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一种新型的nabelschnur蛋白调节锥虫瘤中动力学DNA的分离
线粒体的获取对于启动真核生成至关重要，因此是真核细胞的特征。1,2寄生虫锥虫Brucei包含一个具有独特的线粒体基因组的奇异线粒体，称为动力体DNA（kDNA）。3在核DNA复制开始之前，在细胞周期的G 1期间复制了kDNA cur。4尽管已经在功能上表征了许多蛋白质，并将其鉴定为kDNA补充和分裂的重要组成部分，但管理这种高度精确过程的分子机制仍然很少知道。5,6一种与形态相关的和形态学特征的结构仍然是最神秘的，是“ nabelschnur”，是一种未构成的，纤维状的，使其成熟的结构观察到的，这是通过电子显微镜看到的隔离子女kDna网络。7–9迄今为止，只有一种蛋白质TBLAP1，一种M17家族亮氨肽酶金属蛋白酶，已知可以定位于Nabelschnur。9筛选Brucei Mitotag项目中的蛋白质时，10我们鉴定了一种先前未表征的蛋白质，并具有位于kDNA的mneongreen信号，并形成了分裂KDNA之间的连接点。在这里，我们证明了该KDNA相关的蛋白质，称为TBNAB70，确实位于Nabelschnur，并在新复制的KDNA的分离中起着至关重要的作用，并在Brucei T. Brucei中的随后的细胞因子。
DNA损伤通过锥虫瘤的镶嵌变体表面糖蛋白（VSG）驱动抗原多样化。
图2。DNA双链破裂时，当同源性可用时触发镶嵌VSG形成a）沿Antat1.1转录本鉴定出的独特重组事件的直方图。Cas9 DNA断裂位点由垂直线表示。相对于VSG转录本的5'端的剪切位置为：243、369、694、894、978和1459。截面有色，以指示已确定的供体VSG。r表示与反向链结合的指南。绘制了ANTAT1.1与供体VSG之间的完美同源性的中点。如果镶嵌序列匹配> 1个潜在的供体VSG，则绘制平均重组位置。b）定量由DNA断裂引起的镶嵌重组事件。与从该区域的未经常规读数计数相比，该区域内检测到的250bp或下游中检测到的重组事件的数量被归一化，并具有最小的覆盖范围，以控制测序深度。（n = 2，两个独立的克隆）统计显着性是用带有事后Tukey HSD（** p <0.01）平均值的单向方差分析确定的。c）在ANTAT1.1内断裂后分离出的寄生虫克隆的镶嵌VSG示意图。显示的代表序列。d）在所有分离的镶嵌表达克隆中鉴定出的供体VSG插入长度的直方图。插入长度仅包括新插入的序列，不包括重组位点。e）atat1.1家族的示意图与antat1.1转录本排列。灰色序列与atat1.1的完美匹配。f）在每个重组位点，ANTAT1.1和供体VSG之间共享身份长度的直方图。g）量化Eatro1125和Lister427寄生虫的VSGNOM中VSG类型。lister427 vsgnome具有5个vsgs，可以完全复制，没有任何其他家庭成员。sl = 5'剪接领导者序列，14-mer = 3'序列在所有VSG转录本中保守
布氏锥虫中 RNA–DNA 混合相互作用蛋白的免疫沉淀揭示了保守和新的活性，包括控制抗原变异逃避免疫所需的表面抗原表达
摘要 RNA-DNA 杂交是基因组的表观遗传特征，可提供多种且不断增长的活动范围。通过表征与杂交相互作用的蛋白质，可以了解这些功能，但迄今为止，所有这些分析都集中在哺乳动物身上，这意味着尚不清楚在其他真核生物中是否也发现了类似的 RNA-DNA 杂交相互作用物。非洲锥虫是 Discoba 类群的单细胞真核寄生虫，在核心生物学的几个方面与其哺乳动物宿主存在显著差异。在这里，我们表明 DNA-RNA 杂交免疫沉淀结合质谱法在 T. brucei 哺乳动物和昆虫感染细胞中恢复了 602 个推定的相互作用物，其中一些提供在哺乳动物中也发现的活动，一些提供谱系特异性的活动。我们证明，三种因子（两种假定的解旋酶和一种 RAD51 旁系同源物）的缺失会改变布氏锥虫的核 RNA-DNA 杂交和 DNA 损伤水平。此外，每种因子的缺失都会影响寄生虫抗原变异免疫存活机制的运作。因此，我们的工作揭示了 RNA-DNA 杂交对布氏锥虫生物学的广泛贡献，包括宿主免疫逃避中的新功能以及可能对真核基因组功能至关重要的活动。
