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与肾脏意义的单克隆丙种球蛋白病相关的 C3 肾小球肾炎：诊断和治疗的挑战
2.5g/日（白蛋白尿1700mg/日），肾功能正常（CrS1.1/Ur65mg/dL，肌酐清除率94mL/min）。根据血清和尿液免疫固定试验结果，诊断为IgG/κ单克隆丙种球蛋白病：M蛋白0.4g/dL，血清κ轻链11.8mg/L，血清λ轻链1.16mg/L，对应比值为10.15。血红蛋白12.4g/dL，钙9.0mg/dL。血清IgA、IgG、IgM均降低（分别为596、68、21mg/dL）。他的 C3 水平较低，为 74 mg/dL（正常范围：90-180 mg/dL），C4 水平正常（15 mg/dL）。未进行扩展补体检测。免疫研究中未检测到其他变化（抗 GBM、ANA、抗 dsDNA、ANCA 和冷球蛋白抗体阴性），病毒血清学
SPOVG与RNA之间相互作用的定量分析
先前已发现伯氏毛毛毛虫SPOVG蛋白是DNA和RNA结合蛋白。测量并进行了比较，以帮助阐明配体基序，众多RNA，SSDNA和DSDNA的影响。研究中使用的基因座是SPOVG，GLPFKD，ERPAB，BB0242，AB和OSPAB，特别关注mRNA的未翻译5 0部分。执行结合和竞争测定结果表明，SPOVG mRNA的5 0端具有最高的属性，而观察到的最低限度是to ab mRNA的5'端。对SPOVG RNA和ssDNA序列的诱变研究表明，Spovg-核酸复合物的形成并不完全取决于序列或结构。此外，在SSDNA中换尿氨酸不影响蛋白质核酸复合物的形成。©2023作者。由Elsevier Inc.出版这是CC BY-NC许可证（http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/）下的开放访问文章。
CRISPR/Cas 技术及其在大肠杆菌中的应用
大肠杆菌是生产生物燃料和大宗化学品（如乙醇、高级醇、脂肪酸、氨基酸、莽草酸衍生物、萜类化合物、聚酮化合物和聚合物前体（如 1,4-丁二醇））的最广泛使用的细胞工厂之一（Yang 等人，2021 年）。生产这些生化物质的代谢工程需要对细胞代谢进行大量调节以提高生产率。基因组编辑需要高效的工具来执行节省时间的顺序或多重操作。大肠杆菌有许多基因编辑工具，但它们都有特定的优点和缺点。使用双链 DNA（dsDNA）进行基因工程重组通常需要选择标记，这些标记应在下一步中被消除，以便进行后续修改（Datsenko 和 Wanner，2000 年；Sharan 等人，2009 年）。与双链DNA相比，单链DNA（ssDNA）介导的重组效率更高，并已进一步发展为可进行多重编辑的基因编辑工具，如多重自动基因组工程（MAGE）（Wang et al.，2009）和可追踪多重重组（TRMR）（Warner et al.，2010）。但这些方法不适用于没有选择标记的20bp以上的多个靶基因插入，通常需要强大的高通量筛选方法（Li et al.，2015）。近来发展的成簇的规律间隔的短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（Cas）系统被广泛应用于大肠杆菌的基因工程，极大地促进了其应用。成熟的 CRISPR RNA (crRNA) 和反式激活 crRNA (tracrRNA) 双链（或单个合成向导 RNA，sgRNA）或仅 crRNA 引导 Cas 核酸酶切割具有所需原型间隔区相邻基序 (PAM) 的靶 DNA 序列 (Jiang et al., 2013)。我们之前的文章 (Liu et al., 2020) 总结了不同类型的 CRISPR 系统的机制。CRISPR/Cas 系统持续切割靶位点，直到成功编辑或未编辑的细胞死亡，从而无需使用选择标记。
技术说明 - 使用 DNA Genotek Oragene 设备收集并使用 Nanobind 试剂盒提取的唾液 DNA 样本的 HiFi 测序性能
采集了 30 位捐献者的唾液样本，其中 90% 的分析前 DNA 质量 >2 µg。从 27 个样本中提取了 HMW DNA，其中 93% 的产量 >500 ng。提取后，使用 Qubit dsDNA BR 检测试剂盒对 DNA 进行定量，并使用 Femto Pulse 系统（安捷伦科技公司）进行表征。使用 SMRTbell ® 制备试剂盒 3.0 为部分样本制备 HiFi 文库，并使用 SPRQ™ 化学方法在 Revio 系统上进行测序。每个样本都在一个 Revio SMRT 测序池上进行测序。表 1 总结了五个代表性样本的测序数据。这些样本产生了 4.7 到 15.9 µg 的 HMW DNA。HiFi 测序产量为 119 到 133 Gb 的 HiFi 数据，每个基因组的覆盖率为 27 到 40 倍，足以进行全面的 WGS 变异检测。 75% 到 95% 的读数映射到人类参考基因组 (GRCh38)。
通过 CRISPR 进行高效、安全的基因组编辑...
