV-Vis 分析和 PAT 驱动的 UF/DF 系统控制您的 AAV 滴度
通过在线 UV-VIS 分析和 PAT 驱动的 UF/DF 系统克服 TFF 中的挑战 质量依赖型 TFF 系统带来的最常见挑战包括过程碎片化、测量结果不稳定以及人为失误的风险很高。解决这些挑战需要采用新颖的方法，并具备实时在线产品样品和测试、自动化仪表、分析检测、连续生物处理和验证服务等功能。两种现有的 Repligen 产品 — KrosFlo ® KR2i 系统和 CTech™ FlowVPX ® 系统 — 可以成功结合使用以实现这些目标并应对 TFF 系统的挑战。KrosFlo KR2i TFF 系统是一种自动化的实验室规模 TFF 系统，用于下游应用，而 CTech FlowVPX 系统是一种在线 UV-Vis 光谱仪，具有改变光程的独特能力。它们共同构成了“实时过程管理”（RPM™）系统，该系统通过浓度测量控制为UF/DF过程提供过程管理。
投资者演示
本演讲包含联邦证券法的含义内的前瞻性陈述。在本演讲中的陈述不是严格的历史陈述，包括有关Repligen全年2024年估计财务结果的明示或暗示的陈述或指导，未来的财务绩效和其他词语所确定的词语“预期”，“预期”，“指导”，“目标”或类似的表达方式是前瞻性的陈述。这些陈述可能会受到风险和不确定性的影响，这可能会导致我们的计划改变或实际结果与预期的结果有实质性不同。特别是，我们控制之外的不可预见的事件可能会对未来的结果产生不利影响。在我们向美国证券交易委员会提交的报告中讨论了有关这些因素的其他信息，包括最近的8-SK，我们最近的10K表格年度报告以及我们对表格10Q表格的最新季度报告，所有这些报告均可在我们的网站上找到。本演示文稿中的前瞻性陈述反映了管理层当前的观点，并可能由于新信息，未来事件或其他方式而过时。我们不得更新此类前瞻性陈述，以反映本日期之后发生的事件或情况的更改，除非法律要求。本演讲中包含的行业和市场数据基于管理层自己的估计，独立出版物，政府出版物，市场研究公司或其他已发表的独立资源的报告，在每种情况下，管理层都认为是合理的估计。尽管我们认为这些来源是可靠的，但我们尚未独立验证信息。本演讲揭示了某些未根据公认的会计原则或GAAP制定的财务指标。补充强烈鼓励投资者审查我们的合并财务报表，并全面公开提交报告，并警告投资者，即即使使用类似的术语来识别此类措施，此处使用的非GAAP措施也可能与其他公司使用的类似措施有所不同。
电子补充信息β-内酰胺酶...
7-氨基-3-氯甲基-3-头孢烯-4-羧酸对甲氧基苄酯盐酸盐 (ACLE) 购自 AK Scientific (加利福尼亚州联合城)。4-硝基苯硫酚 (NBT) 和 3-马来酰亚胺基丙酸购自 TCI Chemicals (日本东京)。头孢噻吩购自 P212121, LLC (马萨诸塞州波士顿)。氘代二甲基亚砜 (DMSO-d 6 ) 购自 Cambridge Isotope Laboratories (马萨诸塞州安多弗)。三乙胺 (TEA)、4-甲基吗啉 (NMM)、无水二氯甲烷 (DCM)、无水二甲基甲酰胺 (DMF)、己烷、乙醚、乙酸乙酯、薄层色谱法 (TLC) 硅胶 60 玻璃板、无水磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钠、CENTA、二甲基亚砜 (DMSO)、三氟乙酸 (TFA)、苯甲醚、硫醇官能化的 4 臂聚乙二醇 (4 臂-PEG-SH; 20 kDa)、来自蜡样芽孢杆菌的 β L (β L-BC; cat.# P0389, 28 kDa, 2817.8 U/mg 蛋白, 4.72% 蛋白)、来自铜绿假单胞菌的 β L (β L-PA; cat.# L6170, 30 kDa, 1080 U/mg 蛋白，1% 蛋白）、来自阴沟肠杆菌的 β L（β L-EC；目录号 P4524，20-26 kDa，0.37 U/mg 蛋白，56.45% 蛋白）、来自溶组织梭菌的胶原酶、磷酸盐缓冲盐水 (PBS)、硝酸钠、阳离子调整的 M¨uller-Hinton 肉汤 (CMHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸、1-[双 (二甲氨基) 亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶 3-氧化物六氟磷酸盐 (HATU)、N,N-二异丙基乙胺 (DIPEA) 和盐酸 (HCl) 均购自 Millipore Sigma（密苏里州圣路易斯）。甲醇、硅胶、胰蛋白酶大豆肉汤 (TSB) 和 SYLGARD 184 硅胶弹性体试剂盒购自 Thermo Fisher Scientific (马萨诸塞州沃尔瑟姆)。