转运蛋白而非药物靶标的差异是刚果锥虫和锥虫亚属锥虫对二脒和三聚氰胺苯砷剂具有不同先天敏感性的主要决定因素
摘要：动物锥虫病是感染各种非洲锥虫种类的动物的疾病，例如布氏锥虫、伊氏锥虫、刚果锥虫、马背锥虫和间日锥虫。症状因宿主和感染物种以及感染阶段而异，可使用数十年前的少量锥虫杀虫剂进行治疗。一个复杂的问题是，并非所有锥虫物种对所有药物都同样敏感，而原因至多只是部分了解。在这里，我们研究药物转运蛋白（主要在布氏锥虫中发现）是否决定了不同的药物敏感性。我们报告称，氨基嘌呤转运蛋白 TbAT1 和水通道蛋白 TbAQP2 的同源物在刚果锥虫中不存在，而它们的引入使该物种对二脒（喷他脒、二脒氮）和三聚氰胺苯（美拉索明）类药物非常敏感。这些药物在转基因株系中的积累速度要快得多。刚果锥虫对苏拉明的敏感性本质上也低于布氏锥虫，尽管它对苏拉明的积累速度更快。在刚果锥虫中表达位于布氏锥虫溶酶体中的一种拟议的苏拉明转运蛋白并没有改变其对苏拉明的敏感性。我们得出结论，对于几类最重要的锥虫药而言，特定转运蛋白的存在，而不是药物靶标，才是药物疗效的决定性因素。
警告选择并发
科学领域：免疫学和感染1。项目摘要和工作计划“ CD5抗原样”（CD5L）是一种循环蛋白质的富含盟约的清道夫超家族（SRCR），传统上与微生物的中和和巨噬细胞吞噬相关。我们以前的研究表明，CD5L识别原生动物，例如Brucei和Berghei疟原虫，从而扩大了其作用范围。通过疟疾和非洲人类三体病毒等媒介的原生动物疾病，分别由疟原虫和布鲁氏菌寄生虫引起，在2021年影响了全球超过2.4亿人。在没有蛋白质的情况下，在T. brucei感染后的不同时间显示了鼠T. brucei和P. berghei模型的体内实验。我们在t. brucei感染模型中的初步结果表明，CD5L似乎减少了过度的炎症并调节免疫识别，而在疟原虫中，CD5L会影响肝脏和血液相的免疫反应。该项目旨在探讨CD5L在向量传播的寄生虫免疫力中的作用，这有助于开发具有巨大全球影响疾病的创新治疗干预措施。其目标是：1）表征负责赋予布鲁氏菌感染易感性的分子机制2）通过通过蚊子bite传播或接种感染性红细胞的疟原虫孢子虫通过传播疟疾孢子虫来研究CD5L相关性。2。8月29日的适用立法第57/2016号法令 - 科学就业RJEC的法律制度 - 在当前的劳工撰稿中，目前的措辞3。总统陪审团：Joana Tavares；元音：ana do vale，nuno dos santos总统陪审团：Joana Tavares；元音：ana do vale，nuno dos santos
化脓性链球菌 Cas9 核糖核蛋白递送，用于在锥虫和利什曼原虫中进行高效、快速和无标记的基因编辑
图 1 布氏锥虫 PCF 中的 GFP 失活。（a）对组成性表达胞浆 eGFP 的布氏锥虫进行荧光流式细胞术分析。在用 20 μ g（无 Cas9、Cas9/gRNA GFP1、Cas9/gRNA GFP2、Cas9/gRNA GFP3）或 60 μ g（Cas9/gRNA GFP2）来自 IDT 的 RNP 复合物转染后 24 至 72 小时随时间监测 GFP 荧光，条形图显示用不同向导转染后 72 小时 GFP 阴性细胞的百分比（n = 3）。采用 Prism 软件进行统计分析，采用 t 检验（非配对、正态分布、参数检验和双尾）。显着性水平（p 值）用星号表示。 （b）上图显示了允许 e Sp Cas9 在大肠杆菌中表达的质粒的示意图。