1。将多达200毫克的凳子样品添加到珠管中,然后将管子放在冰上。-Note:如果样品干燥,则将样本量降低至≤50mg。 - 注意:如果样品是液体,则将200 µL样品添加到珠管中。2。将300 µL的SDE1缓冲液和20 µL蛋白酶K加入样品。以最大速度涡旋5分钟。在孵育过程中将样品混合物在60°C下孵育20分钟,每5分钟涡流一次。- 确保粪便样品完全匀浆。- 为了从革兰氏阳性细菌中分离DNA,需要在蛋白酶K裂解后在95°C下额外孵育5分钟。3。简要旋转管以去除盖子内部的滴。4。冷却样品混合物,并加入100 µL SDE2缓冲液。通过涡旋充分混合并在冰上孵育样品混合物5分钟。5。全速离心5分钟。6。小心地将上清液转移到1.5 mL微输出管(未提供)并丢弃凳子颗粒。- 避免移除任何碎屑和颗粒。7。加入200 µL的SDE3缓冲液。通过涡旋充分混合并在室温下孵育样品混合物2分钟。- 注:SDE3缓冲液必须在每次使用前都会急剧涡旋。- 切断1 ml尖端的末端,以使移动SDE3缓冲区更容易。8。全速离心2分钟。9。小心地将250 µL上清液转移到1.5 mL微输出管(未提供)。- 避免移除任何碎屑和颗粒。
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