Ajinomoto集团的再生医学倡议始于京都大学的IPS细胞研究所的联合研究,该研究所的“培养基”对再生医学很重要。该培养基是“细胞生长的食物”。通过Ajinomoto Group的长期研究,在食品和营养领域以及成为生产高质量氨基酸的世界领先的公司的技术中,我们成功地开发了IPS中型“STEMFIT®”。 “STEMFIT®”继续发展以满足各种需求并扩大其阵容。其中之一是生长因子,一种促进IPS细胞分化的蛋白质。 Ajinomoto集团为制药公司和研究机构提供高质量的增长因素。
人类IPS细胞(1231A3)在Imatrix-511上保持了(CAT。编号np891-011) - 涂层板和在STEMFIT®培养基中生长(Cat。编号akn02)。细胞,并使用Tryple Select(Thermofisher)(热泡)将其分解为单个细胞,并进行洗涤和计数。然后将单细胞在补充10 µM Y27632的StemFit培养基中以10 5个细胞/ml的播种(Cat。编号04-0012),并以55 rpm的恒定旋转器搅动转移到能够的30 mL一次性生物反应器中。在第2天和第4天收获细胞,并被Tryple Select分散的球体分散,并用锥虫蓝色染色并计数。细胞,并被Tryple Select分散的球体分散,并用锥虫蓝色染色并计数。
d. 将培养板放入 37 C 培养箱中并孵育 10 分钟。每 3-4 分钟轻轻摇晃培养板一次有助于完全分离细胞。 e. 加入 1 mL 含有 10 m M Y-27632 的 StemFit 培养基,并轻轻吹打细胞直至 iPSC 完全分离。 f. 计数细胞,并将 1.0 3 10 4 –1.5 3 10 4 个细胞接种到 iMatrix 涂层的 6 孔板中,该板含有 2 mL 含有 10 m M Y-27632 的 StemFit 培养基,如步骤 cg 中所述,将细胞在 37 C 的 CO 2 培养箱中孵育过夜。 h. 第二天,用 2 mL StemFit 培养基更换培养基。如果有很多死细胞漂浮,继续向培养基中添加 Y-27632,最终浓度为 10 m M。 i.培养期间每 2 天更换一次培养基。j. iPSC 在第 6-8 天将达到半汇合状态。切勿让它们过度汇合。“半汇合”是指 iPSC 菌落直径小于 2 毫米,并且 iPSC 菌落之间仍有一些间隙。生长速度取决于 iPSC 系,因此应通过实验确定半汇合时间。