蓝色框表示蛋白质 N 端和 C 端的两个多组氨酸序列，红色框表示 TEV 和肠激酶 (EK) 蛋白酶的切割位点，灰色框表示三个核定位信号 (NLS)，黑色框表示 FLAG 表位的三个重复，橙色框表示 e Sp Cas9 编码序列。下图显示了在用来自 IDT 或实验室纯化 (Lab) 的 RNPs 复合物 (无 Cas9、20 μ g Cas9/gRNA GFP2、40 μ g Cas9/gRNA GFP2、40、60 和 80 μ g Cas9/gRNA GFP2) 转染后 72 小时监测的表达 GFP 的 T. brucei 的荧光流式细胞术分析。（c）不再表达 GFP 的克隆中 GFP 基因的一部分的序列比较。该序列仅显示 GFP2 向导 RNA 所针对的区域。灰色框（H1 和 H2）突出显示可能用于 MMEJ 修复的同源区域。由实验室纯化的 Cas9 失活产生的序列和来自商业 Cas9 的序列分别标记为 Lab 和 IDT。下面显示了 Dc6 和 Ba10 克隆的相应色谱图（置信区间 95%— p 值样式：0.1234 (ns)；0.0332 (*)；0.0021 (**)；0.0002 (***)；< 0.0001 (****)）。
影响力的msphere：用单位蛋白质组学扩展CRISPR领域
摘要露西·格洛弗（Lucy Glover）的研究着重于DNA修复和重新组合在寄生虫锥虫瘤抗原变异中的作用，寄生虫锥虫是人类和非洲非洲锥虫病的致病药物。在这种影响力的这种情况下，她反映了Z. J. Waldrip，S。D. Byrum，A。J. Storey，J。Gao等人如何对“基于CRISPR的蛋白质组学分析方法进行蛋白质组学分析”。（Epigenet-ICS 9：1207–1211，2014，https：//doi.org/10.4161/epi.29919）通过获得CRISPR-CAS9的精确性并重新陈述它来查看单位基因局蛋白质组学，从而对她的研究产生了影响。通过在锥虫中使用这项技术，Glover博士和她的同事可以研究修复蛋白的动态积累，并在特定的损害后，并深入了解了双链断裂（DSB）的位置如何决定修复途径的选择以及这可能会在这些寄生虫中影响免疫免疫。
糖酵解和糖体中的蛋白质易位...
摘要。锥虫会引起被忽视的热带疾病，本综述讨论了针对糖酵解和糖体内部蛋白质易位作为治疗这些感染的策略的潜力。不同的研究表明，糖酵解是克氏锥虫、布氏锥虫和利什曼原虫等寄生虫的主要能量来源，它们的糖酵解酶与人类糖酵解酶有很大不同，为选择性药物开发提供了机会。抑制糖酵解可导致寄生虫大量死亡，因为即使部分阻断该途径也会破坏三磷酸腺苷的产生，而三磷酸腺苷对于寄生虫的生存至关重要。本综述还研究了跨糖体膜的蛋白质易位机制，特别是过氧化物酶的关键作用；糖体蛋白的错误定位会对寄生虫的生存产生不利影响。了解蛋白质输入的机制和糖体酶的独特特性可以促进针对这些特定目标的合理药物设计。总体而言，本综述强调需要创新的治疗方法来有效应对锥虫病带来的挑战，并主张进一步研究这些寄生虫的代谢脆弱性，以开发有针对性的有效治疗方法。
UVa 生物学 - 弗吉尼亚大学
副教授 Jennifer Güler 还是学生时曾广泛游历。她说道：“我反复发现，世界其他地区的人所患的疾病对我们美国人来说并不是什么大问题。”Güler 的主修专业是微生物学，她认为研究原生动物疾病并不困难。她开始描述布氏锥虫的线粒体代谢途径，希望能找到治疗非洲昏睡病的新药物靶点，后来她转向研究导致疟疾的寄生虫恶性疟原虫。Güler 说道：“尽管我们早就有了治疗疟疾的药物并且正在研发疫苗，但仍有许多关于这种生物体的基本问题有待解答。其中之一就是代谢适应。疟疾和许多其他原生动物具有极强的代谢灵活性，这使它们能够在来自环境的营养物质和它们自己产生的营养物质之间来回切换。这种能力使它们能够适应不同的环境并提高它们的生存能力。寄生虫生物学的另一个基本部分是它改变基因组的能力。就恶性疟原虫而言，Güler 推测其