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重组抗体工程指南 - 白皮书
抗体工程技术出现后，研究人员开始重组产生和产生抗体片段。开发了三个主要碎片，成为许多替代格式的基础。首先，重组Fab是酶消化产生的FAB的一种干净而定义的替代品。第二，单链变量片段（SCFV）是IgG的最小稳定且功能齐全的形式。它由可变的重域和可变光域组成，并在两者之间具有灵活的接头。最后，单个结构域抗体（DAB）缺乏轻链，代表大约15 kDa的最小结合域。单域抗体在骆驼和软骨鱼（例如鲨鱼）中发现，与传统的鼠和人类抗体相比，它们含有更长的CDR环。
遗传学
Cas，CRISPR 相关；CRISPR，成簇的规律间隔的短回文重复序列；CRISPRa，CRISPR 介导的转录激活；CRISPRi，CRISPR 介导的转录抑制；crRNA，CRISPR RNA；crRNP，CRISPR 核糖核蛋白；dCas9，核酸酶失活 Cas9；DSB，双链断裂；dsDNA，双链 DNA；dsODN，双链寡脱氧核苷酸；gRNA，向导 RNA；H3K27ac，组蛋白 H3 赖氨酸 27 乙酰化；H3K4me1，组蛋白 H3 赖氨酸 4 单甲基化；LAM-PCR，线性扩增介导的 PCR；LSD1，赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶 1；MCP，MS2 外壳蛋白；MOI，感染复数； p65AD，核因子-κB反式激活亚基激活结构域；PAM，原型间隔区相邻基序；RNAi，RNA干扰；scFV，单链可变片段；sfGFP，超折叠GFP；sgRNA，单向导RNA；ssRNA，单链RNA。
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Idecabtagene viclecuel 是一种在研的、针对 B 细胞成熟抗原 (BCMA) 的转基因自体嵌合抗原受体 (CAR) T 细胞免疫疗法，预计将用于治疗复发或难治 (RR) 多发性骨髓瘤 (MM) (RRMM) 成年患者，这些患者既往接受过至少三种疗法，包括免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂 (PI) 和抗 CD38 抗体（例如，三类暴露）。idecabtagene vicleucel CAR 由鼠胞外单链可变片段 (scFv)-BCMA 靶向结构域、CD8 阿尔法 (α) 铰链和跨膜结构域、CD3-zeta (ζ) T 细胞活化结构域和 4-1BB (CD137) 共刺激结构域组成。这种结构是 idecabtagene vicleucel 所独有的；没有其他 CAR T 细胞疗法由这些靶向、铰链和跨膜、激活和共刺激结构域的组合组成。单剂量 idecabtagene vicleucel 含有 150 至 540 x 10 6 个 CAR+ T 细胞的细胞悬浮液，目标剂量为 450 × 10 6 个 CAR+ 活 T 细胞。
用于开发下一代技术的数字平台...
