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新型磷酸酶NUDT5是三阴性乳腺癌生长的关键调节剂
将细胞周期同步48小时，使用1 M甲氯酸酯释放细胞24小时。根据制造商的说明，我们使用了溴脱氧尿苷（BRDU）检测试剂盒（Roche细胞增殖ELISA，BRDU（化学发光）套件）。DRAQ7™（ABCAM，AB109202）添加到细胞中。HOECHST（Hoechst（Thermo Fisher Scientific™，Hoechst 33342溶液，Waltham MA）根据制造商的建议来对抗染色核。使用ImageXpress®PICO显微镜（Molecular Devices，San Jose，CA）对染色的细胞进行成像，并使用CellReporterXpress图像采集和分析软件进行分析。根据制造商的建议，使用了膜联蛋白V-PI（Invitrogen，Annexin v-Fitc结合物，Waltham MA）凋亡测定法，并通过流量
第五届 RAS 倡议研讨会，2024 年 10 月 8 日至 10 日，马里兰州弗雷德里克
ERK 磷酸化。接种细胞，第二天用 BBO-11818 处理。处理后两小时，通过 HTRF 评估 pERK 磷酸化。3D 活力。接种细胞，并在球体形成后 3 天用 BBO-11818 处理。处理后 4 天，通过 CTG 评估活力。长期 2D 克隆形成试验。接种细胞，第二天用 BBO-11818、BBO-10203（PI3K ⍺：RAS 破坏剂）和西妥昔单抗处理并孵育 14 或 15 天。每两周更换一次培养基和化合物。通过 Incucyte 活细胞分析系统每天两次测量汇合度。药代动力学 (PK) 和药效学 (PD)。单次口服 BBO-11818 后，在 GP2d 皮下肿瘤模型中进行剂量和时间反应 PK/PD 分析。收集血浆和肿瘤，使用 MSD 进行 PK 和 pERK 分析。体内疗效和生存研究。在具有 KRAS G12D 或 KRAS G12V 突变的细胞系衍生异种移植 (CDX) 或同源模型中，以所示剂量水平每日两次 (BID) 口服给药后评估 BBO-11818 疗效。BBO-10203 每日一次 (QD) 口服给药。抗 PD-1 或西妥昔单抗每周两次 (BIW) 通过腹膜内给药。计算肿瘤生长抑制 (TGI)、平均肿瘤消退 (REG) 和完全消退 (CR) 数。BrdU 掺入和裂解 caspase-3 测定。在采集肿瘤前 2 小时，在指定时间点，对 Capan-2 肿瘤小鼠进行单次口服指定治疗，并腹膜内注射 50 mg/kg BrdU。制备福尔马林固定的肿瘤并切片。对 BrdU 和裂解 caspase-3 进行免疫组织化学 (IHC)，并对 BrdU 和裂解 caspase-3 的阳性染色进行定量，以分别测量肿瘤细胞增殖和凋亡的水平。统计分析：对克隆形成试验进行双向重复测量方差分析，随后进行事后 Tukey 多重比较检验，直至第 14 天或第 15 天。使用 Dunnett 检验对载体组或指定组进行 PD 和 IHC 研究的单向方差分析和对疗效研究进行双向重复测量方差分析。
文章 - 人类和动物健康 Hec1/Nek2 有丝分裂通路抑制剂 INH1 抑制 A549 和 HeLa 细胞的细胞动力学参数
摘要：本研究在体外研究了 Hec1/Nek2 有丝分裂途径抑制剂 INH1 在腺癌人肺泡基底上皮细胞 A549 和人宫颈癌 HeLa 细胞系中的抗增殖作用。为此，使用了 xCELLigence 实时细胞分析 DP 仪器测定的细胞指数值、有丝分裂指数、BrdU 增殖测定和凋亡指数分析。本研究的结果表明，INH1 对 A549 具有细胞抑制和细胞骨架作用，对 HeLa 细胞具有细胞抑制作用。使用 xCelligence 设备测定两种细胞系的 IC 50 浓度均为 56 µM。所有其他参数均使用 IC 50 浓度。虽然该浓度降低了有丝分裂指数 BrdU 增殖值，但它增加了两种细胞系的凋亡指数值。对照组和实验组之间存在显着差异（p <0.05）。本研究的结果表明 INH1 可能成为不同类型癌症的有希望的治疗选择。
BWC5077，一种有效而新颖的小分子CDK7抑制剂
a。CDK7底物（RNAP II）在用DMSO（对照）处理的HCT116细胞中或通过免疫印迹测量的指示化合物。b。通过免疫印迹在处理过的HCT 116细胞中癌基因C-MYC和DNA双链断裂标记H2AX的表达。C.细胞增殖（C -BRDU分析）和D，处理后的HCT 116细胞中的细胞凋亡分析（Annexin V/7AAD染色）。e。在用DMSO（对照）处理的MDA-MB-231（TNBC）细胞中，在MDA-MB-231（TNBC）细胞中的凋亡制造商（裂解的caspase 3和裂解PARP1）的表达表达或通过免疫印迹测量的指示化合物。