摘要 CRISPR-Cas12a 系统已被开发用于在真核细胞中实现高度特异性的基因组编辑。鉴于 Cas12a 基因相对较小，该系统被认为最适用于使用 AAV 载体递送的基因治疗。之前，我们报道了富含 U 的 crRNA 能够通过 CRISPR-Cas12a 系统在真核细胞中进行高效的基因组编辑。在本研究中，我们在 crRNA 富含 U 的 3 ′-突出端的核糖 C2 处引入了甲氧基修饰。当与 Cas12a 效应蛋白混合时，核糖基-2 ′-O-甲基化 (2-OM) 富含 U 的 crRNA 能够提高 dsDNA 的消化率。此外，化学修饰的富含 U 的 crRNA 在小鼠受精卵中实现了非常安全且高度特异性的基因组编辑。工程化的 CRISPR-Cas12a 系统有望促进各种动物模型的生成。此外，工程化的 crRNA 也得到了评估，以进一步改进 CRISPR 基因组编辑工具集。
DNA定量Infor的DNA
•使用1 O.D的惯例使用A260处的分光光度吸光度来确定DNA浓度。相当于50 µg/ml的双链DNA或量子dsDNA BR分析，这是一种基于染料的荧光方法，具体取决于存储库。有关特定信息，请参见＃9。示例至少读取两次以验证阅读。仪器每季度进行测试，并根据需要进行校准。•为了评估DNA完整性，通过安装贴纸评估DNA。挂接软件确定DNA完整性数（DIN）作为GDNA完整性的度量。（注意：所有存储库都不执行。）•使用6个常染色体微卫星标记的多重PCR分析确认DNA样品身份。性别是在同一反应中使用额外的底漆对确定的，该对X和Y-染色体蛋白基因基因之间的等位基因差异区域。此测定的细节及其在质量控制过程中的重要性将在下面讨论。此测定法提供了几个质量控制参数，如下：
Qiagen QiaSeq的自动化目标DNA Pro面板在汉密尔顿NGS STAR MOA上生成针对目标的下一代SEQ
生物学资格结果，以评估NGS星MOA上QIASEQ靶向DNA Pro面板方法的生物学性能，使用带有4110引物的自定义面板执行了96个人类基因组DNA样品的库制备。作为输入DNA，使用了五个不同的基因型，每个基因型都使用了两个不同的输入量（10 ng和40 ng）（请参阅应用注释末尾的方法要求）。使用8个PCR循环进行了运行，以实现靶富集，并为25个PCR循环进行通用PCR。DNA浓度和总产率，该运行具有Quant-IT 1X DSDNA HS HS分析套件。使用具有高敏感性D5000试剂的高敏性D5000屏幕截图，用Agilent Tapestation 4150对图书馆DNA的尺寸分布进行了MEA（表1）。
通过紫外分光光度准曲（包括纳米体）和PICOGREEN分析获得的DNA定量值的比较
有一系列可用于定量DNA的方法，包括吸光度，琼脂糖凝胶电泳和荧光DNA结合染料。传统方法涉及使用紫外分光光度计测量样品的吸光度。DNA在260 nm附近具有最大吸光度，因此该波长的紫外线通过样品传递。较高水平的吸光度表明样品中存在的DNA浓度更高。此方法的优点是也可以评估DNA的质量；还测量了280 nm处的吸光度以确定蛋白质污染的水平。A 260 /A 280比例表示DNA样品的纯度，值为1.8或更高的纯DNA样品。这种方法的缺点是，单链DNA（ssDNA）和RNA在260 nm处也吸收紫外线，因此可以干扰结果并引起双链DNA（DSDNA）浓度的高估。可用多种紫外线分光光度计，从量化板或比色杯中DNA的传统仪器到纳米旋风等仪器（Thermo
1502.完整版.pdf
