新的间隔物被整合到宿主的 CRISPR 阵列中。 CRISPR 阵列通常在重复的 DNA 片段之间具有许多不同的间隔物,即重复序列 [3],CRISPR(成簇的规律间隔的短回文重复序列)由此得名 [4]。 CRISPR 阵列的转录和前体转录本的加工产生成熟的 CRISPR RNA(crRNA),每个 crRNA 含有一个间隔区和部分重复序列(图 1,[5])。与crRNA间隔区具有碱基互补的DNA分子被CRISPR-RNP(crRNP)特异性识别和结合,不仅介导对环境中外来DNA的防御,而且还为我们的修改和调控基因和基因组提供了多种可能性。 CRISPR-Cas 系统分为两类:更常见的第 1 类使用来自几种 Cas 蛋白的 crRNP,
Cas,CRISPR 相关;CRISPR,成簇的规律间隔的短回文重复序列;CRISPRa,CRISPR 介导的转录激活;CRISPRi,CRISPR 介导的转录抑制;crRNA,CRISPR RNA;crRNP,CRISPR 核糖核蛋白;dCas9,核酸酶失活 Cas9;DSB,双链断裂;dsDNA,双链 DNA;dsODN,双链寡脱氧核苷酸;gRNA,向导 RNA;H3K27ac,组蛋白 H3 赖氨酸 27 乙酰化;H3K4me1,组蛋白 H3 赖氨酸 4 单甲基化;LAM-PCR,线性扩增介导的 PCR;LSD1,赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶 1;MCP,MS2 外壳蛋白;MOI,感染复数; p65AD,核因子-κB反式激活亚基激活结构域;PAM,原型间隔区相邻基序;RNAi,RNA干扰;scFV,单链可变片段;sfGFP,超折叠GFP;sgRNA,单向导RNA;ssRNA,单链RNA。