抗体药物偶联物 (ADC) 使用抗体实现将治疗药物靶向递送至特定细胞群和组织。在肿瘤学中，ADC 用于选择性消除肿瘤，同时减少与常规化疗相关的脱靶效应。在这里，我们介绍了 Genedata Biologics ® 如何支持和加速从抗体筛选和工程到抗体表达、纯化、药物偶联以及 ADC 特定分析（例如 DAR、药物分布、同质性）报告的整个 ADC 发现过程。该平台能够自动生成、注册和跟踪大量 ADC 候选物，并将分析和功能分析的结果整合到一个集成系统中，从而大幅提高 ADC 发现过程的吞吐量和效率。该系统还支持其他下一代抗原靶向偶联物，包括双特异性 ADC、替代支架（例如 scFV、DARPins）和新型有效载荷（例如寡核苷酸、抗生素），以加速这些新技术的应用。
癌症免疫疗法海报-BD Biosciences
αβ-TCR，αβT细胞受体； B-所有，B细胞急性淋巴细胞白血病；汽车，嵌合抗原受体； CAR-T，表达T细胞的嵌合抗原受体； CD19 4-1BBZ汽车，CD19 4-1BB Zeta嵌合抗原受体； CD19 CD28Z汽车，CD19 CD28 Zeta嵌合抗原受体； CD3Z，CD3 Zeta; CLL，慢性淋巴细胞性白血病； DLBCL，使用大B细胞淋巴瘤； γδT细胞，伽马三角细胞； GM-CSF，粒细胞 - 巨噬细胞群刺激因子； GMP，良好的制造实践； HLA，人白细胞抗原； IFN-γ，干扰素伽玛； IL，白介素（例如IL-2白介素2）; inkt，不变的天然杀手T细胞； IPSC，诱导多能干细胞； MHC，主要的组织相容性复合物； NKG2D，天然杀手级2d； PD-1，程序性细胞死亡蛋白1； PD-L1，程序性细胞死亡配体1; SCFV，单链片段变量； TCR + T，转基因αβ-TCR表达T细胞； TNF，肿瘤坏死因子； VH，可变重链； VL，可变轻链
新型的双特异性抗体用于滑瘤性关节炎中抗TNF治疗的滑膜特异性靶标
生物药物，尤其是抗TNF，被认为是类风湿关节炎中的金标准疗法。但是，不均匀的效率，感染的发生率和高成本是主要问题。新型组织特异性剂可能会克服全身给药的当前局限性，从而提高效力和安全性。We developed a bispecific antibody (BsAb), combining human arthritic joint targeting, via the synovial-specific single-chain variable fragment (scFv)-A7 antibody, and TNF α neutralization, via the scFv-anti-TNF α of adalimumab, with the binding/blocking capacity comparable to adalimumab -immunoglobulin G （IgG）。BSAB的组织靶向能力在体外人类关节炎和异种移植物严重的合并合并免疫（SCID）小鼠模型中确定。峰值移植物积累在注射后的48小时内，持续水平超过Adalimumab-igG，持续7天，并增加了治疗作用，有效地降低了组织细胞性，并且与标准治疗相比，有效的效果和势力较高。这项研究提供了能够递送药物的BSAB的第一个描述，特定于疾病组织，并有很强的证据表明对人类关节炎滑膜的治疗作用改善，并应用于其他现有生物制剂。
HUSCFV对胆管癌细胞的结合特异性
卡培他滨和奥沙利铂。3化学疗法的挑战是对吉西他滨和顺铂的耐药性，吉西他滨和顺铂是转移性CCA的广泛使用的化学治疗药物。一些患者由于癌细胞突变而产生了对这些药物的抗性。4粘蛋白型和混合型CCA对化学疗法和分子靶向剂的反应不同。这一发现强调了基于CCA的特定亚型来裁缝策略以改善患者预后的重要性。5免疫疗法已成为包括CCA在内的癌症治疗中的一种治疗方式。6抗体和抗体片段，例如片段抗原结合（FAB），单链可变片段（SCFV）和可变重链（VH），在癌症免疫疗法中起着至关重要的作用。这些分子通过募集免疫成分或与细胞毒性药物链接而直接靶向并破坏癌细胞。7一些抗体，例如ipilimumab，恢复了表达免疫检查点抑制剂的耗尽的细胞，特别是T-淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）和程序性死亡-1（PD-1），增强了对癌症的免疫反应。8抗体片段也充当T细胞或NK细胞中嵌合抗原受体的成分。9,10开发有效免疫疗法的主要挑战是特异性，因为肿瘤抗原通常源自形成异常或经历突变的自我抗原。11,12发现对癌细胞的抗体发现，而没有结合或与正常细胞结合，将最小化正常细胞的副作用，并具有高能力发展为有效的治疗工具。
