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纯化外泌体 - 方法和...
1简介1 2背景2 2.1什么是外泌体？2 2.2 Exosome structure and interaction 4 2.3 Application of exosomes 6 2.4 Isolation of exosomes 7 2.5 Quality control measures 8 2.6 The focus of this report 8 3 Non-chromatography methods for exosome purification 9 3.1 Ultracentrifugation 9 3.1.1 Advantages and disadvantages of ultracentrifugation 10 3.2 Ultrafiltration 10 3.2.1 Advantages and disadvantages of ultrafiltration 11 3.3 The principle of immunoaffinity 11 3.3.1 Advantages and disadvantages of immunoaffinity 11 3.4 Precipitation 12 3.4.1 Advantages and disadvantages of precipitation 12 3.5 Scalability of UC, UF and precipitation 13 4 Exosome purification using agarose chromatography techniques 14 4.1 Purification of exosomes based on size 16 4.1.1 Size-exclusion chromatography (SEC) 16 4.1.1.1 sec在EV和外部组中研究16 4.1.1.2使用SEC 17 4.1.1.3隔离EV的交联的Sepharose树脂，用于外部和EV-溶解的预包装的SEC柱18 4.1.1.4
解锁外部秘密：医学科学的新边界
医学研究和治疗。这是一些最有前途的应用：•疾病生物标志物：外泌体在各种体内表现，包括血液，尿液和唾液。他们的内容反映了其原籍细胞的状态，使其成为疾病生物标志物的良好候选人。研究人员正在开发基于外部的诊断，用于早期检测癌症，神经退行性疾病和心血管条件。例如，源自肿瘤细胞的外泌体带有肿瘤特异性标记，允许非不创癌症诊断和监测。•治疗递送系统：外泌体在细胞之间运输分子具有自然的效果，使其成为递送治疗剂的理想候选者。它们的生物相容性，越过生物障碍的能力和内在的靶向能力提供了重要的优势
通过p38/jnk/slc7a11轴通过靶向CSF1
越来越多的证据表明，外泌体（EXOS）携带的非编码小RNA（miRNA）在多囊卵巢综合征（PCOS）的发展和治疗中起重要作用。在这项研究中，我们证明了PCOS小鼠血清衍生的EXOS促进了颗粒细胞（GCS）螺旋病，并诱导体内PCOS样表型的发生。值得注意的是，EXO miRNA测序与体外增益和功能丧失测定法相结合，表明MiR-128-3p在小鼠的血清中不存在的MiR-128-3p与PCOS的血清中不存在，可调节脂质的过氧化和GC敏感性对肥大诱导的脂质敏感性。从机械上讲，miR-128-3p的直接靶标CSF1的过表达逆转了miR-128-3p的抗肿瘤效应。相反，在CSF1降低的GC中减少了铁凋亡诱导。此外，我们证明了miR-128-3p抑制通过CSF1激活p38/ JNK途径，从而导致NRF2介导的SLC7A11转录下调，从而触发GC铁的过载。此外，鞘内miR-128-3p agomir注射到小鼠卵巢中，改善了PCOS样特征，并恢复了letrozole诱导的小鼠的生育能力。这项研究揭示了基于循环外来的PCOS的病理机制，并提供了miR-128-3p和CSF1在卵巢GC中的作用的第一个证据。该发现预计将为PCOS治疗提供有希望的治疗靶标。
骨髓干细胞与细胞来源的外泌体对大鼠油酸诱导的肺损伤的比较
摘要背景：急性肺损伤及其并发症急性呼吸窘迫综合征是严重的临床疾病，但治疗方法有限。其中，干细胞似乎是一种很有前途的替代疗法。在本研究中，我们首次研究并比较了骨髓干细胞 (BMSCs) 及其外泌体对油酸诱导的大鼠肺损伤的影响。方法：我们通过静脉注射油酸 (60 mg/kg) 来诱导急性肺损伤；此后，我们在注射油酸两小时后将大鼠 BMSCs (1 x 10 6 ) 和外泌体 (通过市售试剂盒从 1 x 10 6 BMSCs 中获得) 静脉注射到尾静脉。24 小时后，通过深度麻醉处死大鼠，获取肺组织。使用苏木精-伊红染色的样本检查，评估出血、白细胞浸润、水肿和增生等参数。流式细胞仪验证了从干细胞培养基中获得的外泌体。结果：肺损伤后注射干细胞和外泌体组分可恢复所有参数；然而，骨髓间充质干细胞的再生能力优于其外泌体组分（p = 0.004）。结论：干细胞及其外泌体组分可被视为治疗大鼠油酸诱导性肺损伤的替代疗法，其母体来源比外泌体更有效；干细胞似乎更有效。HIPPOKRATIA 2024, 28 (3):100-108。
