XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemSPLICE
病例报告：EDA 基因剪接位点突变导致少汗性外胚层发育不良，出现特应性皮炎样皮肤表现
少汗性外胚层发育不良 (HED) 是一种罕见疾病。患有 HED 的患者从小就表现出头发稀疏、牙齿发育不良和无汗症，以及特应性皮炎样皮肤表现。我们报告了一名 20 岁的男性 HED 患者，他患有特应性皮炎样皮肤，经度匹鲁单抗成功治疗。基因分析发现 EDA 基因中存在剪接突变，NG_009809.2 (NM_001399.5):c.793 + 3A > C r.742_ 793del p.Pro248Ilefs Ter15，这是以前从未报道过的。该患者因全身瘙痒加剧而到我们科室就诊。根据皮疹的分布，患者被诊断为特应性皮炎并开始使用度匹鲁单抗。治疗第三个月皮疹减轻。dupilumab 在治疗与 Th2 免疫相关的遗传性皮肤病方面的潜力是已知的。尽管皮疹与 HED 的特应性皮炎样皮肤表现或独立的特应性皮炎有关尚不清楚，但 dupilumab 可能是治疗伴有特应性皮炎皮肤的 HED 的候选药物。
与纤连蛋白抗体的抗extra结构域B剪接变体 - 与检查点BL
摘要◥额外的纤维蛋白（EDBÞFN）的额外结构域B剪接变体是通过肿瘤相关的纤维细胞沉积的细胞外基质蛋白（ECM），与肿瘤生长，血管生成和入侵有关。我们假设EDBÞFn是使用抗体 - 药物缀合物（ADC）进行治疗干预的安全且丰富的靶标。我们描述了EDB fn（EDB-ADC）的ADC特定的生成，药理学，作用机理和安全性。edbÞFn在胰腺，非 - 小细胞肺（NSCLC），乳房，卵巢，头颈癌的基质中广泛表达，而在正常组织中受到限制。在患者衍生的异种移植物（PDX），细胞系异种移植（CLX）和小鼠合成性肿瘤模型中，EDB-ADC与Auristatin aur0101结合到Auristatin aur0101，通过现场特异性技术显示出有效的抗肿瘤生长抑制。在
使用CRISPR- ...
真核细胞中当前的基因编辑方法仅限于单基碱基编辑或小的DNA插入和缺失，并且在大型DNA货物的交付时仍会受到意外永久效应和重大挑战的影响。在这里，我们描述了剪接编辑，这是一个可通过可编程插入或替换大RNA段来校正基因转录本的可推广平台。通过将CRISPR介导的RNA靶向与内源性细胞RNA刺激机制相结合，剪接编辑可以有效，精确和可编程的大规模编辑基因靶标，而无需DNA裂解或刺激。RNA测序和剪接蛋白质产物的测量确认，剪接编辑可实现有效的特定靶向RNA和蛋白质校正。我们表明，基于在这项工作中发现和表征的新型微型RNA靶向CRISPR-CAS系统的剪接编辑器可以包装以有效地传递到人类细胞，并影响多个目标和细胞系之间的不同类型的编辑。通过在单个可逆步骤中同时编辑数千个基础，剪接编辑可以扩大具有较大等位基因多样性的单基因疾病的可治疗疾病人群，而无需永久的DNA编辑效应。
LDS 2.5
最快的周期时间基于标准融合剪接，光纤锥度和裂解周期时间平均。在<0.01度分辨率的前对齐，光纤与光纤对准，端盖剪接，锥形玻璃剪接和光纤组合仪的<0.01度分辨率对齐，光纤与光纤排列，光纤纤维对齐，光纤上的自动对齐。使用5MP视觉系统的正交视图，具有远伦镜头，可提供4.2毫米宽x 3.5毫米高的视野，每秒最多20帧。实时过程通过完整分辨率的视频成像对熔融光纤玻璃进行全面视频成像，而不会过度暴露或过度暴露。可选的原位切肉刀可支持从20UM到500UM的光纤直径。能够将直径从125UM到2.5mm的融合剪接和缩小光纤逐渐变细。锥度功能需要锥度软件包。能够融合剪接光纤的直径不同至125um至2.5mm。压电驱动的弯曲阶段和软件包，提供130μm无振动的Z轴运动，并具有0.25μm理论分辨率。扫描软件能够在融合接头或光纤锥度之前或之后扫描光纤的直径。将自动捕获Fusion Splice图像在融合剪接之前，之中和之后以及每个接头的剪接数据和程序文件。“热成像”可实时进行光纤融合处理期间的实时观看。
介导 DMD 基因外显子跳跃的主要编辑策略
杜氏肌营养不良症是一种罕见且致命的遗传性疾病，因 DMD 基因突变导致进行性肌肉萎缩。我们使用 CRISPR-Cas9 Prime 编辑技术开发了不同的策略来纠正 DMD 基因中外显子 52 或外显子 45 至 52 缺失的移码突变。使用优化的 epegRNA，我们能够在高达 32% 的 HEK293T 细胞和 28% 的患者成肌细胞中诱导外显子 53 剪接供体位点的 GT 核苷酸的特异性替换。我们还分别在 HEK293T 细胞和人类成肌细胞中实现了外显子 53 的 GT 剪接位点的 G 核苷酸的缺失高达 44% 和 29%，以及在外显子 51 的 GT 剪接供体位点之间插入 17% 和 5.5% 的 GGG。修改外显子 51 和外显子 53 的剪接供体位点可引发它们的跳跃，从而分别允许外显子 50 连接到外显子 53 和外显子 44 连接到外显子 54。如蛋白质印迹所示，这些修正恢复了肌营养不良蛋白的表达。因此，使用 Prime 编辑在外显子 51 和 53 的剪接供体位点诱导特定的替换、插入和缺失，以分别纠正 DMD 基因中携带外显子 52 和外显子 45 至 52 缺失的移码突变。
非小细胞肺癌 MET 外显子 14 跳跃变异的当前和未来治疗选择
近膜 (JX) 结构域，其中包含 PKC 磷酸化位点 (S985)、胱天蛋白酶切割位点 (D1002) 和 E3 泛素连接酶 CBL (Casitas-B 系淋巴瘤) 对接位点 (Y1003)，均控制 RTK 活性的下调 (图 1a)。3–7 这种改变破坏了外显子 14 两侧的内含子剪接位点，包括内含子 13 的剪接受体位点和内含子 14 的剪接供体位点，或外显子 14 编码序列本身内的突变，都会导致外显子 14 在转录本中跳跃。这些突变中最常见的是碱基替换，其次是插入/缺失。因此，导致MET外显子14跳跃的可变剪接事件会激活MET-HGF通路，促进肿瘤细胞增殖、迁移，并阻止细胞凋亡（图1b）。
PEAR：一种灵活的荧光报告基因，用于识别和富集成功进行先导编辑的细胞
(a) Prime Editor 活性报告基因 (PEAR) 的示意图。PEAR 的机制基于与 BEAR 相同的概念，并且包含相同的非活性剪接位点，如图 (a) 所示。PE 可以将“G-AC - AAGT”序列恢复为规范的“G-GT-AAGT”剪接位点。与 BEAR 不同的是，这里的 Prime 编辑发生在 DNA 的反义链上，因此，这种方法使我们能够将间隔序列定位在内含子内。这里，整个间隔的长度是可以自由调整的（显示为“N”-s）。剪接位点的改变的碱基显示为红色，编辑的碱基显示为蓝色。PAM 序列为深绿色，nCas9 为蓝色，融合的逆转录酶为橙色。
