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高通量筛选与实验鉴定...
系统和JAVA Codon Adaptation Tool 进行密码子适配。优化后的序列由上海生工生物工程有限公司通过 BamH1 和 XhoI 酶切位点合成并克隆到来自 pGEX-6p-1 质粒（美国 Novagen）的表达载体中。将重组质粒 pGEX-6p-1-Mpro 转化的 E. coli BL21（DE3）细胞（美国 Invitrogen）在 2 L Luria-Bertani 培养基中于 37 ℃ 下生长至 OD600 达到 0.6 后，加入 0.2 mM IPTG，16 ℃ 诱导重组蛋白表达过夜。将菌体悬浮在 PBS 中，超声波破碎。离心收集上清液并与谷胱甘肽 Sepharose 4B 琼脂糖（美国 GE Healthcare）混合，4 ℃ 下孵育 3 h。然后用 PBS 清洗珠子，并加入 preScission 蛋白酶 (GE) 以切割 GST 标签。含有
纯化外泌体 - 方法和...
1简介1 2背景2 2.1什么是外泌体？2 2.2 Exosome structure and interaction 4 2.3 Application of exosomes 6 2.4 Isolation of exosomes 7 2.5 Quality control measures 8 2.6 The focus of this report 8 3 Non-chromatography methods for exosome purification 9 3.1 Ultracentrifugation 9 3.1.1 Advantages and disadvantages of ultracentrifugation 10 3.2 Ultrafiltration 10 3.2.1 Advantages and disadvantages of ultrafiltration 11 3.3 The principle of immunoaffinity 11 3.3.1 Advantages and disadvantages of immunoaffinity 11 3.4 Precipitation 12 3.4.1 Advantages and disadvantages of precipitation 12 3.5 Scalability of UC, UF and precipitation 13 4 Exosome purification using agarose chromatography techniques 14 4.1 Purification of exosomes based on size 16 4.1.1 Size-exclusion chromatography (SEC) 16 4.1.1.1 sec在EV和外部组中研究16 4.1.1.2使用SEC 17 4.1.1.3隔离EV的交联的Sepharose树脂，用于外部和EV-溶解的预包装的SEC柱18 4.1.1.4
pppA2'p5'A2'p5'A：一种利用干扰素处理细胞的酶组分合成的蛋白质合成抑制剂
摘要 将干扰素处理过的细胞的细胞质提取物与双链 RNA 和 ATP 一起孵育，可形成一种低分子量的无细胞蛋白质合成抑制剂，其有效浓度为亚纳摩尔。通过将来自此类细胞的 poly(I)poly(C)-Sepharose 结合酶级分与 [:IH 或 [a- 或 y-32P]ATP 一起孵育，可方便地合成该抑制剂。该放射性抑制剂的特征在于其在尿素存在下在 DEAE-Sephadex 上的行为，以及在酶、碱和高碘酸氧化和 ft 消除的顺序降解中获得的产物。其结构似乎是 pppA2'p5'A2'p5'A。除了 2'-5' 键之外，我们没有发现任何其他修改或异常的证据。有时抑制剂制剂似乎包括相应的二聚体 (pppA2'p5'A)、四聚体 [ppp(A2'p)3A]、五聚体 [ppp(A2'p)4A]，以及数量逐渐减少的高级寡聚体。三聚体、四聚体和五聚体的活性相似，但二聚体的活性较低，即使有活性。
显微镜观察含 R 环的 DNA
摘要 R 环杂交和电子显微镜已用于测定克隆基因的细胞 RNA 浓度。在质粒 DNA 序列过量的情况下，所有互补 RNA 都被驱动到可通过电子显微镜分析的 R 环结构中。为测定特定 poly(A)+ RNA 的浓度，将质粒 DNA 每 2000-5000 个碱基对与三氧沙林和紫外线交联一次，以 DNA 序列过量的方式与各种已知量的总 poly(A)+ RNA 杂交，并通过用乙二醛处理来稳定 R 环。如有必要，可使用 Sepharose 2B 色谱法去除多余的未杂交 RNA，从而能够可视化较少的转录本。重建实验表明，通过电子显微镜测定含有特定 RNA 环的质粒 DNA 分子的比例可以给出总 poly(A)+ RNA 群体中特定 RNA 重量比例或浓度的准确值。这些方法还用于测定 TRT3 上与序列互补的五种 RNA 物种的浓度，TRT3 是一种重组 DNA 质粒，含有酵母组蛋白 2A 和 2B 基因以及另外三种非组蛋白基因。所描述的方法允许人们可视化丰富和非丰富转录本的 R 环结构，并通过确定含有 R 环的 DNA 分数来估计这些 RNA 物种的浓度。