通过结合 T 细胞结合双特异性抗体克服白血病异质性
摘要 背景 白血病约占人类所有癌症的 5%。尽管治疗方法取得了进展，但仍有相当多的患者死于该疾病。尽管进行了强化化疗或靶向治疗，但几种白血病亚型本质上对治疗的抵抗力更强。 方法 在这里，我们描述了基于人源化 IgG 框架使用 IgG(L)-scFv 格式针对急性淋巴细胞白血病 (ALL) 和急性髓细胞白血病 (AML) 上表达的两个靶点生成 T 细胞接合 (CD3) 双特异性抗体 (BsAb)。 结果 每种 BsAb 在体外和异种移植模型中均介导针对 ALL (CD19) 和 AML (CD33) 的强效抗白血病作用。重要的是，CD19 特异性 BsAb (BC250) 对血源性扩散有效，可防止携带 ALL 和伯基特淋巴瘤异种移植的小鼠转移到肝脏和肾脏。根据肿瘤生物发光和小鼠存活率的测量，BC250 比美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准的 BsAb blinatumomab 更有效，可对抗体内所有异种移植瘤。此外，在混合表型急性白血病（双表型和双系白血病）的两种异种移植模型中，CD19 和 CD33 BsAb 的组合远优于单独使用任何一种 BsAb 的单一疗法。结论这些白血病特异性 BsAb 的选择性组合提供了在基于抗体的 T 细胞驱动免疫治疗的现代时代克服肿瘤异质性或克隆逃逸的潜力。
下一代癌症诊断和治疗
近 50 年前，“第一代”治疗性抗体由鼠源单克隆抗体 (mAb) 组成，目前美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准了 30 多种 mAb 用于临床。尽管具有临床潜力，但它们的免疫原性和较大分子量（约 150 kDa）成为其疗效的主要障碍 (1)。这促使人们改进“第二代”，利用抗体片段，例如抗原结合片段 (Fab，约 50kDa) 和单链可变片段 (scFv，约 30kDa)；然而，这种方法仍然受到血清半衰期短和聚集诱导的免疫原性的限制 (2)。在骆驼科动物中偶然发现重链抗体 (HcAbs) 引发了最近一波“第三代”抗体浪潮。与传统 mAb 相比，HcAb 仅由两条重链组成，单个可变结构域 (VHH，约 15kDa) 作为抗原结合区。这些纳米级 VHH 被称为“纳米抗体”，分离后可保留完整的抗原结合潜力，使其成为最小的天然抗原结合片段 (3)。纳米抗体促进了商业公司的发展，并已用于生物传感、亲和捕获和蛋白质结晶等应用；然而，它们最显著的潜力在于治疗，尤其是癌症治疗。本综述重点介绍了纳米抗体如何增强各种癌症诊断工具和疗法，包括单独使用和协同作用。最后，本文概述了癌症临床试验中的纳米抗体，分析了障碍，并提出了加快其作为转化癌症疗法实施的潜在策略。
Yescarta：INN-axicabtagene ciloleucel
作用方式概述：Axicabtagene ciloleucel 是一种自体治疗，通过逆转录病毒转导编码抗 CD19 CAR 的构建体，收获患者自身的 T 细胞并在体外进行基因改造。由于 axicabtagene ciloleucel 是一种基于自体细胞的产品，因此它没有明确的化学性质。用于生产 axicabtagene ciloleucel 的抗 CD19 CAR 构建体包含 3 个区域：1) 源自 FMC63 鼠杂交瘤的抗人 CD19 scFv；2) 人 CD28 的部分胞外结构域和完整的跨膜和胞内信号传导结构域；3) 人 CD3-ζ 分子的细胞质部分，包括其胞内信号传导结构域。 CAR 与 CD19 + 靶细胞结合后，CD3ζ 结构域激活下游信号级联，导致 T 细胞活化、增殖并获得效应功能（例如细胞毒性）。CD28 的胞内信号结构域提供共刺激信号，与主要 CD3ζ 信号协同作用以增强 T 细胞功能，包括 IL2 产生 { Finney 1998 }。这些信号共同刺激 CAR T 细胞增殖并直接杀死表达 CD19 的靶细胞。此外，活化的 T 细胞会分泌细胞因子、趋化因子和其他分子，这些分子可以募集和激活额外的抗肿瘤免疫细胞 { Restifo 2012 }。图 I.1 部分显示了描述 axicabtagene ciloleucel 构建体和产品作用方式的示意图。