摘要 目的 治疗目标是控制停用皮质类固醇和免疫抑制剂的系统性红斑狼疮 (SLE) 患者的疾病活动度。我们评估了是否可以通过连续皮下注射贝利木单抗 (BEL) 和一周期利妥昔单抗 (RTX) 来实现这一目标。 方法 在这项 3 期双盲 BLISS-BELIEVE 试验 (GSK 研究 205646) 中，活动性 SLE 患者开始皮下注射 BEL 200 mg/周，持续 52 周，在第 4 周和第 6 周随机接受静脉注射安慰剂 (BEL/PBO) 或静脉注射 RTX 1000 mg (BEL/RTX)，同时停止同时服用免疫抑制剂/减少皮质类固醇；包括 104 周的标准疗法 (BEL/ST；参考组)。主要终点：第 52 周时使用 BEL/RTX 与使用 BEL/PBO 达到疾病控制（SLE 疾病活动指数-2000 (SLEDAI-2K) ≤2；不使用免疫抑制剂；泼尼松当量 ≤5 毫克/天）的患者比例。主要（α 控制）次要终点：临床缓解的患者比例（第 64 周；临床 SLEDAI-2K=0，不使用免疫抑制剂/皮质类固醇）；疾病控制的患者比例（第 104 周）。其他评估：疾病控制持续时间、抗 dsDNA 抗体、C3/C4 和 B 细胞/B 细胞亚群。结果 修改后的意向治疗人群包括 263 名患者。总体而言，16.7% (12/72) 的 BEL/PBO 和 19.4% (28/144) 的 BEL/RTX 患者在第 52 周达到了疾病控制（OR（95% CI）1.27（0.60 至 2.71）；p=0.5342）。对于主要次要终点，BEL/RTX 和 BEL/PBO 之间的差异无统计学意义。与 BEL/PBO 相比，BEL/RTX 组的抗 dsDNA 抗体和大多数评估的 B 细胞/B 细胞亚群较低。BEL/RTX 的 52 周平均疾病控制时间明显长于 BEL/PBO。结论 在大多数分析的终点事件中，BEL/RTX 并不优于 BEL/PBO；然而，与 BEL/PBO 相比，它可以显著改善疾病活动标志物。有必要进一步研究联合治疗。试验注册号 NCT03312907
序贯疗法的疗效和安全性
摘要 目的 治疗目标是控制停用皮质类固醇和免疫抑制剂的系统性红斑狼疮 (SLE) 患者的疾病活动度。我们评估了是否可以通过连续皮下注射贝利木单抗 (BEL) 和一周期利妥昔单抗 (RTX) 来实现这一目标。 方法 在这项 3 期双盲 BLISS-BELIEVE 试验 (GSK 研究 205646) 中，活动性 SLE 患者开始皮下注射 BEL 200 mg/周，持续 52 周，在第 4 周和第 6 周随机接受静脉注射安慰剂 (BEL/PBO) 或静脉注射 RTX 1000 mg (BEL/RTX)，同时停止同时服用免疫抑制剂/减少皮质类固醇；包括 104 周的标准疗法 (BEL/ST；参考组)。主要终点：第 52 周时使用 BEL/RTX 与使用 BEL/PBO 达到疾病控制（SLE 疾病活动指数-2000 (SLEDAI-2K) ≤2；不使用免疫抑制剂；泼尼松当量 ≤5 毫克/天）的患者比例。主要（α 控制）次要终点：临床缓解的患者比例（第 64 周；临床 SLEDAI-2K=0，不使用免疫抑制剂/皮质类固醇）；疾病控制的患者比例（第 104 周）。其他评估：疾病控制持续时间、抗 dsDNA 抗体、C3/C4 和 B 细胞/B 细胞亚群。结果 修改后的意向治疗人群包括 263 名患者。总体而言，16.7% (12/72) 的 BEL/PBO 和 19.4% (28/144) 的 BEL/RTX 患者在第 52 周达到了疾病控制（OR（95% CI）1.27（0.60 至 2.71）；p=0.5342）。对于主要次要终点，BEL/RTX 和 BEL/PBO 之间的差异无统计学意义。与 BEL/PBO 相比，BEL/RTX 组的抗 dsDNA 抗体和大多数评估的 B 细胞/B 细胞亚群较低。BEL/RTX 的 52 周平均疾病控制时间明显长于 BEL/PBO。结论 在大多数分析的终点事件中，BEL/RTX 并不优于 BEL/PBO；然而，与 BEL/PBO 相比，它可以显著改善疾病活动标志物。有必要进一步研究联合治疗。试验注册号 NCT03312907