甲氧基聚乙二醇硫醇 (mPEG-硫醇；1.7 kDa) 购自 Laysan Bio, Inc. (阿拉巴马州阿拉伯)。金黄色葡萄球菌菌株 25923 和 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) MW2、蜡样芽孢杆菌 13061、大肠杆菌 25922 和阴沟肠杆菌 13047 购自 ATCC (弗吉尼亚州马纳萨斯)。铜绿假单胞菌 PA01 由沃尔特里德陆军研究所 (马里兰州银泉) 慷慨捐赠。大肠杆菌 DH5-α 购自 Life Technologies (加利福尼亚州卡尔斯巴德)。双马来酰亚胺-PEG 3（mal-PEG-mal，494.5 Da）购自 BroadPharm（加利福尼亚州圣地亚哥）。Repligen Biotech 纤维素酯 500-1000 Da 分子量截留 (MWCO) 透析管购自 Spectrum Labs Inc.（加利福尼亚州兰乔多明格斯）。超高纯度氮气（99.999%）购自 Airgas（罗德岛州沃里克）。所有实验均采用超纯去离子水（18.2 MΩ·cm，Millipore Sigma，马萨诸塞州比勒里卡）。本研究中提到的室温 (RT) 约为 23 ◦ C。
在轨道上生产病毒：轨道震荡病毒疫苗制造的最新进展
关键词：轨道式振荡生物反应器 (OSB)、禽类 AGE1.CR.pIX 悬浮细胞、流感病毒、动物疱疹病毒、腺相关病毒 (AAV)、人胚胎肾 (HEK) 293 细胞、一次性灌注至高细胞密度、制造。悬浮细胞的预培养在摇瓶中成功完成。特别是新开发的设计细胞在高摇动频率下在摇瓶中传代多达 100 次，然后完美适应在具有 pH 控制和最大氧气供应（通常高于 80% pO 2 ）的 CO 2 培养箱中生长。当它们随后被转移到搅拌槽生物反应器进行扩大时，特定细胞生长率通常较低，并且细胞对通过酸/碱添加和由于潜水器放气（气泡）而产生的剪切应力的 pH 控制变得敏感。禽类 AGE1.CR.pIX 和人类 HEK 293 细胞也出现了这种情况。为了避免这些问题，评估了在振荡模式下的扩大规模。这里我们介绍了 SB10-X OSB 生物反应器在袋子设计和控制单元改进方面的最新进展。引入了一种新的控制策略，从而可以更快、更精确地控制 pH 和 DO。此外，还优化了灌注袋，以便可以轻松连接一个或两个 TFF ATF 系统。这两项发展都带来了更强大的 SB10-X 系统，可以轻松执行批量、补料分批或灌注运行。在 10 L 一次性标准袋中，在化学定义的培养基 CD-U3（Biochrom-Merck，德国）中以 70 rpm 的摇动频率培养 Avian AGE1.CR.pIX 细胞（ProBioGen AG，德国）。对于灌注，使用了交替切向流系统（ATF2，Repligen，500 kDa 截止值）。感染流感病毒 A/PR/8/34 (H1N1) 后，MOI 为 0.001，工作体积从 5 升增加到 9 升，同时保持灌注。使用不同的填充体积评估 25 和 50 x 10 6 细胞/毫升的细胞浓度，以了解顶部空间通气的影响。总体而言，可以获得 3500 个病毒体/细胞的非常高的细胞特异性病毒产量，导致 HA 滴度高达 3.7 log 10（HA 单位/100 µL），感染滴度高达 8.8 x 10 9 TCID 50 /毫升。基于重组 AAV 的载体不仅是基因治疗目的的合适载体，而且还能够诱导针对各种抗原的强烈、主要是细胞的免疫反应。到目前为止，AAV 生产主要使用瞬时转染的贴壁人类 HEK 293 细胞（例如在细胞堆栈中），这对大规模 AAV 生产来说是一个重大挑战。在这里，我们测试了内部适应悬浮生长的 HEK 293 细胞，以通过一种允许简单扩大规模的过程生产 AAV9 的能力。因此，HEK 293 悬浮细胞在 5 L 化学定义的无血清培养基中培养，细胞密度为 1 x 10 6 个细胞/毫升，使用 SB10-X OSB 生物反应器，摇动频率为 65 rpm。24 小时后以 70 rpm 的振荡频率进行聚乙烯亚胺 (PEI) 介导的三重转染（包括 GFP 报告基因）。最后，转染后 48 小时，收获细胞和上清液进行 AAV 分离，并测定裂解物中 DNase I 抗性载体颗粒 (DRP) 的数量。由于转染效率高（基于 GFP 报告基因的转染率 >90%）且 SB10-X 系统中整个批处理过程性能良好，因此达到了 1.4 x 10 12 DRP/ml 或 7 x 10 15 DRP/批（5 L）范围内的制造相关 AAV 滴度。总之，在轨道上生产病毒可能是创新疫苗制造的一种有吸引力的替代方案。