肿瘤衍生的外泌体诱导中性粒细胞浸润和……
Wenchao Bi 1 , Xue Li 2 , Yu Jiang 1 , Tongtong Gao 1 , Huajun Zhao 1 , Qiuju Han 1 , and Jian
2025; 21(1): 40-62. doi: 10.7150/ijbs.95763 综述 外泌体与癌症的关系：形成、诊断和治疗
外泌体是 40–100 nm 的细胞外囊泡 (EV)，几乎所有细胞都会主动分泌。它们起源于细胞内的多囊体，含有蛋白质、核酸和脂质。1983 年，Johnstone 等人。1,2 研究了网织红细胞转化为红细胞的过程，发现红细胞质膜中萌芽的胞内体进一步内陷形成包含各种小囊泡的多囊体。该多囊体与内质网或质膜融合，将小囊泡释放到细胞外 3,4 。1987 年，Johnstone 使用术语“外泌体”来定义该物质 5 。外泌体与细胞的内吞系统关系密切，其合成主要经过内吞、融合、外排三个步骤，并受其他因素 6 的调控。外泌体存在于几乎所有体液中，包括血浆，并发挥重要作用。
膜联蛋白 A6 通过与三阴性乳腺癌细胞中的 SNAP23 相互作用调节促炎细胞因子和外泌体的分泌
摘要 促炎细胞因子通过经典途径从分泌囊泡分泌或通过非经典途径从细胞外囊泡 (EV) 分泌，它们共同在三阴性乳腺癌 (TNBC) 进展中发挥关键作用。膜联蛋白 A6 (AnxA6) 是一种 Ca 2+ 依赖性膜结合蛋白，在 TNBC 中与细胞生长和侵袭性有关。AnxA6 与 EV 相关，但它是否影响促炎细胞因子和/或 EV 的分泌仍有待完全阐明。为了评估 AnxA6 是否影响细胞因子和细胞外囊泡的分泌，我们使用细胞因子阵列分析了对照 AnxA6 表达和 AnxA6 下调的 MDA-MB-468 TNBC 细胞澄清培养上清液中的分泌因子。这表明，AnxA6 下调后，单核细胞趋化蛋白 1 (MCP-1/CCL2)、白细胞介素 8 (IL- 8)、dickkopf1 (DKK1)、血细胞反应蛋白-1 (TSP-1) 和骨桥蛋白 (OPN) 的分泌减少。我们还表明，在 AnxA6 下调的细胞中，小 EV 的分泌显著减少，而 AnxA6 的上调促进了治疗的分泌，也与 Rab7、胆固醇和 MCP-1 水平相关的 EV 增加有关。此外，在 AnxA6 表达细胞中，EV 中的胆固醇含量明显高于 AnxA6 下调的细胞，并且在长期拉帕替尼诱导 AnxA6 上调后。从机制上讲，我们证明 MCP-1 和/或 EVs 的分泌依赖于 AnxA6，这需要 AnxA6 易位到细胞膜并与 SNAP23 相互作用。AnxA6 中和抗体大大降低了 AnxA6 低 TNBC 细胞的存活率，但对表达相对高水平蛋白质的 TNBC 细胞的存活率影响甚微。总之，这些数据表明 AnxA6 促进 EVs 和促炎细胞因子的分泌，这可能对 TNBC 进展至关重要。关键词：膜联蛋白 A6、促炎细胞因子、外泌体、细胞外囊泡、SNAP23、分泌、三阴性乳腺癌简介
再生局部护肤：干细胞和外泌体
再生医学及其分支，再生美学一直是热门话题。对异性抛物率和其他人的研究表明，循环因子可以使衰老的组织恢复活力。已知干细胞具有再生能力，但它们很难在培养或维持中提取，生长。外泌体（EV），30至150 nm的细胞外囊泡已被发现是组织之间通信的一种主要形式。使用干细胞上清液产生理想的EV已成为美学处理的预示治疗方法。使用电动汽车的临床前研究表明，许多好处，包括更快地改善成纤维细胞和愈合伤口的功能。美学中用电动汽车的临床研究很少。因此，电动汽车产生的兴奋应以缺乏可用的治疗产品以及缺乏科学证明的现实主义来审查。
牙纸浆干细胞衍生的外泌体在直接纸浆上限的有效性：体外研究
目的：这种体外调查的目标是确定牙髓干细胞（DPSC）外泌体如何调节内源性DPSC，并将其导航转向矿物质组织再生，无论是单独还是与矿物三明治聚集体（MTA）。材料和方法：对于此研究，使用大鼠门牙收集DPSC。要从DPSC中提取外泌体，使用了一种超速离心方法。流式细胞仪用于表征DPSC-外观，并使用透射电子显微镜测量其大小。DPSC在标准培养基中孵育，并分为三组。第一个用作阴性对照组，仅包含DPSC；在第二组中，DPSC用外泌体处理；在第三组中，DPSC用MTA和外泌体处理。然后，使用细胞活力测定法来帮助细胞增殖。成骨分化。使用单向方差测试分析，然后进行事后测试（P≤0.05），研究了组之间的总体意义。结果：纸浆干细胞外泌体触发DPSC的增殖。MTA与外泌体结合的存在会导致更高的增殖率（P <0.001）。此外，与其他组相比，当用艾丽莎白红染色时，外泌体/MTA组显示出更大的结节形成（p <0.001）。另外，骨钙素的表达是外泌体/MTA组中最大的。结论：DPSC释放的外泌体诱导分化和矿化潜力。此外，MTA和外泌体的组合有可能在临床环境中显着增强无细胞再生牙髓牙齿牙齿牙齿。