过度抑制NADPH氧化酶减少了鳍鱼的肝脏的伤口愈合
伤口愈合是一个复杂的过程，涉及可溶性介质，血细胞，细胞外基质和实质细胞，在手术或创伤性损伤后发生的反应中。本研究旨在研究使用ZFL（斑马鱼肝细胞）和罗非鱼部分肝切除术模型的伤口愈合所造成的损伤产生的ROS。在ZFL中，我们观察到，尽管过度抑制了NADPH活性，从而减少了伤口的愈合，但通过过氧化细胞外氧化氢对氧化应激进行了实验，这些氧化应恰好提出，以增加PCNA，BRDU和KI-67 HIM 67组织病理学修复反应。我们得出的结论是，DPI对NADPH氧化酶的介入可以减少细胞甚至在损伤后愈合进展中的组织。©2014 Elsevier Ltd.保留所有权利。
儿童髓母细胞瘤靶向疗法的新方法
摘要。背景/目标：三重阴性乳腺癌（TNBC）是一种积极的乳腺癌类型，化疗靶标有限。这项研究评估了新型Imidazo [2,1-B]基于奥恶唑的抑制作用迅速加速的纤维肉瘤（RAF）抑制剂，KIST0215-1和KIST0215-2，对上皮细胞转化和TNBC肿瘤的抑制作用。材料和方法：进行了免疫印迹，BRDU掺入分析，报告基因测定和软琼脂测定分析。体内效应。结果：KIST0215-1和KIST0215-2抑制了EGF在MDA-MB-231细胞中诱导的RAFS-MEK1/2-ERK1/2信号传导途径，这抑制了C-FOS转录活性和激活剂蛋白-1反式激活活性。KIST0215-1和KIST0215-2还防止了EGF诱导的JB6 C141小鼠表皮细胞的肿瘤转化，并始终抑制BALB/C小鼠中4T1细胞形成的肿瘤的生长。结论：使用KIST0215-1和KIST0215-2抑制RAF激酶是治疗TNBC的有前途的化学治疗策略。
高氧对胎儿皮质神经干细胞细胞周期阶段长度有持续时间依赖性的影响
胎儿神经干细胞 (NSC) 在生理上存在于低氧条件下（1% – 5% 的组织 pO 2 ），但通常被转移并维持在 21% pO 2 的大气氧水平（高氧）下以进行体外研究。这些改变的氧条件会导致 NSC 发生适应性变化，从而使体外数据的解释变得复杂。然而，潜在的适应动力学在很大程度上仍然是个谜。在这里，我们研究了短期高氧效应（3% pO 2 中 5 天，随后在 21% pO 2 中 2 天），并与持续高氧效应（21% pO 2 中 7 天）和生理氧对照（3% pO 2 中 7 天）进行了比较。我们利用皮质 NSC 通过流式细胞术和累积 BrdU 掺入测定法来分析细胞周期阶段。在持续高氧条件下培养时，NSC 的细胞增殖严重减少，但短期高氧后没有变化。随后通过流式细胞术进行的细胞周期分析表明，在持续和短期高氧条件下，NSC 明显从 G0/G1 期转向 S 期或 G2/M 期。然而，虽然短期高氧显著缩短了细胞周期，但在持续高氧条件下，细胞周期却增加了。总之，我们的结果证明了生理氧对体外扩增 NSC 的有益作用，并揭示了短期高氧与持续高氧相比的不同作用。
sirtuin 抑制剂 cambinol 与紫杉醇在 MCF7 管腔和 MDA-MB-231 三阴性乳腺癌细胞中的附加药理相互作用
摘要背景乳腺癌 (BC) 是全球最常见的恶性肿瘤，也是女性癌症相关死亡的主要原因。Sirtuin 抑制剂 (SIRTi) 属于组蛋白去乙酰化酶抑制剂组 (HDI)，是一种有效的表观遗传药物，已被研究用于治疗不同的临床疾病，包括血液系统恶性肿瘤和实体瘤。方法在 MCF7 管腔和 MDA-MB-231 三阴性乳腺癌 (TNBC) 细胞中测定了单独使用或与标准化疗紫杉醇 (PAX) 联合使用 cambiol (CAM; SIRTi) 对活力 (MTT 测定)、增殖 (BrdU 测定)、诱导凋亡和细胞周期停滞 (FACS 分析) 的影响。采用精确而严格的药效动力学方法——等效线图法，确定 CAM 和 PAX 之间的药理药物相互作用类型，以确定使用各种固定剂量比所分析药物之间是否存在协同作用、加成作用或拮抗作用。结果 CAM 和 PAX 以 1:1 的固定比例组合对 MCF7 和 MDA-MB-231 BC 细胞活力产生加成作用。两种活性药物单独使用均降低了 BC 细胞的活力和增殖，并诱导细胞凋亡和细胞周期停滞。这些影响在 MCF7 细胞中比在 MDA-MB-231 BC 细胞中更为明显。此外，与单独使用 PAX 相比，CAM 与 PAX 联合使用可增强抗癌活性。结论 CAM 可被视为一种潜在的治疗剂，单独使用或与 PAX 联合治疗管腔或 TNBC。