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核酸研究
8％聚丙烯酰胺凝胶。cDNA（-0.5 tg）范围为550至1500个碱基对，通过电装饰回收。使用末端脱氧核苷酸转移酶（20）与脱氧残基一起扩展了20 ng等分试样，并用PST I裂解并用Deoxyg残基尾巴（20）将PBR322的100 ng退火100 ng。通过公开的程序（23），使用退火的混合物用于转化大肠杆菌K-12菌株294（22）。制备诱导和未诱导的32P-CDNA探针。5 Zg的12S mRNA与2个寡核酸（DT）12-18（协作研究）或每个合成引物池（FIB 1至FIB 6）的2 Ig合并，在10mm Tris-HCl（pH 8），1 mm EDTA中。将混合物煮沸3分钟，然后在冰上淬火。60 ul of 40 mM Tris-HCl (pH 8.3), 40 mM KCl, 16mM MgCl2, 60 mM o-mercaptoethanol, 1 mM dATP, dGTP, dTTP and 5 x 10 7M (Q-32P) dCTP (Amersham, 2,000 - 3,000 Ci/mmole) was added to each template-primer mix at OC.在添加100个AMV逆转录酶后，将反应在42％C下孵育30分钟，并通过超过10 ml Sephadex G-50列的通道纯化。产品用
自然科学 div>
摘要：谷胱甘肽S-转移酶（GST）是参与动物排毒过程的必不可少的酶。它们催化抗氧化剂谷胱甘肽（GSH）的偶联到各种亲电的化合物，例如环境毒素，致癌物和代谢副产品，形成胃酸，这些苏联酸是水溶性更大的，可以被排除。此过程可保护细胞免受氧化应激和化学损害的影响，而在肝，肾脏和肺等排毒器官中，GST尤其丰富。除解毒外，GST还调节了信号转导，凋亡和细胞增殖等细胞过程。GST从兔肝脏中纯化，产量为22倍，产量为78-80％。使用1-氯-2,4-二硝基苯作为底物评估酶活性，导致91 µmole/min/mg/mg蛋白的特定活性。凝胶过滤，以揭示酶的天然分子量约为50,000。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）来检查酶的亚基组成，并使用染色体来确定其等电点（PI）。来自兔肝脏的纯化GST酶表现出两个不同的亚基，分子量为28,000和27,000，所有酶活性与天然聚丙烯酰胺凝胶电泳中的单个蛋白质带有关。该酶在6.5左右显示出最佳的pH值，并受热的影响最小，在室温下存储八天后，保留了50％的活动。酶与1,2-氧基-3-（硝基苯氧基）丙烷和乙酰乙酸等底物的谷胱甘肽降低显示较高的共轭速率。染色体将GST分解为七个同工酶，PI值范围为7.96至9.6。主要同工酶（PI 8.6）负责超过94％的整体活性，并由两个半相同的亚基组成。该研究成功纯化和表征了兔肝GST，揭示了其亚基组成，等电点和底物特异性。研究结果表明，兔肝脏包含具有相似免疫学特性的多种同工酶，主要同工酶负责大多数酶活性。这种纯化和表征提供了对动物组织中GSTS的酶特性和功能多样性的见解。各种抑制剂和兔肝脏的底物活性的作用进行了测试。